腫瘤干細(xì)胞與消化道腫瘤的研究進(jìn)展

張 祎 魏素菊 韓文峰

(河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院,河北 石家莊 050011)

研究者發(fā)現(xiàn)腫瘤干細(xì)胞(CSC)在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、復(fù)發(fā)及轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮著重要作用。CSC是存在于腫瘤組織中具有干細(xì)胞樣能力的腫瘤細(xì)胞亞群,一個CSC能夠產(chǎn)生整個腫瘤組織的(處于不同分化階段的)所有腫瘤細(xì)胞〔1〕。CSC概念的提出為研究腫瘤細(xì)胞的生物學(xué)特性提供了新思路,并為腫瘤的臨床治療提供了新靶點(diǎn),目前已逐漸成為腫瘤防治研究的新的熱點(diǎn)。

1 CSC的起源

①干細(xì)胞:目前已經(jīng)公認(rèn)白血病是由帶有白細(xì)胞分化抗原(CD)CD96+、CD34+、CD38-標(biāo)記的白血病干細(xì)胞引起的惡性腫瘤〔2〕。 ②成熟體細(xì)胞:Cocciadiferro等〔3〕通過研究干細(xì)胞標(biāo)志物胚胎干細(xì)胞相關(guān)蛋白(Oct-4)、zeste基因 12抑制劑(SUZ-12)和表皮生長因子(EGF)家族成員(Cripto-1)在雄激素反應(yīng)型 LNCaP和非反應(yīng)型PC3細(xì)胞系中的表達(dá)認(rèn)為前列腺癌CSC可能來源于已分化的成熟細(xì)胞。③CSC異常的細(xì)胞融合產(chǎn)生的雜交細(xì)胞。④靜止的胚胎干細(xì)胞:人們發(fā)現(xiàn)在很多CSC中表達(dá)一些胚胎干細(xì)胞的標(biāo)記基因如胚胎干細(xì)胞相關(guān)蛋白、HMG盒轉(zhuǎn)錄因子(Sox2)等〔4〕。⑤與病毒有關(guān):Chaudhary博士認(rèn)為病毒可促進(jìn)變異細(xì)胞群進(jìn)一步生長和復(fù)制,最終完全癌變〔5〕。⑥與骨髓來源的細(xì)胞有關(guān):近期研究表明,胃癌的 CSC起源于骨髓來源的細(xì)胞〔6〕。

2 CSC生成的調(diào)節(jié)

2.1 微環(huán)境與CSC的發(fā)生 微環(huán)境可以決定干細(xì)胞的分化方向?；チ黾?xì)胞注入鼠囊胚內(nèi)細(xì)胞團(tuán)可以形成正常胚胎?；蛐驼５呐咛ジ杉?xì)胞向同系小鼠腹腔移植可產(chǎn)生極度惡性的腫瘤。

2.2 細(xì)胞周期調(diào)節(jié)因子與 CSC的發(fā)生 Yuan等〔7〕在進(jìn)行細(xì)胞周期調(diào)節(jié)因子 p18完全缺失的造血細(xì)胞重建試驗(yàn)后發(fā)現(xiàn)此細(xì)胞具有更強(qiáng)的自我更新能力,而且在干細(xì)胞水平?jīng)]有向白血病細(xì)胞轉(zhuǎn)化,但一小部分接受移植的鼠出現(xiàn)了急性T淋巴細(xì)胞白血病,但白血病的發(fā)展伴隨抑癌蛋白 p15或 p16基因啟動子區(qū)的甲基化及細(xì)胞周期調(diào)節(jié)因子p18基因的缺失,且從這些發(fā)生白血病的小鼠中分離的造血干細(xì)胞不會將白血病的表型轉(zhuǎn)移到別的受體鼠,表明細(xì)胞周期調(diào)節(jié)因子p18下調(diào)造成干細(xì)胞自我更新加強(qiáng)后不足以引起白血病發(fā)生,但抑癌蛋白 p15或p 16破壞后可能促進(jìn)了白血病干細(xì)胞的形成并影響正常造血過程的進(jìn)行。

