半枝蓮水提工藝中野黃芩苷降解動力學研究

李一圣， 陳劍平， 何耀慧， 林榮鋒， 黃曉其， 曾惠芳， 蘇子仁*

(1.廣州中醫(yī)藥大學，廣東廣州510006;2.廣州中醫(yī)藥大學一附院藥劑科，廣東廣州510405)

半枝蓮是唇形科植物半枝蓮Scutellaria barbata D.Don的干燥全草，其性味微苦、涼，具有清熱解毒、化瘀利尿的功效［1］，主要化學成分為黃酮類、多糖、甾醇、有機酸、生物堿及其它類成分［2］;其主要有效成分野黃芩苷具有擴張血管、減少血小板數(shù)量和抑制血小板凝集等作用［3］。在半枝蓮水提的試驗過程中，發(fā)現(xiàn)不同浸泡條件下半枝蓮水提液中野黃芩苷含量變化較大。因此，本文通過測定不同溫度和浸泡時間下半枝蓮水提液中野黃芩苷的含量，進而研究其降解動力學，為有效地提高野黃芩苷的提取率提供理論依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 儀器 DIONEX SUMMIT P680高效液相色譜儀(美國戴安公司)，Sartorius CP225D電子天平(北京賽多利斯公司)，實驗室專用超純水機(重慶利迪現(xiàn)代化技術設備有限公司)。

1.2 藥材 半枝蓮藥材購自玉林市玉州區(qū)億方中草藥材經(jīng)營部，經(jīng)廣州中醫(yī)藥大學蘇子仁研究員鑒定系為唇形科植物半枝蓮Scutellaria barbata D.Don的干燥全草。

1.3 試劑 野黃芩苷對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號110842-200605);甲醇為色譜純。

2 實驗方法

2.1 半枝蓮的提取 取半枝蓮藥材粗粉20 g，精密稱定，加入12倍量相應溫度的水浸泡，恒溫保持相應的時間后(見表1)，迅速加熱至沸騰，并保持微沸狀態(tài)1 h，過濾，藥渣再加10倍量的水煎煮2次，每次1 h，過濾，合并濾液，加水定容至1 000 mL。每個溫度的每個時間點分別制備一份樣品。

表1 半枝蓮不同浸泡條件的溫度-時間考察指標點

2.2 色譜條件［1］色譜柱為Alltima C18(4.6 mm×150 mm，5 μm)，以甲醇-水-醋酸(35 ∶61 ∶4)為流動相，檢測波長為335 nm，柱溫為25℃，流速為1.0 mL/min。理論板數(shù)按野黃芩苷峰計算應不低于1 500。

2.3 供試品溶液的制備 取上述定容后的半枝蓮水提液，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.4 方法學確認

2.4.1 線性范圍的考察 精密吸取野黃芩苷對照品溶液(68.48 μg/mL)1、2、4、6、10、15、20 μL，注入液相色譜儀，測定其峰面積。以峰面積積分值為縱坐標，進樣量(μg)為橫坐標進行線性回歸分析，得出回歸方程為Y=2 489 599.70X－2 196.6(r=0.999 9)，表明野黃芩苷進樣量在 0.068 48～1.369 6 μg范圍內(nèi)線性關系良好。

2.4.2 精密度試驗 精密吸取野黃芩苷對照品溶液(68.48 μg/mL)10 μL，重復進樣 5 次，測定峰面積。結果峰面積值的RSD=1.24%。表明儀器精密度良好。

2.4.3 穩(wěn)定性試驗 分別于0、2、4、6、8 h精密吸取同一供試品溶液10 μL進樣，測得峰面積。結果RSD為2.45%，表明供試品溶液在8 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.4.4 重復性試驗 取同一樣品，平行制備成5份供試品溶液，按上述色譜條件進樣10 μL，測定峰面積并計算其含量。結果RSD=1.34%，表明該法重復性良好。

2.4.5 回收率試驗 取已知含量的水提液5份，各精密加入野黃芩苷適量，制備成供試品溶液，按上述色譜條件分別進樣10 μL，測定野黃芩苷含量并計算回收率。結果其回收率均在95%～105%之間，平均回收率為99.65%，RSD為0.84%，表明該法加樣回收良好。結果見表2。

表2 回收率測定結果

2.5 樣品測定 分別精密吸取各份供試品溶液10 μL，注入高效液相色譜儀，按上述色譜條件測定野黃芩苷含量。對照品及供試品的色譜圖見圖1，野黃芩苷含量的測定結果見表3。

表3 不同浸泡條件下半枝蓮水提液中野黃芩苷的含量測定結果

圖1 野黃芩苷對照品(A)和供試品(B)HPLC圖

2.6 降解動力學方程的擬合 對不同浸泡條件下半枝蓮水提液中野黃芩苷的含量測定結果，以野黃芩苷含量(C)和時間(t)作圖，得出不同浸泡條件下半枝蓮水提液中野黃芩苷的含量變化曲線(見圖2);再分別按零級、一級和二級動力學方程進行擬合，得出相應的動力學方程和線性相關系數(shù)，擬合結果見表4。

表4 不同溫度下半枝蓮水提工藝中野黃芩苷降解動力學方程

圖2 不同浸泡條件下半枝蓮水提液中野黃芩苷的含量變化曲線

3 結果與討論

3.1 由圖2的變化曲線可見，在20～60℃浸泡條件下，半枝蓮水提液中野黃芩苷含量的變化呈降解特征，以30～40℃降解速度最快;而在70℃以上浸泡，半枝蓮水提液中野黃芩苷含量保持不變，提取率較高。同時結合表4可知，半枝蓮藥材在20℃浸泡時野黃芩苷的降解動力學符合一級動力學特征，而30℃、40℃和50℃浸泡時野黃芩苷的降解動力學符合二級動力學特征。

3.2 半枝蓮藥材在水提過程中，不同的溫度和浸泡時間對水提液中野黃芩苷的含量變化有明顯的影響，初步推斷半枝蓮藥材在浸泡的過程中，野黃芩苷存在酶降解反應。實驗結果表明，野黃芩苷的含量變化與酶降解反應的規(guī)律相吻合，即溫度由低升高時，酶降解反應速率加快，但隨著溫度的進一步升高，酶蛋白受熱逐漸變性失活，反應速率降低。

3.3 在實際生產(chǎn)的過程中，若處方中含有半枝蓮，水提時宜在70℃以上進行投料或浸泡處理，使酶失去活性而減少野黃芩苷的降解，起到“殺酶保苷”的作用，從而有效地提高野黃芩苷的提取率。

［1］中國藥典［S］.一部.2005:77-78.

［2］鄭虎占，董澤宏，余 靖.中藥現(xiàn)代研究與應用［M］.北京:學苑出版社，1997:1685.

［3］崔建梅，吳 淞.野黃芩苷的研究進展［J］.天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，2003，15(3):255.