5首解酒方對(duì)小鼠醉酒模型解酒效應(yīng)的比較研究

楊 柱， 田維毅， 王文佳， 韓 潔

(貴陽(yáng)中醫(yī)學(xué)院，貴州貴陽(yáng)550002)

過(guò)度飲酒已成為損害健康的重要因素之一，酒精對(duì)機(jī)體損害大致可分為急性酒精中毒(即醉酒)和慢性酒精損害。目前，對(duì)解酒制品的開發(fā)受到廣泛重視，包括主要針對(duì)急性酒精中毒的醒酒防醉制品和主要針對(duì)慢性酒精損害的保肝等制品。醒酒防醉制品研發(fā)具有極其重要的社會(huì)適用價(jià)值，祖國(guó)醫(yī)藥在這方面積淀了豐富的理論基礎(chǔ)和治法方藥，具有較好的臨床應(yīng)用效果，但缺乏統(tǒng)一評(píng)價(jià)［1］。為了深入探索祖國(guó)醫(yī)藥防醉醒酒方劑的效果及其客觀依據(jù)，本文就葛花解酲湯等5首常用經(jīng)方驗(yàn)方醒酒、防醉、干預(yù)血乙醇含量等效應(yīng)進(jìn)行同等實(shí)驗(yàn)條件下的對(duì)比研究，為進(jìn)一步研發(fā)和臨床應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 清潔級(jí)昆明小鼠，♀♂各半，體重18～22 g，由上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限責(zé)任公司提供［SCXK(滬)2007-0005］。

1.2 主要儀器 AB135-S型梅特勒托利多電子天平(梅特勒托利多上海公司);島津GC-2010氣相色譜儀(日本島津公司)。

1.3 試劑與藥材 56%(V/V)紅星二鍋頭白酒(批號(hào)081215，北京紅星股份有限公司);根據(jù)前期研究確定的用酒量(另文發(fā)表)，按0.15 mL/10 g體重灌胃，動(dòng)物可明顯致醉且無(wú)大量死亡。實(shí)驗(yàn)方劑包括葛花解酲湯(元·李東垣《脾胃論》)、藿香正氣散(宋﹒太醫(yī)局《太平惠民和劑局方》)、石膏湯(解酒驗(yàn)方:石膏12 g、葛根10 g、干姜6 g)、葛根散(金·張子和《儒門事親》)和沖和湯(宋·楊倓《楊氏家藏方》)。組方藥材購(gòu)自上海同仁堂大藥房，按原方比例制備水煎劑(生藥濃度為1 g/mL)備用。根據(jù)動(dòng)物藥理實(shí)驗(yàn)用藥折算方法，根據(jù)成人常規(guī)用藥量，實(shí)驗(yàn)中統(tǒng)一按10 g生藥/kg小鼠體重設(shè)計(jì)給藥中劑量，其2倍量為大劑量、1/2量為小劑量。實(shí)驗(yàn)前用蒸餾水按0.25 mL(藥液)/10 g(小鼠體重)給藥體積調(diào)整水煎劑濃度。

1.4 翻正實(shí)驗(yàn) 參照文獻(xiàn)方法［2］。實(shí)驗(yàn)小鼠按♀♂各半隨機(jī)分組，每組10只，實(shí)驗(yàn)前禁食12 h。各給藥組用相應(yīng)水煎劑按0.25 mL/10 g體重灌服，另設(shè)對(duì)照組代以等體積蒸餾水。給藥30 min后，各組均用56%(V/V)紅星二鍋頭按0.15 mL/10 g體重灌服，隨即記錄各小鼠翻正反應(yīng)消失時(shí)間(耐受時(shí)間)和消失持續(xù)時(shí)間。

1.5 醉酒睡眠實(shí)驗(yàn) 參照文獻(xiàn)方法［3］。動(dòng)物分組與處置方法同上，灌服白酒后隨即觀察小鼠活動(dòng)情況。以小白鼠爬行不穩(wěn)、后腹拖地、閉眼懶動(dòng)為睡眠(醉酒)指標(biāo)，以行動(dòng)自如、四肢靈活、精神恢復(fù)為蘇醒(醒酒)指標(biāo)，記錄小鼠入睡時(shí)間和蘇醒時(shí)間，算出睡眠耐受時(shí)間(min)(從灌酒至入睡的時(shí)間)及持續(xù)時(shí)間(min)(從入睡到蘇醒的時(shí)間)。

1.6 攀附實(shí)驗(yàn) 參照文獻(xiàn)方法［3］。動(dòng)物分組與處置方法同上，灌服白酒后隨即將小鼠放在垂直的金屬網(wǎng)上，記錄各小鼠在網(wǎng)上的攀附時(shí)間(s)。

1.7 全血乙醇含量測(cè)定 參照文獻(xiàn)方法［4］。動(dòng)物分組與處置方法同上，分別于灌服白酒 30、60、90、120、150、180 min后，隨機(jī)抽取各組小鼠8只，經(jīng)眼球取血0.1 mL抗凝，內(nèi)標(biāo)法檢測(cè)全血乙醇含量。檢測(cè)方法參照《中華人民共和國(guó)藥典》(2005版)乙醇量測(cè)定法。

1.8 統(tǒng)計(jì)分析各組計(jì)量資料以ˉx±s表示，數(shù)據(jù)處理采用spss 13.0數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行差異性比較，以P＜0.05及P＜0.01為顯著性差異。

2 結(jié)果

由于本研究是對(duì)各方解酒效果的對(duì)比研究，所以在比較各項(xiàng)指標(biāo)時(shí)，以各復(fù)方最佳效果濃度組作為參比組，有關(guān)實(shí)驗(yàn)結(jié)果對(duì)比如下。

2.1 翻正實(shí)驗(yàn)

小鼠翻正反應(yīng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表1。各方最佳效應(yīng)組翻正反應(yīng)消失時(shí)間(耐受時(shí)間)(min):葛根散＞石膏湯＞葛花解酲湯＞沖和湯＞藿香正氣散，且葛根散與其他參試方劑比較，具有顯著性差異(P＜0.05或P＜0.01);葛根散、石膏湯、葛花解酲湯與對(duì)照組比較，具有顯著性差異(P＜0.01);沖和湯、藿香正氣散與對(duì)照組比較，無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。各方最佳效果組翻正反應(yīng)消失持續(xù)時(shí)間(min):石膏湯＜葛根散＜葛花解酲湯＜沖和湯＜藿香正氣散，石膏湯與葛根散比較無(wú)顯著性差異(P＞0.05)、與其他參試方劑比較有顯著性差異(P＜0.01);石膏湯、葛根散、葛花解酲湯與對(duì)照組比較，具有顯著性差異(P＜0.01);沖和湯、藿香正氣散與對(duì)照組比較，無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。

2.2 醉酒睡眠實(shí)驗(yàn)

小鼠醉酒睡眠實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表1。各方最佳效應(yīng)組醉酒睡眠潛伏時(shí)間(min):葛根散＞藿香正氣散＞石膏湯＞葛花解酲湯＞沖和湯，葛根散與藿香正氣散、石膏湯比較無(wú)顯著性差異(P＞0.05)，葛根散與葛花解酲湯、沖和湯比較具有顯著性差異(P＜0.05或P＜0.01);各方與對(duì)照組比較具有顯著性差異(P＜0.05或P＜0.01)。各方最佳效應(yīng)組醉酒睡眠持續(xù)時(shí)間(min):石膏湯＜藿香正氣散＜葛根散＜葛花解酲湯＜沖和湯，石膏湯與藿香正氣散、葛根散比較無(wú)顯著性差異(P＞0.05)，石膏湯與葛花解酲湯、沖和湯比較具有顯著性差異(P＜0.01);各方與對(duì)照組比較具有顯著性差異(P＜0.05或P＜0.01)。

2.3 攀附實(shí)驗(yàn)

小鼠攀附實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表1。各方最佳效應(yīng)組攀附時(shí)間(s):葛根散＞石膏湯＞葛花解酲湯＞沖和湯＞藿香正氣散，葛根散與其他各方比較具有顯著性差異(P＜0.01);各方與對(duì)照組比較具有顯著性差異(P＜0.05或P＜0.01)。

2.4 血乙醇含量檢測(cè)

