循環(huán)腫瘤細(xì)胞計(jì)數(shù)在胃癌患者中的臨床應(yīng)用

王禮泉，王玉華，崔進(jìn)貝

（山東省濰坊市人民醫(yī)院，山東濰坊 261041）

胃癌是一種嚴(yán)重威脅人民身體健康的疾病，可發(fā)生于任何年齡，但以40～60歲多見，男多于女（約為2∶1）。 血行播散是腫瘤轉(zhuǎn)移的重要途徑，腫瘤細(xì)胞可以通過(guò)血液循環(huán)抵達(dá)任何組織和器官，隨著腫瘤細(xì)胞的不斷增殖，部分細(xì)胞失去相互附著的能力從腫瘤母體脫離，降解、浸潤(rùn)周圍組織進(jìn)入到血液或淋巴系統(tǒng)中。這些自發(fā)或因診療操作進(jìn)入外周血循環(huán)的腫瘤細(xì)胞被稱為CTCs[1-3]。

1 材料與方法

1.1 研究對(duì)象

2009年8月～2010年3月在濰坊市人民醫(yī)院就診的胃癌患者50例，胃潰瘍患者50例，健康志愿者50例，其中，男性98例，女性52例，平均(47±13)歲，各組間性別、年齡無(wú)明顯差異。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 標(biāo)本采集及核細(xì)胞提取 清晨空腹采集確診胃癌患者、胃潰瘍患者、健康志愿者靜脈血各10 ml；加入淋巴細(xì)胞分離液，密度梯度離心方法分離單個(gè)核細(xì)胞。

1.2.2 免疫磁性微珠制備[4,5]磁珠經(jīng)60Co照射滅菌，加HAbl8，磁場(chǎng)中除上清，除去未結(jié)合的單抗，PBS封閉磁珠，4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.3 單個(gè)核細(xì)胞的免疫磁性標(biāo)記[6-8]按照每10 ml血標(biāo)本加入300 μl免疫磁珠的比例，將標(biāo)本分離所得的單個(gè)核細(xì)胞與磁珠混勻，4℃孵育30 min，用分離緩沖液制成1 ml細(xì)胞懸液備用。

1.2.4 免疫磁性分離 將標(biāo)記的細(xì)胞懸液通過(guò)磁性分離柱，并用緩沖液沖洗柱子；將磁性分離柱從磁場(chǎng)中移開，用稀釋緩沖液洗脫柱內(nèi)細(xì)胞；將收集的細(xì)胞液離心后加入緩沖液1 ml，光鏡下細(xì)胞計(jì)數(shù)，取3個(gè)視野的平均值，計(jì)算外周血中癌細(xì)胞的濃度。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

本研究采用SPSS 13.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

50例胃潰瘍患者及50例健康的志愿者外周血中未發(fā)現(xiàn) CTCs，胃癌患者 CTCs數(shù)目為（16.40±8.15）。

3 討論

隨著納米技術(shù)擴(kuò)展應(yīng)用，納米免疫磁珠為腫瘤細(xì)胞生物診斷技術(shù)提供了分離手段，其原理是基于細(xì)胞表面抗原以及某種蛋白與連有免疫磁珠的特異性單抗相結(jié)合，外加磁場(chǎng)后通過(guò)抗體與免疫磁珠相連細(xì)胞和蛋白吸附而滯留在磁場(chǎng)中，由于免疫磁珠表面的單抗只結(jié)合含有特異性抗原的細(xì)胞和蛋白，從而達(dá)到與其他種類的細(xì)胞和蛋白相分離的目的。此種分離技術(shù)將抗原抗體反應(yīng)的高度特異性和免疫磁珠的富集分離作用相結(jié)合，達(dá)到特異性的生物活性物質(zhì)和細(xì)胞的富集和分離效果，使其在臨床醫(yī)學(xué)診斷上具有廣闊的應(yīng)用前景[9]。

絕大多數(shù)胃癌患者無(wú)明顯體征，部分患者有上腹部輕度壓痛。位于幽門竇或胃體的進(jìn)展期胃癌有時(shí)可捫及腫塊，腫塊常呈結(jié)節(jié)狀、質(zhì)硬，當(dāng)腫瘤向鄰近臟器或組織浸潤(rùn)時(shí)，腫塊常固定而不能推動(dòng)，女性患者在中下腹捫及腫塊，常提示為krukenbe瘤可能。轉(zhuǎn)移途徑：直接播散是浸潤(rùn)型胃癌可沿黏膜或漿膜直接向胃壁內(nèi)、食管或十二指腸發(fā)展。癌腫一旦侵及漿膜，即容易向周圍鄰近器官或組織如肝、胰、脾、橫結(jié)腸、空腸、膈肌、大網(wǎng)膜及腹壁等浸潤(rùn)。癌細(xì)胞脫落時(shí)也可種植于腹腔、盆腔、卵巢與直腸膀胱陷窩等處。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移占胃癌轉(zhuǎn)移的70%，胃下部癌腫常轉(zhuǎn)移至幽門下、胃下及腹腔動(dòng)脈旁等淋巴結(jié)，而上部癌腫常轉(zhuǎn)移至胰旁、賁門旁、胃上等淋巴結(jié)。晚期癌可能轉(zhuǎn)移至主動(dòng)脈周圍及膈上淋巴結(jié)。由于腹腔淋巴結(jié)與胸導(dǎo)管直接交通，故可轉(zhuǎn)移至左鎖骨上淋巴結(jié)。部分患者外周血中可發(fā)現(xiàn)癌細(xì)胞，可通過(guò)門靜脈轉(zhuǎn)移至肝臟，并可達(dá)肺、骨、腎、腦、腦膜、脾、皮膚等處。

本研究發(fā)現(xiàn)50例胃潰瘍患者及50例健康的志愿者外周血中未發(fā)現(xiàn) CTCs，胃癌患者 CTCs 數(shù)目為（16.40±8.15），僅在胃癌患者檢測(cè)出CTCs，循環(huán)腫瘤細(xì)胞的檢測(cè)有助于發(fā)現(xiàn)早期腫瘤患者的微轉(zhuǎn)移，重新確定臨床分期，監(jiān)測(cè)術(shù)后患者腫瘤復(fù)發(fā)與轉(zhuǎn)移，評(píng)估預(yù)后，選擇個(gè)體化的治療策略；同時(shí)為胃癌的早期篩查提供新的方法。

[1]Nelson NJ.Circulating tumor cells∶will they be clinically useful[J].J Natl Cancer Inst,2010,102(3)∶146-148.

[2]Kim MY,Oskarsson T,Acharyya S.Tumor self-seeding by circulating cancer cells[J].Cell,2009,139(7)∶1315-1326.

[3]Maestro LM,Sastre J,Rafael SB.Circulating tumor cells in solid tumor in metastatic and localized stages[J].Anticancer Res,2009,29(11)∶4839-4483.

[4]Van der Auwera I,Peeters D,Benoy IH.Circulating tumour cell detection∶a direct comparison between the CellSearch System,the AdnaTest and CK-19/mammaglobin RT-PCR in patients with metastatic breast cancer[J].Br J Cancer,2010,102(2)∶276-284.

[5]Karl A,Tritschler S.Hofmann S.Perioperative search for circulating tumor cells in patients undergoing radical cystectomy for bladder cancer[J].Eur J Med Res,2009,14(11)∶487-490.

[6]Dotan E,Cohen SJ,Alpaugh KR.Circulating tumor cells∶evolving evidence and future challenges[J].Oncologist,2009,14(11)∶1070-1082.

[7]Martín M,García-Sáenz JA,Maestro De las Casas ML.Circulating tumor cells in metastatic breast cancer∶timing of blood extraction for analysis[J].Anticancer Res,2009,29(10)∶4185-4187.

[8]Stebbing J,Jiao LR.Circulating tumour cells as more than prognostic markers[J].Lancet Oncol,2009,10(12)∶1138-1139.

[9]黃同海.循環(huán)腫瘤細(xì)胞檢測(cè)的研究新進(jìn)展[J].中國(guó)腫瘤臨床,2007,34(8)∶476-477.