細穗兔兒風的化學成分研究Δ

羅藝萍，趙興堂，趙靜峰，羊曉東#，李良

（1.云南大學教育部自然資源藥物化學重點實驗室，昆明市 650091；2.思茅師范高等?？茖W校生命科學系，普洱市 665000）

細穗兔兒風（Ainsliaea spicata）系菊科兔兒風屬植物，又名腎炎草、卵葉寬穗兔兒風、馬蹄草等，主要分布于云南、廣西、貴州等地，印度和不丹也有分布[1]。該植物在滇南地區(qū)民間以全草入藥，具有清熱、利濕、止咳和解毒的功效，主治急、慢性腎炎，腎孟腎炎，膀胱炎，支氣管炎及痢疾和刀槍傷[2]。報道兔兒風屬植物中的化學成分主要有倍半萜內酯、倍半萜苷、三萜、甾體及黃酮類化合物。細穗兔兒風的化學成分的研究未見報道。筆者從細穗兔兒風的干燥全草的乙醇提取物中分離得到了10個化合物，分別為木栓酮（1）、表木栓醇（2）、蒲公英賽醇（3）、蒲公英賽醇乙酯（4）、還陽參屬苷E（5）、4，4′-二丁氧基聯(lián)二苯（6）、棕櫚酸（7）、正二十烷醇（8）、β-谷甾醇（9）、胡蘿卜苷（10）。以上化合物均為首次從該植物中分離得到，其中3、4、5、6 為首次從該屬中分離得到。

1 材料

1.1 儀器

XT-4型顯微熔點測定儀（北京泰克儀器有限公司）；1100型LC/MSD TOF聯(lián)用儀（美國Agilent公司）；AM-300型超導核磁共振（NMR）儀（瑞士Bruker公司）；GF254薄層色譜板（青島海洋化工廠）。

1.2 試藥

β-谷甾醇對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：110851-200504）；胡蘿卜苷標準品（順勃生物工程技術有限公司，純度：98%，批號：09081-199805）；200～300目和300～400目柱色譜硅膠（青島海洋化工廠）；樣品于2008年9月采自云南省普洱市，由思茅師范高等?？茖W校生命科學系李秀副教授鑒定為細穗兔兒風A.spicata，標本存放在云南大學教育部自然資源藥物化學重點實驗室。

2 方法與結果

2.1 提取分離

細穗兔兒風干燥的全草5.0 kg，用95%乙醇室溫冷浸5次。合并提取液，減壓蒸餾得粗提物。將其懸浮于水中，分別用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，得石油醚部分94 g、乙酸乙酯部分30 g、正丁醇部分48 g。取石油醚部分進行硅膠柱層析，用石油醚-乙酸乙酯溶劑體系（1∶0～0∶1）梯度洗脫，得到4個組分。組分3用石油醚-乙酸乙酯、石油醚-丙酮等溶劑體系進行洗脫，最終分離得到到化合物1（100 mg）、5（400 mg）、6（8 mg）、9（100 mg）、10（30 mg）。乙酸乙酯部分經硅膠柱層析，用石油醚-乙酸乙酯、乙酸乙酯-甲醇溶劑體系梯度洗脫，得到5個組分。組分3經反復的柱層析，用石油醚-氯仿、石油醚-乙酸乙酯、石油醚-丙酮等溶劑體系進行洗脫，最終分離得到化合物2（200 mg）、3（150 mg）、4（70 mg）、7（20 mg）、8（100 mg）。

2.2 結構鑒定

2.2.1 化合物1：無色針狀結晶（氯仿），C30H50O；mp 267～268℃；1H-NMR（300 MHz，CDCl3）δ：0.88（3H，d，J＝6.0Hz，H-23），0.73（3H，s，H-24），0.87（3H，s，H-25），1.01（3H，s，H-26），1.05（3H，s，H-27），1.18（3H，s，H-28），0.95（3H，s，H-29），1.00（3H，s，H-30）；13C-NMR（75 MHz，CDCl3）δ：21.8（C-1），41.7（C-2），212.6（C-3），57.8（C-4），41.7（C-5），41.1（C-6），18.2（C-7），52.7（C-8），37.8（C-9），59.4（C-10），35.6（C-11），30.5（C-12），39.7（C-13），38.3（C-14），32.4（C-15），37.0（C-16），30.0（C-17），42.4（C-18），35.2（C-19），27.7（C-20），32.3（C-21），39.2（C-22），6.3（C-23），14.2（C-24），17.5（C-25），20.2（C-26），18.2（C-27），31.3（C-28），34.9（C-29），31.6（C-30）。以上數(shù)據與文獻[3]報道基本一致，故鑒定化合物1為木栓酮（Friedelin）。

