鹽堿水池塘致病菌數(shù)量變化與病害發(fā)生分析

鄭艷坤 鐘文慧 尤宏爭 臧莉 蔡琰

近幾年，池塘養(yǎng)殖病害日益嚴(yán)重，造成了大量的經(jīng)濟損失，經(jīng)研究很多病害皆因池塘中細(xì)菌含量超標(biāo)所致。本實驗選取鹽堿水魚蝦混養(yǎng)池塘養(yǎng)殖生產(chǎn)期間弧菌、嗜水氣單胞菌的數(shù)量檢測，排除理化指標(biāo)、不良藻相、其他病原生物等因素影響，分析水體病原菌與養(yǎng)殖對象病害發(fā)生的相關(guān)性，以期采取適時有效的調(diào)控措施，為漁業(yè)生產(chǎn)提供技術(shù)數(shù)據(jù)支持與生產(chǎn)性指導(dǎo)。

1?材料與方法

1.1?池塘狀況與養(yǎng)殖管理

采樣地點為天津市武清區(qū)大黃堡金鎖水產(chǎn)養(yǎng)殖合作社封閉式養(yǎng)殖區(qū)域，選取近兩年進行過池塘清淤且環(huán)境條件相近的池塘。養(yǎng)殖模式涉及兩種：精養(yǎng)蝦模式池塘編號為10號、11號，養(yǎng)殖面積共計2.67 hm2，水深1.5～2.0 m，養(yǎng)殖品種為南美白對蝦，投苗規(guī)格為2.5 cm，投放37.5萬尾/hm2，投苗時間為5月22日。2號、5號和7號池塘為主養(yǎng)成魚套蝦池塘，養(yǎng)殖面積共計3 hm2，水深1.5～2.0 m，成魚的放養(yǎng)情況如下：鰱250 g/尾，投放1 500尾/hm2，鳙250 g/尾，投放300尾/hm2，草魚1.0 cm/尾，投放10 500尾/hm2，套養(yǎng)南美白對蝦，投苗規(guī)格1.0 cm，投放37.5萬尾/hm2，投苗時間為2016年10月底投放完畢。養(yǎng)殖過程不換水，定期測定水質(zhì)理化及浮游生物指標(biāo)。

1.2?樣品采集與處理

5月8日～8月31日，采樣時間均在當(dāng)天的上午10點，共采11次。其中2017年5、6月每月固定時間采集水樣2次，7～8月定期每月固定時間采樣3次，其余時間不定期采集樣品。5個池塘各取樣一個，使用采水器取池塘0.5～1.0 m深度的水樣用于細(xì)菌測定及其他理化指標(biāo)的檢測，每個水樣做兩個梯度平行。

1.3?細(xì)菌培養(yǎng)計數(shù)

提前1天配置好培養(yǎng)基。弧菌采用TCBS瓊脂培養(yǎng)計數(shù)法，嗜水氣單胞菌采用AHM瓊脂培養(yǎng)計數(shù)法和RS瓊脂培養(yǎng)計數(shù)法。5個采樣池塘按照池塘水樣（原水）、10-1稀釋水樣、10-2稀釋水樣分別進行平板涂布，置于28 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h計數(shù)。

2?實驗結(jié)果

2.1?理化因子的動態(tài)變化

養(yǎng)殖水體的富營養(yǎng)化水平與魚蝦病害的發(fā)生密切相關(guān)。目前，有關(guān)養(yǎng)殖水質(zhì)因子的監(jiān)測主要包括：溫度、鹽度、pH、溶解氧（DO）、化學(xué)耗氧量（COD）以及氨氮、硝酸鹽氮、亞硝酸鹽氮、磷酸鹽、總硬度、總堿度、鈣鎂離子等營養(yǎng)鹽因子。

本實驗結(jié)合生產(chǎn)實際需要進行了有關(guān)養(yǎng)殖水質(zhì)理化因子的測定，具體情況如下。

2.1.1?兩種模式常規(guī)理化指標(biāo)變化?見（表）1-（表）6。

如（表）1-（表）6所示，鹽度變化范圍為1.15～4.80，pH變化范圍為7.75～9.53，氨氮變化范圍為0.04～1.98 mg/L， 亞硝酸鹽氮變化范圍為0.01～0.64 mg/L，磷酸鹽變化范圍為0.01～0.44 mg/L，溶解氧變化范圍為2.08～13.04 mg/L。

2.1.2?精養(yǎng)蝦模式重要水質(zhì)指標(biāo)變化?見（表）7-（表）10。

如上述（表）7-（表）10所示，總硬度變化范圍為172.8～338.88 mg/L，總堿度變化范圍為90.09～395.40 mg/L，鈣離子變化范圍為13.06～96.29 mg/L，鎂離子變化范圍為118.08～322.56 mg/L。

2.1.3?主養(yǎng)成魚套養(yǎng)蝦模式重要水質(zhì)指標(biāo)變化見（表）11-（表）14。

如（表）11-（表）14所示，總硬度變化范圍為122.88～338.5 mg/L，總堿度變化范圍為110.11～335.34 mg/L，鈣離子變化范圍為13.06～107.71 mg/L，鎂離子變化范圍為72.96～320.64 mg/L。

2.2?病原菌數(shù)量的動態(tài)變化

2.2.1?精養(yǎng)蝦養(yǎng)殖模式弧菌數(shù)量變化?見（表）15-（表）18。

精養(yǎng)蝦模式弧菌變化意2.2.2?主養(yǎng)成魚套養(yǎng)蝦養(yǎng)殖模式嗜水氣單孢菌及全菌數(shù)量變化?見（表）16-（表）18。

2.3?兩種不同養(yǎng)殖模式下藻類變化

兩種不同養(yǎng)殖模式下整個養(yǎng)殖過程中共檢測到7門48種藻類，其中，硅藻門4種，綠藻門19種，金藻門1種，隱藻門2種，藍藻門11種，裸藻門10種，甲藻門1種（見表19）。

在整個養(yǎng)殖過程中，精養(yǎng)蝦模式的浮游植物多樣性指數(shù)和種類均勻度都呈下降趨勢，尤其是在養(yǎng)殖前期，下降趨勢很明顯。而成魚套蝦模式的浮游植物多樣性指數(shù)和種類均勻度都呈波動變化趨勢，并且都是先升高再降低，養(yǎng)殖前期高于養(yǎng)殖后期。

在整個養(yǎng)殖過程中，精養(yǎng)蝦模式種類分布豐富度變化不大，而成魚套蝦模式的則呈先升高再降低趨勢。

整個養(yǎng)殖過程中共檢測到5類18種浮游動物，其中，橈足類2種、枝角類5種、幼蟲類1種、原生動物1種、輪蟲9種。由于浮游動物檢測到的種類比較少，并且多次采樣沒有檢測到浮游動物，因此本研究沒有對浮游動物進行定量分析。

3?分析與討論

3.1?理化指標(biāo)與養(yǎng)殖池塘水體細(xì)菌數(shù)量及養(yǎng)殖品種發(fā)病關(guān)聯(lián)性分析

鹽度、溶解氧、磷酸鹽變化范圍均處于正常養(yǎng)殖范圍內(nèi)，且對應(yīng)病原菌數(shù)量變化不顯著。溶解氧5月8日精養(yǎng)模式和5月25日魚蝦混養(yǎng)模式的兩個采樣池塘出現(xiàn)低于5 mg/L的情況，當(dāng)時池塘細(xì)菌數(shù)量未發(fā)生異常波動。氨氮、亞硝酸鹽氮雖然有部分池塘在某幾個測定時間點測定值略高于淡水養(yǎng)殖生產(chǎn)經(jīng)驗值氨氮≤2 mg/L、亞硝酸鹽氮≤0.2 mg/L。其中包括：主養(yