Survivin在腎癌中的表達(dá)及其臨床意義

任選義， 魏金星， 張雪培， 李惠翔， 王智勇， 呂新全

在泌尿系腫瘤中，腎癌的發(fā)病率僅次于膀胱癌，其發(fā)生、發(fā)展受到多種基因的調(diào)控。Survivin是一種細(xì)胞凋亡抑制因子，在腫瘤發(fā)生中的作用近年來(lái)受到廣泛關(guān)注，但在腎癌中的研究較少。我們通過(guò)免疫組化PV-9000法研究Survivin在腎細(xì)胞癌(renal cell carcinoma，RCC)不同亞型中的表達(dá)情況,并探討其與腎透明細(xì)胞癌(renal clear cell carcinoma，RCCC)的病理分級(jí)、臨床分期等的相關(guān)性。

1 材料與方法

1.1 材料來(lái)源 收集2006年1月至2007年4月間95例RCC手術(shù)切除標(biāo)本，所有病例均行腎癌根治術(shù)，術(shù)前經(jīng)彩超、CT或(和)MRI檢查明確腫瘤大小和范圍，術(shù)前未進(jìn)行放、化療。另取14例距腫瘤邊緣>5 cm的正常腎組織作為對(duì)照。病理報(bào)告：腎透明細(xì)胞癌74例，嫌色細(xì)胞癌11例，乳頭狀細(xì)胞癌9例，集合管癌1例。按照CUA 2007版腎癌診治指南推薦的AJCC臨床分期和Fuhrman核3級(jí)分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，將74例RCCC進(jìn)行分期和分級(jí)：Ⅰ期47例，Ⅱ期14例，Ⅲ期8例，Ⅳ期5例；核1級(jí)38例，2級(jí)25例，3級(jí)11例。臨床Ⅲ期中4例癌細(xì)胞侵及腎周或腎竇脂肪(T3aN0M0)，2例侵入腎靜脈(T3bN0M0)，2例侵犯下腔靜脈壁(T3cN0M0)；Ⅳ期中2例浸潤(rùn)腎周筋膜(T4N0M0)，2例有區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(T4N1M0)，1例有肺部癌轉(zhuǎn)移灶(T2N0M1)。所有標(biāo)本均經(jīng)10%甲醛溶液固定，石蠟包埋。

1.2 檢測(cè)方法 連續(xù)組織切片厚4 μm，脫蠟，水化；置切片于pH 6.0的檸檬酸緩沖液中高壓抗原修復(fù)，3% H2O2消除內(nèi)源性過(guò)氧化物酶活性；滴加一抗(兔抗人survivin多克隆抗體，即用型，稀釋度1∶100，北京中山公司)，4℃濕盒內(nèi)孵育過(guò)夜；復(fù)溫后依次滴加二抗試劑1和2 (PV-9000試劑盒，北京中山公司)，置切片于37℃溫箱內(nèi)分別孵育30 min；顯微鏡下DAB顯色；蘇木素復(fù)染，鹽酸酒精分化，脫水至透明，中性樹(shù)膠封片。

1.3 結(jié)果判定 Olympus光學(xué)顯微鏡下觀察，細(xì)胞質(zhì)或胞膜呈棕黃色為陽(yáng)性細(xì)胞。每張切片觀察10個(gè)高倍視野(200×)，每視野計(jì)數(shù)100個(gè)腫瘤細(xì)胞，陽(yáng)性細(xì)胞<10%為陰性(-)，≥10%為陽(yáng)性(+)，≥50%為強(qiáng)陽(yáng)性(+++)。用已知的小細(xì)胞肺癌陽(yáng)性切片作為陽(yáng)性對(duì)照，用PBS代替一抗作為陰性對(duì)照。由兩名病理醫(yī)師單獨(dú)讀片。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS10.0統(tǒng)計(jì)軟件，各組間率的比較采用χ2檢驗(yàn)或Fisher’s精確概率法；顯著性水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

Survivin在正常腎組織中無(wú)表達(dá)，在RCC不同病理亞型中的表達(dá)見(jiàn)表1，Survivin與RCCC組織學(xué)分級(jí)、臨床分期的關(guān)系見(jiàn)表2。因例數(shù)較少，Survivin在腎嫌色細(xì)胞癌、乳頭狀細(xì)胞癌不同分期、分級(jí)的表達(dá)情況未進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。

3 討論

Survivin是1997年發(fā)現(xiàn)的凋亡抑制蛋白(inhibitor of apoptosis proteins, IAPs)家族的一個(gè)新成員，人類Survivin基因位于染色體17q25，長(zhǎng)度范圍在75～130 kb，含3個(gè)內(nèi)含子和4個(gè)外顯子。Survivin是目前所發(fā)現(xiàn)作用最強(qiáng)的凋亡抑制蛋白之一, Rodriguez等[1]認(rèn)為Survivin通過(guò)與capase 3和capase 7結(jié)合并抑制capase 3和capase 7的活性而阻斷細(xì)胞的凋亡過(guò)程。Blanc-Brude等[2]認(rèn)為Survivin通過(guò)抑制線粒體依賴凋亡途徑的上游啟動(dòng)子capase 9和減少活性capase 3、capase 7的產(chǎn)生而發(fā)揮抗凋亡作用。

表1 Survivin在RCC不同亞型中的表達(dá)

注：Survivin(+)在腎透明、嫌色和乳頭狀細(xì)胞癌之間的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.01)，集合管癌未比較。

表2 Survivin表達(dá)與RCCC分期和核分級(jí)的關(guān)系

注：Survivin(+)在RCCC不同分級(jí)、分期組間比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.01)。

最近研究表明[3-4]，Survivin的表達(dá)與腫瘤的生物學(xué)特性和疾病分期有關(guān)，在人類多數(shù)系統(tǒng)的腫瘤如食管癌、胃癌、前列腺癌等中均有高表達(dá)。Smith等[5]認(rèn)為在泌尿系統(tǒng)中Survivin可以作為新發(fā)生的膀胱癌或復(fù)發(fā)性膀胱癌的一種簡(jiǎn)單無(wú)創(chuàng)的診斷方法。國(guó)外有關(guān)Survivin在RCC中表達(dá)情況的研究認(rèn)為其在RCC中高表達(dá)[6-7]。但是Survivin在腎癌中的研究還不如其在膀胱癌中的相關(guān)研究[8]深入透徹，其與腎癌生物學(xué)行為和臨床預(yù)后的關(guān)系尚需進(jìn)一步明確。

本研究結(jié)果顯示，Survivin蛋白在正常腎組織中無(wú)表達(dá)，而在腎細(xì)胞癌不同細(xì)胞亞型中均有較高的表達(dá)，與Smith[5], Parker[6]等的研究相似，提示Survivin可能參與抑制惡性腫瘤細(xì)胞的凋亡，促進(jìn)癌細(xì)胞逃離生長(zhǎng)監(jiān)控，使生存期延長(zhǎng)。但經(jīng)分析Survivin表達(dá)與RCCC組織學(xué)分級(jí)和臨床分期等生物學(xué)指標(biāo)之間的關(guān)系，發(fā)現(xiàn)其蛋白表達(dá)在RCCC組織學(xué)低分化組(Fuhrman核 3級(jí))與高分化組(Fuhrman核1～2級(jí))相比，陽(yáng)性率并無(wú)明顯增加；同樣在進(jìn)展期RCCC(臨床Ⅲ～Ⅳ期)與局限性RCCC(臨床Ⅰ～Ⅱ期)組間相比，Survivin陽(yáng)性表達(dá)亦無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。我們據(jù)此推斷Survivin在RCCC的發(fā)生過(guò)程中可能發(fā)揮了重要作用，但其與腫瘤細(xì)胞惡性分化程度和局部生長(zhǎng)浸潤(rùn)關(guān)系也許并不太密切，故單獨(dú)應(yīng)用Survivin尚不能夠鑒別RCCC的不同分級(jí)和分期。另外，本組中有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和肺轉(zhuǎn)移的3例 Ⅳ 期RCCC，Survivin表達(dá)均呈強(qiáng)陽(yáng)性，提示Survivin可能與癌腫轉(zhuǎn)移有關(guān)，但由于病例數(shù)較少，尚需要更多的研究支持。

一般認(rèn)為，腎嫌色細(xì)胞癌和乳頭狀腎細(xì)胞癌惡性程度低于透明細(xì)胞癌，而本研究發(fā)現(xiàn)，Survivin蛋白在腎細(xì)胞癌不同病理亞型中均有較高表達(dá)，組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。集合管癌的臨床預(yù)后最差，本組因例數(shù)過(guò)少而未做統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。我們推斷，Survivin可能僅是一個(gè)普通腫瘤指標(biāo)，目前在不同細(xì)胞亞型腎癌的鑒別中未發(fā)現(xiàn)重要價(jià)值。

綜上所述，Survivin作為一種凋亡抑制基因，在腎細(xì)胞癌的發(fā)生發(fā)展中具有一定的重要作用，可能與浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移有關(guān)，但尚不能作為鑒別腎癌各亞型及評(píng)價(jià)RCCC生物學(xué)行為的獨(dú)立指標(biāo)。

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