小鼠全血乙醇含量檢測(cè)結(jié)果見表2。各方實(shí)驗(yàn)動(dòng)物均用其該時(shí)段血乙醇濃度最低組參與比較。對(duì)照組灌服白酒30 min后，其血乙醇即有明顯升高，60～90 min達(dá)到高峰，之后開始下降。與對(duì)照組相比:葛根散、石膏湯最佳效應(yīng)組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物各時(shí)段血乙醇濃度降低幅度顯著(P＜0.01)，藿香正氣散、沖和湯降低幅度不顯著(P＞0.05)，葛花解酲湯不同時(shí)段降低幅度大小不等(P＞0.05或P＜0.05或P＜0.01)。除120 min時(shí)以石膏湯檢測(cè)結(jié)果為最低外，其余時(shí)段均以葛根散為最低。與葛根散相比:各時(shí)段與其檢測(cè)結(jié)果最接近者均為石膏湯(P＞0.05)，與其檢測(cè)結(jié)果差異最大的是藿香正氣散、沖和湯(P＜0.05或P＜0.01)，葛花解酲湯在30～90 min時(shí)段與之無(wú)顯著差異(P＞0.05)、在120～180 min時(shí)段則差異顯著(P＜0.01)。在180 min時(shí)段，藿香正氣散、沖和湯各組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物血乙醇檢測(cè)結(jié)果高于對(duì)照組，但差異無(wú)顯著性(P＞0.05)。

表1 實(shí)驗(yàn)小鼠翻正反應(yīng)/醉酒睡眠時(shí)間/攀附時(shí)間觀察結(jié)果(±s)

表1 實(shí)驗(yàn)小鼠翻正反應(yīng)/醉酒睡眠時(shí)間/攀附時(shí)間觀察結(jié)果(±s)

注:表中n為除去實(shí)驗(yàn)過(guò)程中死亡和未醉動(dòng)物之后納入統(tǒng)計(jì)的數(shù)量;大劑量組為20 g生藥/kg小鼠體重，中劑量組為10 g生藥/kg小鼠體重，小劑量組為5 g生藥/kg小鼠體重。▲本指標(biāo)最佳效果方劑;△各方最佳效果濃度;與本指標(biāo)效果最好方劑比較，﹡P＜0.05，﹡﹡P＜0.01;與對(duì)照組比較，﹟P＜0.05，﹟﹟P＜0.01。

組別 翻正實(shí)驗(yàn)消失時(shí)間/min 消失持續(xù)時(shí)間/min醉酒睡眠實(shí)驗(yàn)睡眠潛伏時(shí)間/min 睡眠持續(xù)時(shí)間/min攀附實(shí)驗(yàn)攀附時(shí)間/s對(duì)照組 24.50±4.30(9) 202.11±10.35(9) 22.87±3.61(9) 235.90±11.68(9) 211.60±45.10(9)葛花解酲湯大劑量組 30.63±5.10(9) 165.50±8.35(9) 26.30±3.92(9) 195.28±9.63(9) 365.33±40.20(8)中劑量組 37.82±4.60(9)△*## 160.33±6.77(9)△**## 28.73±4.19(10) 197.19±10.07(10) 415.40±31.23(10)△**##小劑量組 32.22±4.14(10) 176.15±9.62(10) 33.40±3.91(10)△*## 176.50±9.32(10)△**## 380.70±47.24(10)藿香正氣散大劑量組 25.29±3.76(9)△** 198.50±9.49(9)△** 38.10±5.79(9) 182.51±10.54(9) 291.33±41.85(8)中劑量組 24.90±4.18(10) 210.34±11.12(10) 38.72±4.14(9)△## 137.97±11.85(9)△## 294.36±36.72(10)△**#小劑量組 25.10±4.23(10) 199.75±10.71(10) 29.39±4.61(10) 195.50±9.86(10) 237.82±44.51(10)石膏湯大劑量組 37.16±3.20(10) 122.44±12.64(10) 37.91±5.04(10)△## 134.59±9.87(10)▲△## 525.90±31.88(9)△**##中劑量組 38.05±4.16(10)△*## 100.31±11.27(10)▲△## 33.47±4.11(9) 184.10±9.64(9) 475.61±42.58(9)小劑量組 35.20±4.03(9) 138.73±11.67(9) 31.50±4.08(9) 191.38±10.83(9) 346.69±45.11(10)葛根散大劑量組 46.55±4.21(8)▲△## 109.41±10.33(8)△## 40.99±4.18(9)▲△## 140.27±9.35(9)△## 549.91±47.82(9)中劑量組 43.30±4.81(9) 122.14±9.89(9) 38.68±3.51(10) 185.73±11.60(10) 611.45±41.63(10)▲△##小劑量組 33.86±3.10(10) 156.50±10.22(10) 34.30±4.91(8) 195.48±9.92(8) 471.29±42.11(8)沖和湯大劑量組 27.20±5.14(10) 188.69±9.21(10)△** 24.30±4.03(9) 221.40±9.88(9) 313.77±46.14(9)△**##中劑量組 26.20±4.70(9) 189.83±11.26(9) 28.73±4.69(10)△**# 216.44±9.92(10)△**# 297.38±38.73(10)小劑量組 28.00±5.23(8)△** 193.36±9.75(8) 27.61±4.77(9) 217.84±10.29(9) 264.86±43.63(10)