3 CSC的識別、分離與鑒定

CSC的識別、分離與鑒定是目前研究重點(diǎn)。基于對正常干細(xì)胞的認(rèn)識,且因CSC表面標(biāo)記(膜蛋白、黏附分子及受體等)與一般腫瘤細(xì)胞不同,可使用正常干細(xì)胞標(biāo)記物,采用流式細(xì)胞儀或免疫磁珠法進(jìn)行分選。正常干細(xì)胞標(biāo)記物有巢蛋白、白細(xì)胞分化抗原 CD133等。Beier等〔8〕發(fā)現(xiàn)人腦膠質(zhì)瘤組織中腦CSC的表面標(biāo)志物為 CD133+。Eramo等報道,注射 104個只占肺癌組織 0.32%～1.13%的CD133+的細(xì)胞,可在重度聯(lián)合免疫缺陷(SCID)小鼠中形成移植瘤,實(shí)驗(yàn)還證實(shí) CD133+細(xì)胞在含上皮生長因子的無血清培養(yǎng)基中形成瘤球,具有多向分化和自我更新能力,認(rèn)為CD133可作為肺癌干細(xì)胞標(biāo)志物,他們還也發(fā)現(xiàn)肺癌干細(xì)胞屬于 CD133+細(xì)胞〔9〕。 Levina等〔10〕將 H460肺癌細(xì)胞株培養(yǎng)細(xì)胞通過阿霉素(ADM)、順鉑(CDDP)、依托泊苷(VP-16)化療后得到的細(xì)胞能形成新的克隆,且表達(dá)CD133、干細(xì)胞因子受體(CD117,又叫 C-KIT)、胚胎干細(xì)胞相關(guān)蛋白等干細(xì)胞標(biāo)志物,分化后祖細(xì)胞失去 CD133表達(dá),重新表達(dá)細(xì)胞角蛋白 8/18(CK 8/18)和獲得化療藥物敏感性。作者認(rèn)為這些細(xì)胞就是肺癌干細(xì)胞,化療能導(dǎo)致肺癌干細(xì)胞的增殖和抑制其分化,這與其大量的細(xì)胞因子網(wǎng)產(chǎn)物有關(guān)。董強(qiáng)剛等〔11〕研究卻發(fā)現(xiàn),在 A 549和 SPC-A 1肺腺癌細(xì)胞株中應(yīng)用磁性細(xì)胞分選(MACS)CSC時發(fā)現(xiàn) CD133-、多藥耐藥蛋白(MRCP+)、CD24+、表皮生長因子受體(EGFR+)、胰島素樣生長因子受體(IGF-R1+)的細(xì)胞具備 CSC特征。Jiang等〔12〕研究發(fā)現(xiàn)熒光活化細(xì)胞分選系統(tǒng)(FACS)分離出的肺癌細(xì)胞高表達(dá)醛脫氫酶 1(ALDH1)和 CD133在體外高表達(dá) CSC特征,包括無限增殖、自我更新、分化和對化療耐藥的能力,體外實(shí)驗(yàn)證明醛脫氫酶 1陽性細(xì)胞可形成腫瘤,具有與原來腫瘤相似的異質(zhì)性。醛脫氫酶 1成為肺癌干細(xì)胞的標(biāo)志。

巢蛋白是神經(jīng)祖細(xì)胞的生物學(xué)標(biāo)記。Kondo等〔13〕還發(fā)現(xiàn)體外長期培養(yǎng)的腫瘤細(xì)胞系中也存在類似的CSC,稱為邊緣細(xì)胞群(side population,SP)。因干細(xì)胞表達(dá)乳腺癌耐藥蛋白(BCRP),可排斥熒光染料羅丹明 123(Rho123)和 Hoechst33342,通過熒光染色技術(shù)結(jié)合流式細(xì)胞分選技術(shù)即熒光活化細(xì)胞分選系統(tǒng)分選腫瘤細(xì)胞,沒有熒光的那群不被染色的細(xì)胞叫邊緣細(xì)胞群。Han〔14〕研究發(fā)現(xiàn)具有 CSC特性的 MCF7和 T47D乳腺癌細(xì)胞系存在邊緣細(xì)胞群且表達(dá)乳腺癌干細(xì)胞分子標(biāo)志物,其邊緣細(xì)胞群在體外形成腫瘤,且邊緣細(xì)胞群比非邊緣細(xì)胞群對放射線更易產(chǎn)生耐受,進(jìn)一步證明了邊緣細(xì)胞群中存在 CSC。

CSC的鑒定主要有體內(nèi)移植和體外培養(yǎng)兩個方面〔14〕。體內(nèi)移植是將分離所得 CSC和一般腫瘤細(xì)胞分別移植到非肥胖性糖尿病/重度聯(lián)合免疫缺陷(NOD/SCID)小鼠體內(nèi),因 CSC僅需少量即可形成腫瘤;而一般腫瘤細(xì)胞需要大量細(xì)胞才能形成腫瘤。Bussolati〔15〕研究發(fā)現(xiàn)了 CSC存在于腎細(xì)胞癌中。間充質(zhì)干細(xì)胞存在于正常大鼠腎臟中,實(shí)驗(yàn)挑選 5個腎細(xì)胞癌患者,其癌細(xì)胞中均表達(dá)間充質(zhì)干細(xì)胞標(biāo)志 CD105,將 CD105(+)細(xì)胞群注射到重度聯(lián)合免疫缺陷小鼠體內(nèi),這些細(xì)胞群表現(xiàn)出致瘤性,克隆出具有 CD105(+)的細(xì)胞,觀察到 CD105(+)的細(xì)胞有以下干細(xì)胞特征:①具有巢蛋白,干細(xì)胞調(diào)控因子(Nanog),胚胎干細(xì)胞相關(guān)蛋白等干細(xì)胞表面分子標(biāo)志;②有克隆形成能力;③有形成瘤球黏著力;④體外生長可分化為內(nèi)皮和上皮細(xì)胞;⑤體外移植可形成 CD105抗原(+)具有致瘤性的細(xì)胞群和 CD105抗原(-)的非致瘤性細(xì)胞群。

體外培養(yǎng)采用無血清培養(yǎng)基,通過集落形成實(shí)驗(yàn)比較兩者差異。目前有學(xué)者提出,微流控芯片技術(shù)可發(fā)現(xiàn)更多CSC生物標(biāo)記,作為識別與鑒定 CSC的方法〔16〕。最近,Cho等〔17〕將用流式細(xì)胞分選出的胸腺抗原 1(Thy1+)CD24+乳腺腫瘤細(xì)胞注射到動物模型中,發(fā)現(xiàn)占 1%～4%的Thy1+CD24+相比 Thy1-CD24-細(xì)胞含有更多具有致瘤性的成腫瘤細(xì)胞,且傳代的腫瘤與原發(fā)腫瘤在表型和生物學(xué)特性上具有很多相似性。生物芯片技術(shù)發(fā)現(xiàn)兩種細(xì)胞的基因表達(dá)存在差異,這為評估乳腺癌患者預(yù)后提供了新思路。但還有學(xué)者認(rèn)為因?qū)?CSC的鑒定采用了異種移植,因此對CSC學(xué)說以及其是否適用于所有類型的癌癥仍存在爭議。Kelly等〔18〕認(rèn)為是人和小鼠細(xì)胞因子受體不相容導(dǎo)致了實(shí)驗(yàn)結(jié)果的偏差,通過小鼠腫瘤細(xì)胞移植均產(chǎn)生淋巴瘤的實(shí)驗(yàn),認(rèn)為這類細(xì)胞應(yīng)被稱為“腫瘤傳播細(xì)胞”。Adams等〔19〕通過實(shí)驗(yàn)認(rèn)為異種移植系統(tǒng)低估了能維持人類腫瘤生長的細(xì)胞比例。Yun等〔20〕還提出轉(zhuǎn)基因小鼠模型可用來檢測小鼠對人 CSC的宿主反應(yīng)。

4 CSC與消化道腫瘤的關(guān)系

目前,消化系統(tǒng)腫瘤發(fā)病率較高,治愈率低,因此消化道腫瘤中是否存在 CSC引起了大家的關(guān)注。Haraguchi等〔21〕在 16種消化系統(tǒng)腫瘤細(xì)胞系中分離到了邊緣細(xì)胞群,分布占細(xì)胞總數(shù)的 0.3%～2.2%,在肝癌細(xì)胞系 Huh7與結(jié)腸癌細(xì)胞系8W480中,邊緣細(xì)胞群表現(xiàn)出自我更新以及分化能力,能夠產(chǎn)生邊緣細(xì)胞群和非邊緣細(xì)胞群。說明消化系統(tǒng)的一些腫瘤中含有擁有干細(xì)胞特征的邊緣細(xì)胞亞群。