2.2.2 化合物2：無色塊狀結晶（乙酸乙酯-石油醚），C30H52O；mp 283～284 ℃；1H-NMR（300 MHz，CDCl3）δ：3.73（1H，br s，H-3），0.93（3H，d，J＝6.0 Hz，H-23），0.95（3H，s，H-24），0.86（3H，s，H-25），0.99（3H，s，H-26），1.01（3H，s，H-27），1.17（3H，s，H-28），1.01（3H，s，H-29），0.96（3H，s，H-30）；13C-NMR（75 MHz，CDCl3）δ：15.3（C-1），32.4（C-2），72.3（C-3），48.7（C-4），37.4（C-5），41.3（C-6），17.7（C-7），52.7（C-8），37.9（C-9），60.9（C-10），35.1（C-11），30.2（C-12），37.9（C-13），38.8（C-14），32.4（C-15），36.6（C-16），30.2（C-17），42.4（C-18），35.1（C-19），27.8（C-20），35.6（C-21），39.2（C-22），11.1（C-23），15.9（C-24），17.8（C-25），18.2（C-26），19.6（C-27），31.6（C-28），31.3（C-29），34.5（C-30）。以上數(shù)據與文獻[4]報道基本一致，故鑒定化合物2為表木栓醇（Epifriedelanol）。

2.2.3 化合物3：無色塊狀晶體（氯仿），C30H50O；mp 222～223 ℃；飛行時間質譜（TOF-MS）m/z：425[M-1]+；1H-NMR（300 MHz，CDCl3）δ：5.52（1H，dd，J＝3.0，8.0 Hz，H-15），3.18（1H，dd，J＝5.0，15.2 Hz，H-3），2.03（1H，br d，J＝12.6 Hz，H-16b），1.91（1H，br d，J＝12.2Hz，H-16a），1.07（3H，s，H-26），0.96（3H，s，H-23），0.93（3H，s，H-28），0.91（3H，s，H-25），0.89（3H，s，H-27），0.89（3H，s，H-30），0.83（3H，s，H-28），0.80（3H，s，H-24）；13C-NMR（75 MHz，CDCl3）δ：37.5（C-1），27.5（C-2），78.6（C-3），38.3（C-4），55.1（C-5），18.3（C-6），40.9（C-7），38.5（C-8），48.3（C-9），37.1（C-10），17.3（C-11），33.3（C-12），37.5（C-13），157.6（C-14），116.4（C-15），37.2（C-16），35.4（C-17），48.8（C-18），36.3（C-19），28.9（C-20），33.2（C-21），35.3（C-22），28.3（C-23），15.2（C-24），15.3（C-25），25.4（C-26），20.8（C-27），29.5（C-28），32.9（C-29），29.4（C-30）。以上數(shù)據與文獻[5]報道基本一致，故鑒定化合物3為蒲公英賽醇（Taraxerol）。

2.2.4 化合物4：白色片狀晶體（丙酮），C32H52O2；mp 268～270℃；TOF-MS m/z：467[M-1]+；1H-NMR（300 MHz，CDCl3）δ：5.53（1H，dd，J＝3.7，8.0 Hz，H-15），2.04（3H，s，Ac-CH3），2.02（1H，dt，J＝3.0，13.5 Hz，H-19），1.90（1H，dd，J＝4.8，12.5 Hz，H-18），1.09（3H，s，H-26），0.95（3H，s，H-25），0.95（3H，s，H-29），0.91（3H，s，H-24），0.91（3H，s，H-27），0.88（3H，s，H-30），0.86（3H，s，H-23），0.82（3H，s，H-28）；13C-NMR（75 MHz，CDCl3）δ：37.1（C-1），23.0（C-2），80.5（C-3），37.3（C-4），55.2（C-5），18.3（C-6），33.2（C-7），38.6（C-8），48.8（C-9），37.3（C-10），17.1（C-11），36.9（C-12），37.6（C-13），157.5（C-14），116.5（C-15），33.3（C-16），36.2（C-17），48.4（C-18），40.9（C-19），29.2（C-20），35.3（C-21），37.3（C-22），28.3（C-23），16.5（C-24），15.4（C-25），25.5（C-26），29.5（C-27），29.4（C-28），32.9（C-29），20.8（C-30），170.4（C-31），20.8（C-32）。以上數(shù)據與文獻[6，7]報道基本一致，故鑒定化合物4為蒲公英賽醇乙酯（Taraxeryl acetate）。

