護(hù)肝寧片中大黃素含量測(cè)定方法的研究

梁偉

(哈藥集團(tuán)世一堂制藥廠，黑龍江 哈爾濱 150088)

護(hù)肝寧片是由垂盆草、虎杖、丹參和靈芝等四味中藥材經(jīng)提取而制成的復(fù)方中藥制劑，具有清熱利濕，益肝化瘀，舒肝止痛，退黃，降低谷丙轉(zhuǎn)氨酶的作用。用于急性肝炎及慢性肝炎。為了更好地控制該制劑的質(zhì)量，保證藥品療效，本研究建立了高效液相色譜法測(cè)定護(hù)肝寧片的虎杖中大黃素的含量，此方法專屬性強(qiáng)，重現(xiàn)性好，可作為控制其質(zhì)量的一項(xiàng)重要指標(biāo)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 LC－2010高效液相色譜儀

1.2 試劑 甲醇(天津科密歐化學(xué)試劑開發(fā)中心，色譜純，批號(hào)20080105);乙腈(天津科密歐化學(xué)試劑開發(fā)中心，色譜純，批號(hào)20081112);大黃素對(duì)照品(0756－200702供含量測(cè)定用，中國藥品生物制品檢定所);供試品(天津飛鷹制藥有限公司，批號(hào)0909014)。

2 色譜條件的確定與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

2.1 色譜條件 色譜柱 C18柱(5μm，250mm×4.6mm);流速:1.0mL·min－1;檢測(cè)波長:254μm;柱溫:室溫;進(jìn)樣體積:10μL。

2.2 檢測(cè)波長的選擇 通過紫外－可見分光光度計(jì)在200～400nm對(duì)供試品溶液、對(duì)照品溶液及陰性對(duì)照樣品溶液的掃描可以看出，大黃素對(duì)照品溶液在254nm波長處有最大吸收，供試品溶液在254nm也有吸收，陰性對(duì)照樣品(缺虎杖)溶液無明顯吸收，基本可排除干擾。所以確定本品檢測(cè)波長為254nm。

2.3 流動(dòng)相的選擇 以甲醇－乙腈(85∶15)為流動(dòng)相，所測(cè)供試品中大黃素與其他組分能夠?qū)崿F(xiàn)基線分離。

2.4 線性范圍的考察

2.4.1 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取大黃素對(duì)照品10mg，置50mL量瓶中，加甲醇至刻度，制成每1mL含大黃素0.2mg的對(duì)照品溶液，精密量取大黃素對(duì)照液1.0、2.0、4.0、8.0、12.0、16.0mL，分別置 25mL 量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.4.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

精密吸取各對(duì)照品溶液10μL注入液相色譜儀，測(cè)定，以溶液濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線如下圖所示，其回歸方程為y=308163.18x+41397.66，相關(guān)系數(shù) r=0.9998。

上述試驗(yàn)結(jié)果表明，大黃素對(duì)照品溶液濃度在8～128μg·mL－1的范圍內(nèi)，峰面積與溶液濃度之間具有良好的線性關(guān)系。

2.5 儀器精密度試驗(yàn)

樣品除去包衣，研細(xì)，制備成供試品溶液。精密吸取供試品溶液10μL，重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定。測(cè)得峰面積平均值RSD為0.60%。表明，本法儀器精密度符合檢測(cè)要求。

2.6 供試品溶液的穩(wěn)定性試驗(yàn)

樣品除去包衣，研細(xì)，制備成供試品溶液;精密吸取供試品溶液 10μL，在 0、2、4、8、16、24h 分別進(jìn)樣 1次，測(cè)定，測(cè)得峰面積平均值RSD為0.99%。表明，供試品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定，可以滿足含量測(cè)定的時(shí)間要求。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批樣品，除去包衣，研細(xì)，分取細(xì)粉約1.0g，共6份，精密稱定，制備成供試品溶液。精密吸取對(duì)照品溶液及供試品溶液各10μL，注入液相色譜儀，測(cè)定。測(cè)得本品的大黃素平均含量為20.08mg·g－1，本批被測(cè)樣品的平均片重為 0.3158g·片－1，則每片含虎杖以大黃素計(jì)為6.3mg·片－1;RSD為3.90%。上述試驗(yàn)結(jié)果表明，本法的重復(fù)性良好。

2.8 回收率試驗(yàn)

取上述批次樣品(大黃素含量為20.08mg·g－1)，除去包衣，研細(xì)，取細(xì)粉9份，各約1.0g，精密稱定，分別置于100mL量瓶中;在1號(hào)、2號(hào)、3號(hào)量瓶中加入大黃素對(duì)照品約3.5mg、在4號(hào)、5號(hào)、6號(hào)量瓶中加入大黃素對(duì)照品約4.0mg、在7號(hào)、8號(hào)、9號(hào)量瓶中加入大黃素對(duì)照品約4.5mg。

精密吸取對(duì)照品溶液及各供試品加對(duì)照品溶液10μL，注入液相色譜儀，測(cè)定。測(cè)得平均回收率為99.2%，RSD為0.92%。試驗(yàn)結(jié)果表明，高效液相色譜法用于測(cè)定本品的大黃素含量，具有良好的準(zhǔn)確性和可靠性。