用微波技術(shù)處理腎穿組織的新方法

王宏艷，王玉國，孫紅年，張淑東

（1.黑龍江省大慶油田總醫(yī)院病理科，黑龍江大慶 163000；2.黑龍江省大慶市東海醫(yī)院急診科，黑龍江大慶 163000）

腎活檢組織病理檢查在腎活檢病理診斷中具有重要價值。使用多種病理學(xué)檢查方法，如光學(xué)顯微鏡、免疫熒光檢查和電子顯微鏡下的超微結(jié)構(gòu)檢查等，對病理切片制作質(zhì)量要求很高。根據(jù)腎臟生理特殊的形態(tài)、結(jié)構(gòu)，在常規(guī)病理技術(shù)的基礎(chǔ)上，吸收、保留、創(chuàng)新形成一套獨特的適應(yīng)腎活檢病理診斷需要的技術(shù)，一般皮腎穿刺的腎臟組織標(biāo)本體積很小，通過特殊染色可以顯現(xiàn)標(biāo)本中特殊的物質(zhì)，如基底膜、免疫復(fù)合物等，除了常規(guī)HE染色外，還需要多種特殊染色方法，PSA法、Masson法和過碘酸六胺銀 （periodic acid-silver methenamine，PASM）染色。大部分醫(yī)院處理腎穿組織的方法常常是將腎穿組織與常規(guī)標(biāo)本放在一起，在同一臺脫水機(jī)中進(jìn)行處理，病理活檢報告至少需要3 d。因此，常規(guī)的特殊染色制作比較費時，尤其是，控制不好往往失敗。我們將微波輻射技術(shù)應(yīng)用于腎活檢組織的過程中，快速優(yōu)質(zhì)的處理只需要1 h，則可以得出病理診斷結(jié)果。臨床實踐證明，其具有快速省時，染色效果好，不易脫片等優(yōu)點，現(xiàn)介紹如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集我院每天的腎穿標(biāo)本。使用天津產(chǎn)的MS2586DTS型微波爐。4%中性福爾馬林、90%乙醇伊紅、95%乙醇、無水乙醇、二甲苯、2%松香石蠟。

1.2 方法

1.2.1 固定

常規(guī)方法是將送檢的腎活檢標(biāo)本浸入4%中性福爾馬林溶液中固定8～10 h，用時較長。該技術(shù)是將取材后的腎穿標(biāo)本放入15 ml的小玻璃標(biāo)本瓶內(nèi)，向標(biāo)本瓶內(nèi)注入10 ml 4%中性福爾馬林后放入微波爐中，同時放入一燒杯水，大約100 ml，有利于調(diào)節(jié)爐內(nèi)溫度。使用中檔火力，輸出功率為60 W，恒溫75℃，3～5 min，組織由紅變白后即為固定完成。因為腎組織標(biāo)本體積小，易黏附于容器壁而影響固定效果，所以置入固定液后，應(yīng)適當(dāng)搖晃使標(biāo)本充分浸泡于固定液中。

1.2.2 脫水

腎組織固定后用乙醇作為脫水劑，為了避免脫水過程中引起組織的強烈收縮和變形，應(yīng)采用由低向高梯度漸進(jìn)式乙醇濃度配合微波脫水。具體如下：

1.2.2.1 標(biāo)本瓶取出后，倒出瓶中液體，注入90%乙醇伊紅煤染，放入微波爐中，同樣功率加熱3 min。

1.2.2.2 標(biāo)本瓶取出后，倒出瓶中液體，注入95%乙醇，放在微波爐中，同樣功率加熱3 min，并重復(fù)操作1次。

1.2.2.3 標(biāo)本瓶取出后，倒出瓶中液體，注入無水乙醇，放在微波爐中，同樣功率加熱3 min，重復(fù)操作2次。

1.2.3 透明

透明劑選用二甲苯。取出標(biāo)本瓶后，倒出瓶中液體，向標(biāo)本瓶中注入二甲苯進(jìn)行透明，放在微波爐中用中高檔火力，輸出功率為80%，恒溫90℃，加熱3 min。此過程時間不宜過長，否則容易使組織收縮變脆。

1.2.4 浸蠟

浸蠟是組織處理中較為重要的一步，注意控制石蠟液體的溫度，應(yīng)選擇熔點為58～60℃的石蠟，浸蠟溫度控制在比石蠟熔點高5～6℃，因為石蠟溫度過高會導(dǎo)致腎組織干脆，切片容易出現(xiàn)龜裂現(xiàn)象，浸蠟次數(shù)不應(yīng)少于三缸，否則透明劑去除不干凈，影響切片質(zhì)量。該技術(shù)的操作是將標(biāo)本瓶取出后，倒出瓶中液體，注入2%松香石蠟浸蠟，放在微波爐中，中檔火力，輸出功率為60 W，恒溫75℃，加熱5～7 min。包埋、切片、染色、封片同常規(guī)，此方法可以一次同時處理20～30個標(biāo)本。

2 結(jié)果

腎穿組織經(jīng)過微波脫水、透明、浸蠟等處理后，與常規(guī)制片對照，細(xì)胞收縮無差別，微波溫度控制在90℃以下，酶不會失去活性。因此不影響免疫組化和特殊染色的結(jié)果。

3 討論

微波是一種高頻電磁波，近來已成功地應(yīng)用于光鏡、電鏡及免疫學(xué)的研究，特別是在組織固定、脫水及免疫組織化學(xué)技術(shù)中的應(yīng)用已日益廣泛。筆者采用微波輻射技術(shù)與常規(guī)制片技術(shù)相比較，在腎活檢組織的切片中取得了良好的效果。與常規(guī)法相比，微波制片具有較大的優(yōu)勢。

腎臟組織結(jié)構(gòu)致密，細(xì)胞成分多，皮腎穿刺的腎臟組織標(biāo)本體積很小，常規(guī)方法制片時切片容易碎，易脫片，組織切片質(zhì)量不好，影響正常診斷。尤其是在大部分醫(yī)院中，常規(guī)處理腎穿組織需要3 d，筆者采用微波快速處理腎穿組織，既縮短了時間，又避免了常規(guī)用同一臺脫水機(jī)同時處理大小標(biāo)本的不理想效果。由于腎臟組織結(jié)構(gòu)致密，細(xì)胞成分多，要求組織切片厚度2～3μm為宜，太厚會造成細(xì)胞成分重疊，出現(xiàn)假象，影響正常診斷，而常規(guī)的方法在脫水機(jī)中處理時，由于使腎穿組織脫水、透明、浸蠟等過程相對時間過長，造成組織脆硬，切片時如果過厚造成細(xì)胞成分重疊，切片過薄容易使切片破碎、易脫片等現(xiàn)象，而用微波處理的腎穿標(biāo)本大大縮短了脫水、透明、浸蠟等過程所用的時間，克服了組織脆硬缺點，使組織結(jié)構(gòu)、細(xì)胞內(nèi)成分保持良好，特別是抗原得到良好保存，從而不影響切片及免疫組化和特殊染色效果。因此，微波對腎穿組織的快速處理是一種簡單、快捷、經(jīng)濟(jì)、實用、理想的常規(guī)病理制片的新技術(shù)。

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