4.1 CSC與口腔癌 Zhang等〔22〕分離口腔鱗狀細(xì)胞癌(OCC)中邊緣細(xì)胞群和非邊緣細(xì)胞群并比較二者差異,邊緣細(xì)胞群在裸鼠中有更強(qiáng)的集落形成能力,形成腫瘤需要 10 000個邊緣細(xì)胞群細(xì)胞,而需要 1 000 000個非邊緣細(xì)胞群細(xì)胞,邊緣細(xì)胞群細(xì)胞高表達(dá)多藥耐藥蛋白(ABCG2)、ABCB1、CD44、胚胎干細(xì)胞相關(guān)蛋白(oct-4),致癌基因(Bmi-1),神經(jīng)系統(tǒng)多梳蛋白(NSPc1)和細(xì)胞角蛋白19,并且邊緣細(xì)胞群細(xì)胞可分化形成邊緣細(xì)胞群和非邊緣細(xì)胞群,而非邊緣細(xì)胞群只能分化成非邊緣細(xì)胞群?？谇击[狀細(xì)胞癌的邊緣細(xì)胞群細(xì)胞具有 CSC表型且對口腔癌的發(fā)生起重要作用。

4.2 CSC與胃癌 Takaishi等研究通過克隆形成實(shí)驗(yàn)和小鼠體內(nèi)成瘤實(shí)驗(yàn)證明胃 Ca中有 CSC,且成瘤試驗(yàn)與胃Ca細(xì)胞的一種表面分子標(biāo)記物一致,而利用這種分子篩選的陽性細(xì)胞具有良好的克隆形態(tài)能力與體內(nèi)成瘤能力,這些陽性細(xì)胞大概占腫瘤細(xì)胞的 1%～10%,Takaishi等的研究結(jié)果有力地支持了存在胃 Ca干細(xì)胞的觀點(diǎn)〔23〕,Fukuda等也在胃 Ca細(xì)胞系中分離到一些具有腫瘤形成能力的細(xì)胞〔24〕。

4.3 CSC與結(jié)腸癌 但對CD133是否可作為結(jié)腸癌干細(xì)胞表面分子標(biāo)志物的回答出現(xiàn)了分歧,Dalerba等〔25〕發(fā)現(xiàn)動物模型嗜同種的鈣非依賴性上皮細(xì)胞黏附分子(EpCAM)high/CD44+的腫瘤細(xì)胞具有腫瘤干細(xì)胞特性,還高表達(dá)乙醛脫氫酶 1,且表達(dá) CD133+的細(xì)胞群要大于 CD44+細(xì)胞群,進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn),間充質(zhì)干細(xì)胞標(biāo)記物 CD166抗原分子可作為結(jié)直腸癌干細(xì)胞獨(dú)立的標(biāo)記物;因此,他們認(rèn)為 EpCAMhigh/CD44+/CD166+比CD133+能更好地作為結(jié)直腸癌干細(xì)胞的標(biāo)記物。

Du等〔26〕認(rèn)為 CD44比 CD133更適合作為結(jié)直腸干細(xì)胞的分子標(biāo)記物。但后來 Shmelkov等〔27〕通過建立半乳糖苷酶基因(LacZ)敲入小鼠模型(CD133lacZ/+),即半乳糖苷酶基因的表達(dá)是由內(nèi)源的 CD133啟動子驅(qū)動的;發(fā)現(xiàn) CD133既表達(dá)于干細(xì)胞,也表達(dá)于分化的結(jié)腸上皮細(xì)胞中,但在轉(zhuǎn)移結(jié)腸癌和具有致瘤性的細(xì)胞中并不都表達(dá) CD133,且研究發(fā)現(xiàn)表達(dá)CD133+和CD133-的轉(zhuǎn)移腫瘤細(xì)胞均具有致瘤性,而且具有轉(zhuǎn)移性的CD133-的腫瘤細(xì)胞可以形成侵襲性更強(qiáng)的腫瘤,并表達(dá)典型成腫瘤細(xì)胞的表型標(biāo)記物 CD44(CD44+CD24-),而表達(dá)CD133-的細(xì)胞中為 CD44-CD24+。因此,CD133+是否能作為鑒定結(jié)腸癌干細(xì)胞的標(biāo)記還需要進(jìn)一步的研究證實(shí)。

4.4 CSC與肝癌 原發(fā)性肝癌不同病理組織類型均可表達(dá)細(xì)胞角蛋白 7(CK7)、細(xì)胞角蛋白 19、甲胎蛋白、干細(xì)胞因子受體和胸腺抗原 1等多種肝干細(xì)胞標(biāo)志,暗示了肝癌干細(xì)胞可能起源于肝干細(xì)胞。Chiba等〔28〕利用肝細(xì)胞癌(HCC)細(xì)胞系研究邊緣細(xì)胞群在非肥胖性糖尿病/重度聯(lián)合免疫缺陷小鼠致瘤的作用和 CSC的作用,實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明邊緣細(xì)胞群具有強(qiáng)致瘤性、更高增殖潛能和抗細(xì)胞凋亡的特性,細(xì)胞免疫化學(xué)檢查顯示邊緣細(xì)胞群保持了大量的肝細(xì)胞和膽管細(xì)胞系的特征,進(jìn)一步證實(shí)了肝癌中 CSC的存在。Yamashita〔29〕發(fā)現(xiàn) 235個肝癌標(biāo)本可分離出嗜同種的鈣非依賴性上皮細(xì)胞黏附分子(Ep CAM+)甲胎蛋白 AFP(+)和EpCAM(-)AFP(-)兩種細(xì)胞,通過對基因表達(dá)和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路分析得出EpCAM(+)AFP(+)的肝癌細(xì)胞亞型具有肝癌干細(xì)胞或前體細(xì)胞的特征,EpCAM(+)肝癌細(xì)胞具有干細(xì)胞的自我更新和分化能力,可使非肥胖性糖尿病/重度聯(lián)合免疫缺陷小鼠形成高侵襲性肝細(xì)胞癌。因此肝細(xì)胞癌的生長和侵襲是由一組嗜同種的鈣非依賴性上皮細(xì)胞黏附分子(+)細(xì)胞決定的,進(jìn)一步用小干擾 RNA(SiRNA)干擾Wnt/beta-catenin通路信號肽可減弱 EpCAM(+)肝癌細(xì)胞活性〔30〕。實(shí)驗(yàn)表明〔31〕Wnt信號通路異常激活賦予了肝干細(xì)胞的高增殖潛能和抗細(xì)胞凋亡的特性,嗜同種的鈣非依賴性上皮細(xì)胞黏附分子可成為肝癌的分子治療靶點(diǎn)。

4.5 CSC與胰腺癌 胰腺診斷明確時多處于進(jìn)展期,對常規(guī)化療和放療都不敏感,5年存活率只有 3%。Heidt等〔32〕用人胰腺癌組織制成的細(xì)胞懸液中,候選干細(xì)胞標(biāo)志 CD44、CD24和上皮細(xì)胞膜抗原(ESA)的表達(dá)率為 3%～8%,在傳代細(xì)胞中亦保持較為恒定的比例。以 CD44、CD24和上皮細(xì)胞膜抗原為表型分選細(xì)胞分別在 6/9和 3/11只小鼠中成瘤,而未分選的細(xì)胞需相應(yīng)分選細(xì)胞數(shù)量的 100倍才有腫瘤生長。因此認(rèn)為,CD44、CD24和上皮細(xì)胞膜抗原是胰腺腺癌干細(xì)胞的標(biāo)志〔32〕。研究表明〔32〕,僅占胰腺癌細(xì)胞 0.2%～0.8%的 CD44+CD24+ESA+細(xì)胞的致瘤能力是其他腫瘤細(xì)胞的 100倍,注射 100個細(xì)胞后約 50%的動物形成組織學(xué)上不可分辨的相同腫瘤,表現(xiàn)出高度自我更新和分化等干細(xì)胞的特性,同時其 SonicHedgehog基因(SHH)的表達(dá)有所升高,說明 SHH信號通路對于自我更新同樣具有調(diào)節(jié)作用〔32〕。通過以上 Wnt信號通路和 SHH信號通路在肝癌和胰腺癌等不同組織的干細(xì)胞的自我更新的調(diào)節(jié)作用,使得信號通路與自我更新關(guān)系的研究更加有趣。

