骨折挫傷膠囊中鉛鎘砷汞銅測(cè)定方法的研究

王常禹， 單寅鑫

(1.黑龍江省食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)所，黑龍江 哈爾濱150001;2.黑龍江畜牧獸醫(yī)職業(yè)學(xué)院，黑龍江 哈爾濱150111)

隨著我國(guó)人民生活水平的提高，食品及藥品的安全性問題越來(lái)越受到人們的關(guān)心與重視。2010年版《中國(guó)藥典》一部及二部均增加了藥品安全性指標(biāo)的檢測(cè)。為適應(yīng)市場(chǎng)需要，保證人民用藥安全，對(duì)中藥，尤其是含有礦物藥的中成藥，應(yīng)盡快建立重金屬及有害元素的殘留檢測(cè)方法及合理的限量標(biāo)準(zhǔn)。

骨折挫傷膠囊是由豬骨、黃瓜子(炒黃)、土鱉蟲、自然銅(煅)、乳香(制)、沒藥(制)、血竭、紅花、大黃和當(dāng)歸制成的中藥復(fù)方制劑，具有舒筋活絡(luò)，接骨止痛的功效，用于治療跌打損傷，消腫散瘀，扭腰岔氣等癥，被譽(yù)為“跌打損傷之良藥”。由于該藥品除豬骨制膠，黃瓜子去油外，其余各味藥材均為原粉入藥，且處方中含有礦物藥自然銅，為控制重金屬及有害元素的含量，保證患者用藥安全、有效，本實(shí)驗(yàn)根據(jù)骨折挫傷膠囊的用藥特點(diǎn)，分別模擬人工胃液及1%鹽酸超聲提取酸可溶性重金屬及有害元素作為毒性指標(biāo)［1］，參考《中國(guó)藥典》2005 年版［2］一部附錄“鉛、鎘、砷、汞、銅檢查法”測(cè)定骨折挫傷膠囊中鉛、鎘、砷、汞、銅。結(jié)果發(fā)現(xiàn)人工胃液與1%鹽酸提取之間測(cè)定的結(jié)果差異很小，而1%鹽酸操作更為簡(jiǎn)便，因此，選擇以1%鹽酸作為提取溶媒，測(cè)定骨折挫傷膠囊中酸可溶性重金屬及有害元素。

1 儀器與試劑

原子吸收光譜儀:MARS型微波消解/萃取系統(tǒng)(美國(guó)CEM公司);HVG-1型氫化物發(fā)生器及AA-6800型原子吸收分光光度計(jì)(日本島津公司);控溫電熱板:DKQ-4型(上海);標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì):鉛、鎘、砷、汞、銅單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液，國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)研究中心;試劑:硝酸及鹽酸為優(yōu)級(jí)純、其它試劑為分析純;實(shí)驗(yàn)用水均為高純水。樣品:遠(yuǎn)大藥業(yè)集團(tuán)哈爾濱中藥六廠有限公司;黑龍江烏蘇里江制藥有限公司哈爾濱分公司;哈藥集團(tuán)中藥三廠;哈高科佳木斯中藥有限公司。

2 方法和結(jié)果

2.1 樣品制備方法 取本品內(nèi)容物約0.5 g，精密稱定，加1%鹽酸5 mL，超聲1 h，過濾至聚四氟乙烯消解罐內(nèi)，殘?jiān)?%鹽酸5 mL分3次洗滌，合并濾液，置控溫電熱板上，110℃加熱揮至約1～2 mL，加硝酸5 mL，浸過夜，密閉，蓋好內(nèi)蓋，旋緊外套，置微波消解爐內(nèi)，進(jìn)行消解，第1步溫度120℃，保持1 min，第2步溫度160℃，保持1 min，第3步溫度180℃，保持15 min。消解完全后，放冷，取消解內(nèi)罐于電熱板上緩緩加熱至120℃揮酸，放冷，殘?jiān)铀芙獠⒍ㄈ葜?5 mL，作為供試品溶液(直接測(cè)定鉛、鎘、銅)。同時(shí)制備空白對(duì)照溶液。精密吸取供試品溶液及空白對(duì)照溶液各10 mL，分別加25%碘化鉀1 mL，10%抗壞血酸1 mL，搖勻，加鹽酸(20→100)定容至25 mL，80℃水浴加熱3 min，放冷，作為砷的測(cè)定溶液。消解揮酸后樣品溶液及空白溶液分別加4%硫酸約至7 mL，加5%高錳酸鉀0.5 mL，滴加5%鹽酸羥胺至紫紅色恰消失，加4%硫酸定容至10 mL，作為汞的測(cè)定溶液。