表2 實(shí)驗(yàn)小鼠血乙醇含量檢測(cè)結(jié)果(μL/mL)(±s)

注:各組各時(shí)段隨機(jī)抽取實(shí)驗(yàn)小鼠8只進(jìn)行檢測(cè)(死亡小鼠不檢測(cè))，最后時(shí)段不足8只則按實(shí)數(shù)計(jì)算;大劑量組為20 g生藥/kg小鼠體重，中劑量組為10 g生藥/kg小鼠體重，小劑量組為5 g生藥/kg小鼠體重?！緯r(shí)段血乙醇含量最低的方劑;△各方本時(shí)段血乙醇含量最低組;與本時(shí)間段血乙醇含量最低的方劑比較，*P＜0.05，**P＜0.01;與對(duì)照組比較，#P＜0.05，##P＜0.01。

組別(動(dòng)物總數(shù))小鼠血乙醇含量/(μL/mL)30 min 60 min 90 min 120 min 150 min 180 min對(duì)照組(52) 0.92±0.13 1.71±0.16 1.67±0.15 1.52±0.15 1.29±0.10 0.96±0.11葛花解酲湯大劑量組(52) 0.70±0.11△# 1.34±0.16△## 1.42±0.13 1.27±0.11△**## 1.15±0.11△** 0.77±0.09(7)△**#中劑量組(52) 0.74±0.13 1.38±0.14 1.41±0.10△## 1.32±0.14 1.16±0.13 0.89±0.10小劑量組(52) 0.82±0.10 1.57±0.14 1.56±0.11 1.38±0.12 1.19±0.09 0.91±0.12藿香正氣散大劑量組(52) 0.89±0.14 1.56±0.11△* 1.52±0.14 1.39±0.10 1.15±0.13△** 1.04±0.12△**中劑量組(52) 0.84±0.11△* 1.64±0.14 1.51±0.12△* 1.37±0.12△** 1.19±0.11 1.12±0.10小劑量組(52) 0.87±0.13 1.67±0.10 1.59±0.14 1.44±0.15 1.20±0.11 1.17±0.14(7)石膏湯大劑量組(52) 0.69±0.10△## 1.29±0.14△## 1.33±0.10△## 0.71±0.14▲△## 0.68±0.09△## 0.62±0.10△##中劑量組(52) 0.73±0.12 1.36±0.12 1.38±0.11 0.88±0.11 0.82±0.11 0.78±0.12小劑量組(52) 0.81±0.11 1.45±0.10 1.51±0.13 0.99±0.15 0.92±0.14 0.82±0.08葛根散大劑量(52) 0.62±0.13▲△## 1.21±0.15▲△## 1.31±0.11▲△## 0.74±0.10△## 0.59±0.09▲△## 0.48±0.10▲△##中劑量(52) 0.69±0.11 1.35±0.11 1.32±0.14 0.77±0.10 0.69±0.10 0.59±0.08小劑量(52) 0.73±0.11 1.39±0.14 1.43±0.10 0.85±0.14 0.74±0.09 0.68±0.10沖和湯大劑量(52) 0.94±0.15 1.60±0.12 1.57±0.14 1.41±0.15△** 1.24±0.13 1.15±0.14(7)中劑量(52) 0.87±0.14△** 1.58±0.14△** 1.57±0.12△** 1.42±0.10 1.19±0.11△** 1.08±0.10△**小劑量(52) 0.88±0.11 1.67±0.11 1.60±0.15 1.46±0.11 1.26±0.14 1.19±0.12

