西南齒唇蘭的組織培養(yǎng)與快速繁殖

張 鐵,李洪超

(1.文山學(xué)院生化系,云南文山 663000;2.文山州生物資源開發(fā)研究中心,云南文山 663000)

1 植物名稱

西南齒唇蘭 [Anoectochilus e lwesii(Clarke ex Hook.f.)King et Pantl](圖 1),別名:西南開唇蘭(橫斷山區(qū)維管植物、中國(guó)蘭花全書)、鍾氏齒唇蘭(臺(tái)大實(shí)驗(yàn)林研究報(bào)告)、鍾氏金線蓮 (臺(tái)灣蘭科植物彩色圖志)[1]。

2 材料類別

種子。

3 培養(yǎng)條件

種子萌發(fā)培養(yǎng)基: (1)MS+100 mL·L-1椰汁;(2)1/2MS+100 mL·L-1椰汁。原球莖繼代增殖培養(yǎng)基: (3)MS+6-BA 1.0 mg·L-1(單位下同)+NAA 0.5 mg·L-1; (4)MS+6-BA 0.5 mg·L-1+NAA 1.0。生根培養(yǎng)基: (5)1/2MS+6-BA0.2+NAA0.05+AC(活性碳 )0.5 mg·L-1+蛋白胨2 g·L-1+100 mL·L-1香蕉汁。以上培養(yǎng)基中均加入 3%的蔗糖、5.5 g卡拉膠,pH 5.6～5.8。培養(yǎng)溫度 (25±2)℃,光照每天 10～12 h。

4 生長(zhǎng)與分化情況

4.1 材料的無(wú)菌處理

供試種子來(lái)源于移栽 1年的野生西南齒唇蘭未開裂的蒴果。首先在超凈工作臺(tái)內(nèi)將蒴果用 75%的酒精處理 30 s,無(wú)菌水沖洗 3～5次,將種子取出,再用 0.1%的 HgCl2溶液浸泡 10 min,無(wú)菌水沖洗 3～5次,用無(wú)菌濾紙吸干種子表面水分。用解剖刀切開蒴果,將種子接種到培養(yǎng)基上。

4.2 種子萌發(fā)

將種子分別接種到萌發(fā)培養(yǎng)基 (1)和 (2)上,暗培養(yǎng) 30 d后,可見白色原球體出現(xiàn) (圖 2),轉(zhuǎn)入光下培養(yǎng),1周后原球莖轉(zhuǎn)綠 (圖 3),4周后原球莖上長(zhǎng)芽。培養(yǎng)基 (1)的萌發(fā)率比較低,在50%左右,且培養(yǎng) 1個(gè)月后發(fā)現(xiàn)部分原球莖死亡;培養(yǎng)基 (2)上種子的萌發(fā)速度和生長(zhǎng)速度更快,約有 85%萌發(fā),結(jié)果表明 1/2MS培養(yǎng)基較MS培養(yǎng)基更有利于西南齒唇蘭種子萌發(fā)。

4.3 原球莖繼代增殖

將初代培養(yǎng)的原球莖和芽分別轉(zhuǎn)接至培養(yǎng)基(3)和 (4)上繼代增殖培養(yǎng),在培養(yǎng)基 (3)和(4)上原球莖大多形成植株,但是在培養(yǎng)基 (4)上原球莖增殖、生長(zhǎng)速度最快 (圖 4),約 50～60 d能繼代增殖 1次。由此可見,生長(zhǎng)素NAA和細(xì)胞分裂素 6-BA組合是原球莖繼代增殖的主要因素,以細(xì)胞分裂素與生長(zhǎng)素濃度比為 1∶2時(shí)效果最佳。

4.4 生根與移栽

將增殖瓶中 3～4 cm長(zhǎng)的苗切下,接入培養(yǎng)基(5)中進(jìn)行根的誘導(dǎo)。15 d開始生根 (圖 5),生根率可達(dá) 98%,待根長(zhǎng)至 3～4 cm時(shí),生長(zhǎng)為高 3～5 cm的小苗,在室溫下煉苗 1周,取出洗去根部培養(yǎng)基,移栽至腐葉土∶鋸木 (2∶1)的基質(zhì)中。管理中保持適度溫濕度,置于陰涼通風(fēng)處栽培,期間不要澆水,有利于新根生長(zhǎng)和防止病害發(fā)生,4周后可以進(jìn)行正常水、肥、藥管理,成活率可達(dá) 90%以上。

5 意義與進(jìn)展

西南齒唇蘭為蘭科開唇蘭屬植物,為國(guó)家 II級(jí)保護(hù)植物 (第二批),西南齒唇蘭主要靠有性繁殖和無(wú)性繁殖兩種方式繁衍種群,種子自然繁殖非常困難,自然增殖率低,通過(guò)種子進(jìn)行組織培養(yǎng)可以解決這個(gè)問(wèn)題。同屬的金線蓮、臺(tái)灣金線蓮和滇越金線蓮的組織培養(yǎng)已有報(bào)道[2-5],但西南齒唇蘭的組織培養(yǎng)和快速繁殖尚未見報(bào)道。本文研究結(jié)果對(duì)開齒唇蘭屬植物的保護(hù)與開發(fā),有一定的參考價(jià)值。

[1] 中國(guó)科學(xué)院中國(guó)植物志編輯委員會(huì).中國(guó)植物志[M].北京:科學(xué)出版社,1999:217-218.

[2] 黃慧蓮,劉賢旺.金線蓮的組培快繁 [J].植物雜志,2002,(4):33-34.

[3] 段玉云,曾黎瓊,程在全.臺(tái)灣金線蓮的組織培養(yǎng)與快速繁殖[J].植物生理學(xué)通訊,2005,(4):194.

[4] 李秀軍,陳穗云,王玉梅,陳永哲.臺(tái)灣金線蓮 (Aoectochilusformosanus)的組培快繁研究 [J].青海師范大學(xué)學(xué)報(bào) (自然科學(xué)版),2004,(3):91-93.

[5] 張鐵,田雪琪,李彬.滇越金線蓮快速繁殖技術(shù)研究[J].文山師范高等專科學(xué)校學(xué)報(bào),2006,(3):110-114.