2.2 實(shí)驗(yàn)方法 鉛、鎘采用石墨爐原子吸收法，砷采用氫化物-原子吸收法，汞采用冷蒸汽-原子吸收法，銅測(cè)定采用火焰原子吸收法。

2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

2.3.1 鉛標(biāo)準(zhǔn)溶液 取鉛單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液(100 μg/mL)1.0 mL，加 2% 硝酸定容至 100 mL(1 μg/mL)。取0、0.5、2.0、4.0、6.0、8.0 mL，加 2% 硝酸定容至100 mL。測(cè)定。

2.3.2 鎘標(biāo)準(zhǔn)溶液 取鎘單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液(1 000 μg/mL)4.0 mL，加 2%硝酸定容至 100 mL(40 μg/mL)取1.0 mL，加2%硝酸定容至100 mL(400 ng/mL)。取0、0.2、0.5、1.0、1.5、2.0 mL，加 2% 硝酸定容至100 mL。測(cè)定。

2.3.3 砷標(biāo)準(zhǔn)溶液 取砷單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液(100 μg/mL)1.0 mL，加 2% 硝酸定容至 100 mL(1 μg/mL)。取0、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0 mL，加 2% 硝酸定容至100 mL。精密吸取10 mL，加25%碘化鉀1 mL，10%抗壞血酸1 mL，搖勻，加鹽酸(20→100)定容至25 mL，80℃水浴加熱3 min，放冷，測(cè)定。

2.3.4 汞標(biāo)準(zhǔn)溶液 取汞單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液(100 μg/mL)1.0 mL，加 2% 硝酸定容至 100 mL(1 μg/mL)。取0、0.1、0.3、0.5、0.7、0.9 mL，加 4% 硫酸約至40 mL，加5%高錳酸鉀0.5 mL，滴加5%鹽酸羥胺至紫紅色恰消失，加4%硫酸定容至50 mL。

2.3.5 銅標(biāo)準(zhǔn)溶液 取銅單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液(100 μg/mL)5.0 mL，加 2% 硝酸定容至 50 mL(10 μg/mL)取 0、0.25、1.0、2.0、3.0、4.0 mL，加 2%硝酸定容至50 mL。測(cè)定。

以吸光度(A)為縱坐標(biāo)、濃度(C)為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果線性關(guān)系良好，見表1。

表1 回歸方程

2.4 檢出限 將空白溶液連續(xù)測(cè)定11次，計(jì)算其標(biāo)準(zhǔn)偏差，并由標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率(靈敏度)，得出儀器檢出限=3標(biāo)準(zhǔn)偏差/靈敏度。結(jié)果鉛、鎘、砷、汞、銅儀器檢出限分別為0.002 1、0.000 04、0.000 2、0.000 1、0.004 9 μg/mL。按取樣 0.5 g 計(jì)算，則樣品中鉛、鎘、砷、汞、銅檢出限分別為 0.104 4、0.002 0、0.028 2、0.001 4、0.243 1 μg/g。

2.5 精密度試驗(yàn) 分別取鉛、鎘、砷、汞、銅的同一標(biāo)準(zhǔn)溶液連續(xù)測(cè)定11次，方法條件同上，計(jì)算鉛RSD為 1.21%，鎘 RSD為 0.92%，砷 RSD為0.96%，汞RSD為1.56%，銅RSD為1.92%。表明儀器的精密度良好。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn) 取批號(hào)為080501001的骨折挫傷膠囊，按上述方法平行制備5份樣品測(cè)定，計(jì)算RSD。結(jié)果鉛RSD為2.45%，鎘RSD為3.44%，砷RSD為 5.61%，汞 RSD為 4.21%，銅 RSD為2.35%。表明本方法重復(fù)性良好。