3 討論

醉酒大致可分為三個(gè)階段，即興奮期、共濟(jì)失調(diào)期、昏睡期?，F(xiàn)代研究醒酒防醉方藥多從協(xié)調(diào)運(yùn)動(dòng)、醒神、控制血乙醇等方面入手，實(shí)驗(yàn)方法最常見的有翻正實(shí)驗(yàn)、醉酒睡眠實(shí)驗(yàn)(又稱防醉實(shí)驗(yàn))、攀附實(shí)驗(yàn)和血中乙醇含量檢測(cè)等。本文探討了祖國(guó)醫(yī)藥中葛花解酲湯等5首常用醒酒防醉方劑在同一實(shí)驗(yàn)條件的解酒效應(yīng)，比較了上述指標(biāo)的效應(yīng)差異。

翻正實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示(見表1)，與對(duì)照組比較，葛花解酲湯中劑量組、石膏湯中劑量組和葛根散大劑量組實(shí)驗(yàn)小鼠的翻正反應(yīng)消失時(shí)間和消失持續(xù)時(shí)間均得到顯著改善(P＜0.01);其中改善效果最明顯的方劑分別為葛根散和石膏湯。

醉酒睡眠實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示(見表1)，與對(duì)照組比較，葛花解酲湯小劑量組、藿香正氣散中劑量組、石膏湯大劑量組、葛根散大劑量組和沖和湯中劑量組實(shí)驗(yàn)小鼠睡眠潛伏時(shí)間和睡眠持續(xù)時(shí)間均得到顯著改善(P＜0.05或P＜0.01);其中藿香正氣散中劑量組、石膏湯大劑量組和葛根散大劑量組效果尤為顯著，與葛花解酲湯小劑量組和沖和湯中劑量組比較具有明顯差異(P＜0.05或P＜0.01)。

攀附實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示(見表1)，與對(duì)照組比較，葛花解酲湯中劑量組、藿香正氣散中劑量組、石膏湯大劑量組、葛根散中劑量組和沖和湯大劑量組實(shí)驗(yàn)小鼠攀附時(shí)間明顯延長(zhǎng)(P＜0.05或P＜0.01);其中以葛花解酲湯中劑量組、石膏湯大劑量組、葛根散中劑量組效果尤為明顯(P＜0.01)。

血乙醇含量檢測(cè)結(jié)果顯示(見表2)，與對(duì)照組比較，葛花解酲湯大劑量組、葛根散大劑量組、石膏湯大劑量組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物各檢測(cè)時(shí)間段(其中葛花解酲湯90 min時(shí)間段為中劑量組)血乙醇含量明顯降低(P＜0.05或P＜0.01);其中以葛根散大劑量組、石膏湯大劑量組效果尤為明顯，與其他參試方劑比較，具有明顯差異(P＜0.05或P＜0.01)。

綜合上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果，提示在本研究所選解酒防醉觀察指標(biāo)中，5首方劑中的葛根散和石膏湯的作用效果更為明顯和全面，葛花解酲湯效果稍弱但與對(duì)照組相比仍具有顯著差異。在本研究中，藿香正氣散和沖和湯的解酒防醉作用比較局限，對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物血乙醇沒有明顯降低作用，其臨床解酒效應(yīng)是否涉及其他途徑，需進(jìn)一步探索。

在本文實(shí)驗(yàn)中，我們采用目前常用的小鼠醉酒模型，因考慮灌服白酒致醉后影響服藥的問題，所以本研究全部采用的是先給藥、后灌酒。因此，本實(shí)驗(yàn)結(jié)果除了體現(xiàn)解酒效果外，很大程度上還體現(xiàn)防醉效果。同時(shí)，為了盡可能體現(xiàn)每個(gè)方劑的最佳效果，我們分三個(gè)濃度組進(jìn)行觀察(對(duì)比時(shí)用效果最好的濃度組數(shù)據(jù))。另外，因動(dòng)物數(shù)量限制，血乙醇含量檢測(cè)每組用8只動(dòng)物，但仍符合統(tǒng)計(jì)要求(最低6只)。當(dāng)然，由于實(shí)驗(yàn)工作量較大，我們觀察的方劑數(shù)量有限，觀察的指標(biāo)覆蓋面主要限于基本藥效學(xué)指標(biāo)，要全面深入的研究各方劑的解酒效果，尚需進(jìn)一步開展工作。

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