2.2.5 化合物5：棕色針狀結晶（甲醇），C21H28O9；TOF-MS m/z：243[M-1]+；1H-NMR（300 MHz，CDCl3）δ：6.28（2H，m，H-13a，13b），5.66（1H，br s，H-15a），5.42（1H，br s，H-15b），5.08（1H，s，H-14a），4.93（1H，s，H-14b），4.63（1H，br t，J＝5.8 Hz，H-3），4.46（1H，d，J＝6.8 Hz，H-1 ′），4.33（1H，d，J＝3.0 Hz，H-6），3.89（1H，m，H-8），3.87（1H，d，H-6 a′），3.67（1H，dd，J＝12.0，3.4 Hz，H-6b′），3.22-3.41（4H，m，H-2′，3′，4′，5′），3.05（1H，br q，J＝8.4 Hz，H-1），2.60-2.78（3H，m，H-5，7，9a），2.36（H，m，H-2a），2.25（1H，dd，J＝15.0，2.5 Hz，H-9b），1.95（1H，m，H-2b）；13C-NMR（75 MHz，CDCl3）δ：46.4（C-1），38.8（C-2），81.5（C-3），150.9（C-4），52.1（C-5），79.8（C-6），50.6（C-7），71.7（C-8），43.0（C-9），145.4（C-10），137.7（C-11），172.3（C-12），122.6（C-13），117.1（C-14），113.4（C-15），103.4（C-1′），75.3（C-2′），78.1（C-3′），67.0（C-4′），77.9（C-5′），62.9（C-6′）。以上數(shù)據與文獻[8，9]報道基本一致，故鑒定化合物5為還陽參屬苷E（Crepiside E）。

2.2.6 化合物6：黃色晶體（氯仿），C20H26O2；mp 147～148℃；1H-NMR（300 MHz，CDCl3）δ：0.90（6H，t，J＝7.5 Hz，2 ×OCH2CH2CH2CH3），4.05（4H，t，J＝6.5 Hz，2 × OCH2CH2CH2CH3），1.72（4H，m，2×OCH2CH2CH2CH3），1.45（4H，m，2×OCH2CH2CH2CH3），7.23（4H，q，aromatic），7.70（4H，q，aromatic）。以上數(shù)據與文獻[10，11]報道基本一致，故鑒定化合物6為4，4′-二丁氧基聯(lián)二苯（4，4′-dibutanoxy biphenyl）。

2.2.7 化合物7：白色固體（氯仿-甲醇），C16H32O2；mp 49～50℃；用堿化的溴甲酚綠顯色反應陽性，顯土黃色，顯示化合物為有機酸。1H-NMR（300 MHz，CDCl3）δ：2.33（2H，t，H-2），1.63（2H，t，H-3），1.26～1.30（24H，m，H-4～15），0.88（3H，t，H-16）；13C-NMR（75 MHz，CDCl3）δ：175.8（C-1），34.1（C-2），31.9（C-3），29.1～30.1（C-4～13），24.7（C-14），22.7（C-15），14.1（C-16）。以上數(shù)據與文獻[12]報道基本一致，故鑒定化合物7為棕櫚酸。

2.2.8 化合物8：白色粉末，C20H42O；mp 64～66℃；溶于乙酸乙酯、丙酮、甲醇；1H-NMR（300 MHz，CDCl3）δ：2.01（1H，s，OH），3.51（2H，t，H-20），1.43（2H，t，H-19），1.25（32H，s，H-3～18），1.35（2H，m，H-2），0.89（3H，t，H-1）；13C-NMR（75 MHz，CDCl3）δ：14.2（C-2），22.9（C-3），32.0（C-3），29.6（C-4），29.7（C-5～17），25.6（C-18），32.2（C-19），62.8（C-20）。以上數(shù)據與文獻[13]報道基本一致，故鑒定化合物8為正二十烷醇。

2.2.9 化合物9：無色針狀晶體（乙酸乙酯），與β-谷甾醇對照品進行對照，混合熔點不下降；在多種溶劑系統(tǒng)中進行薄層層析檢測，Rf值一致，且顯色相同，故確定為β-谷甾醇（β-sitosterol）。

2.2.10 化合物10：白色粉末，與胡蘿卜苷標準品進行對照，混合熔點不下降；在多種溶劑系統(tǒng)中進行薄層層析檢測，Rf值一致，且顯色相同，故確定為胡蘿卜苷（Daucosterol）。

3 討論

兔兒風屬植物作為一種常用的民間草藥，在我國南方許多地區(qū)均有藥用?，F(xiàn)代藥理及臨床應用表明，本屬植物有很好的抗炎、抗病毒作用。從已有的化學成分方面的研究看出，兔兒風屬植物多含有三萜和倍半萜內酯類成分，而倍半萜內酯有很好的抗腫瘤活性，因此針對本屬植物在這一方面的研究有待進一步深入。

本研究采用硅膠柱色譜及重結晶的方法對細穗兔兒風干燥全草的乙醇提取物進行分離純化，通過理化常數(shù)測定以及波譜分析分離鑒定了10個化合物的結構，分別為4個三萜、1個倍半萜內酯、2個甾體、2個脂肪烷/酸和1個聯(lián)苯類化合物?；衔?～10均為首次從兔兒風屬植物中分離得到，其中化合物3、4、5、6為首次從該屬中分離得到。本研究可對開發(fā)利用兔兒風屬植物資源在創(chuàng)制中成藥新品種及綜合利用等方面提供科學依據。

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