2.7 回收率試驗(yàn) 取批號(hào)為080501001的骨折挫傷膠囊做加樣回收率試驗(yàn)。精密稱取本品約0.25 g，共5份，分別精密加入鉛標(biāo)準(zhǔn)溶液(1.0 μg/mL)1.0 mL，鎘標(biāo)準(zhǔn)溶液(0.4 μg/mL)0.25 mL，砷標(biāo)準(zhǔn)溶液(1.0 μg/mL)0.5 mL，汞標(biāo)準(zhǔn)溶液(1.0 μg/mL)0.1 mL，銅標(biāo)準(zhǔn)溶液(10 μg/mL)1.0 mL 按樣品制備方法對(duì)樣品進(jìn)行處理，測(cè)定，測(cè)得回收率結(jié)果見表2。

表2 回收率試驗(yàn)

2.8 樣品測(cè)定 取骨折挫傷膠囊，按樣品制備方法及上述儀器分析參數(shù)進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果見表3。

表3 樣品測(cè)定結(jié)果

3 討論

3.1 之前，筆者曾采用原子熒光光譜法僅對(duì)骨折挫傷膠囊中酸可溶性砷進(jìn)行了測(cè)定［3］，方法可行。為更有效地控制該藥品中重金屬及有害元素，本實(shí)驗(yàn)采用原子吸收光譜法分別測(cè)定骨折挫傷膠囊中酸可溶性鉛、砷、鎘、汞和銅。方法有良好的檢出限、精密度及回收率，方法準(zhǔn)確可靠，專屬性強(qiáng)，重復(fù)性好。

3.2 骨折挫傷膠囊為中成藥，成分復(fù)雜，且含有礦物藥自然銅。其中含有的金屬元素可能對(duì)重金屬及有害元素的痕量分析測(cè)定造成干擾［4-5］。本實(shí)驗(yàn)采用1%鹽酸超聲提取骨折挫傷膠囊中的酸可溶性重金屬及有害元素，是模擬口服狀態(tài)下的中成藥，測(cè)定其中可能被人體吸收的酸可溶性重金屬及有害元素。從方法學(xué)考察結(jié)果看基本可行，對(duì)含有礦物藥的中成藥中的重金屬及有害元素的測(cè)定有一定的參考意義。但尚需收集更多的口服中成藥測(cè)定數(shù)據(jù)。

3.3 WHO(世界衛(wèi)生組織)和FAO(糧農(nóng)組織)下屬的食品添加劑與污染物專業(yè)委員會(huì)JECFA提供的安全限量為每日允許攝入限量(ADI)(按平均體重60kg計(jì)):Pb0.214 mg/(人·d)，Cd0.06 mg/(人·d)，As0.128 mg/(人·d)，Hg0.013 7 mg/(人·d)，Cu30 mg/(人·d)。根據(jù)骨折挫傷膠囊的用法用量(每粒裝0.29 g;1次4～6粒，1日3次)，計(jì)算每人每日的最高攝入量。結(jié)果4個(gè)生產(chǎn)企業(yè)的13批樣品中有些批次的鉛及銅超出每人每日的最高攝入量，鎘、砷及汞均符合JECFA及FDA安全限量規(guī)定。

［1］季 申.中藥中重金屬和有害元素質(zhì)控方法的研究［C］∥藥品質(zhì)量控制與標(biāo)準(zhǔn)，第三屆中美藥典高層論壇，2008.

［2］中國(guó)藥典［S］.一部.2005.

［3］王常禹，張麗英.微波消解-原子熒光光譜法測(cè)定骨折挫傷膠囊中砷的含量［J］.中南藥學(xué)，2009，7(8):598-600.

［4］任 睿，羅卓雅，金宏宇.三種中成藥中鉛鎘砷汞殘留量測(cè)定方法研究［J］.中國(guó)藥品標(biāo)準(zhǔn)，2006，7(6):27-29.

［5］曹小勇，李新生，馮曉東.原子吸收法測(cè)定3種中成藥中銅鉛砷汞的含量［J］.中成藥，2004，26(5):附9.