5 實(shí)體CSC的研究意義和未來研究方向

5.1 研究意義 干細(xì)胞表達(dá)多藥耐藥蛋白(MDR1)及ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白,對化療不敏感,若 CSC高表達(dá)這類分子,也有可能對治療耐受,這解釋了腫瘤治療后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移現(xiàn)象。傳統(tǒng)腫瘤治療都是針對所有的腫瘤細(xì)胞,且認(rèn)為腫瘤細(xì)胞具有功能同質(zhì)性,而實(shí)際上如果腫瘤源于 CSC,先前諸多關(guān)于腫瘤發(fā)生發(fā)展機(jī)制,細(xì)胞信號途徑的等的研究成果需要重新評價,因?yàn)镃SC的生物學(xué)行為與其他腫瘤細(xì)胞可能有質(zhì)的差別,如果能有效選擇性殺傷 CSC,挖掘出針對 CSC而不損傷正常干細(xì)胞的治療新靶點(diǎn),就會為臨床徹底治愈腫瘤帶來新希望。

5.2 未來的研究方向 首先是對正常組織干細(xì)胞生物學(xué)行為、細(xì)胞表面標(biāo)志物的研究,為更多實(shí)體CSC的分離鑒定提供理論支持。第二,研究實(shí)體CSC與正常組織干細(xì)胞及其他異質(zhì)腫瘤細(xì)胞的差異基因及信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途經(jīng)的差異進(jìn)行功能研究,可以闡明 CSC的起源以及腫瘤發(fā)生發(fā)展的基本機(jī)制,為治療實(shí)體腫瘤提供新靶點(diǎn)。因 CSC的含量極少且不斷分化,所以發(fā)展高效的體外培養(yǎng)系統(tǒng)、細(xì)胞擴(kuò)增技術(shù)及維持干細(xì)胞未分化狀態(tài)技術(shù)是今后研究的艱巨任務(wù)。

1 Marotta LLC,Polyak K.Cancer stem cells:a model in the making〔J〕.Curr Opin Genet Dev,2009;19(1):44-50.

2 Hosen N,Park CY,Tatsumi N,et al.CD96is a leukemic stem cell-specific marker in human acutemyeloid leukemia〔J〕.Pro Natl Acad Sci USA,2007;104(26):11008-13.

3 Cocciadiferro L,Miceli V,Kang KS,et al.Profiling cancer stem cells in androgen-responsive and refractory human prostate tumor cell lines〔J〕.Ann N Y Acad Sci,2009;1155(1):257-62.

4 錢其軍,劉 佳,吳孟超 .CSC起源與爭論〔J〕.中國腫瘤生物治療雜志,2007;14(6):501-4.

5 Zhao J,Punj V,Matta H,et al.K13 blocks KSHV lytic replication and deregulates vL6 and hL6 expression:a model of lytic replication induced clonal selection in viral oncogenesis〔J〕.PloS ONE,2007;2(10):e1067.

6 Ando S,Abe R,Sasaki M,et al.Bone marrow-derived cells are not theorigin of the cancer stem cells inultraviolet-induced skin cancer〔J〕.Am J Pathol,2009;174(2):595-601.

7 Yuan Y,Shen H,Franklin DS,et al.In vivo self-renewing divisions of haematopoietic stem cells are increased in the absence of the early G1-phase inhibitor,p 18INK4C〔J〕.Nat Cell Biol,2004;6(5):436-42.

8 Beier D,Hau P,Proescholdt M,et al.CD133(+)and CD133(-)glioblastoma-derived cancer stemcells show differential growth characteristics and molecular profiles〔J〕.Cancer Res,2007;67(9):4010-5.

9 Eramo A,Lotti F,Sette G,et al.Identification and expansion of the tumorigenic lung cancer stem cell population〔J〕.Cell Death Differ,2008;15(3):504-14.

10 Levina V,Marrangoli AM,DeMarco R,et al.Drug-selected human lung cancer stem cells:cytokine network,tumorigenic and metastatic properties〔J〕.Plos ONE,2008;3(8):e3077.

11 董強(qiáng)剛,姚 明,耿 沁,等 .人肺腺癌干細(xì)胞的分離與鑒定〔J〕.腫瘤,2008;28(1):1-7.

12 Jiang F,Qiu Q,Khanna A,et al.Aldehyde dehydrogenase 1 is a tumor stem cell-associated marker in lung cancer〔J〕.Mol Cancer Res,2009;7(3):330-8.

13 Kondo T,Setoguchi T,Taga T,et al.Persistence of a small sub-population of cancer stemlike cells in the C6 glloma cell line〔J〕.Proc Natl Acad Sci USA,2004;101(3):781-6.

14 Han JS,Crowe DL.Tumor initiating cancerstem cellsfrom human breast cancer cell lines〔J〕.Int J Oncol,2009;34(5):1449-53.

15 Yun K,Tennent B.Cancer stem cells〔J〕.Drug discovery today:Disease Models,2008;4(1):47-52.

16 Bussolati B,Bruno S,Grange C,et al.Identification of a tumor-initiating stem cell population in human renal carcinomas〔J〕.FASEBJ,2008;22(10):3696-705.

17 Sunitha N,Lecia V,Shyamala M,et al.Isolation of rare circulating tumor cells in cancer patients by microchip technology〔J〕.Nature,2007;450(7173):1235-9.

18 Cho RW,Wang X,Diehn M,et al.Isolation and molecular characterization of cancer stemcells in MMTV-Wnt-1murine breast tumors〔J〕.Stem Cells,2008;26(2):364-71.

19 Kelly PN,Dakic A,Adams JM,et al.Tumor growth need not be driven by rare cancer stem cells〔J〕.Science,2007;317(5836):337.

20 Adams JM,Kelly PN,Dakic A,et al.Technical comments:response to comment on“tumor growth need not bedriven by rare cancer stemcells”〔J〕.Science,2007;318(5837):1722d.

21 Haraguchi N,Utsunomiya T,Inoue H,et al.Characterization of a side population of cancer cells from human gastrointestinal system〔J〕.Stem Cells,2006;24(3):506-13.

22 Zhang P,Zhang Y,Mao L,et al.Side population in oral squamous cell carcinoma possesses tumor stem cell phenotypes〔J〕.Cancer Lett,2009;277(2):227-34.

23 Takaishi S,Okumura T,Wang TC.Gastric cancer stem cells〔J〕.J Clin Oncol,2008;26(17):2876-82.

24 Fukuda K,Saikawa Y,Ohashi M,et al.Tumor initiating potontial of side population cells in human gastric cancer〔J〕.Int JOncol,2009;34(5):2101-7.

25 Dalerba P,Dylla SJ,Park IK,et al.Phenotypic characterization of human colorectal cancer stem cells〔J〕.Proc NatlAcad Sci US A,2007;104(24):10158-63.

26 Du L,WangH,He L,et al.CD44is of functional importance for colorectal cancer stem cells〔J〕.Clin Cancer Res,2008;14(4):6751-60.

27 Shmelkov SV,Butler JM,Hooper AT,et al.CD133 expression is not restricted to stem cells,and both CD133+and CD133-metastatic colon cancer cells initiate tumors〔J〕.J Clin Invest,2008;118(6):2111-20.

28 Yang ZF,Ngai P,Ho DW,et al.Identification of local and circulating cancer stem cells in human liver cancer〔J〕.Hepatology,2008;47(3):919-28.

29 周思朗,李 鵬,曹漫明,等.大鼠肝癌干生物學(xué)行為研究〔J〕.中華肝臟病雜志,2006;14(5):364-6.

30 Chiba T,Kita K,Zheng YW,et al.Side population purified from hepatocellular carcinoma cells harbors cancer stem cell-like properties〔J〕.Hepatology,2006;44(1):240-51.

31 Yamashita T,Ji J,Budhu A,et al.EpCAM-positive hepatocellular carcinoma cells are tumor-initiating cells with stem/progenitor cell features〔J〕.Gastroenterology,2009;136(3):1012-24.

32 Heidt DG,Li C,Mollenberg N,et al.Identification of pancreatic cancer stem cells〔J〕.Cancer Res,2006;130:194-5.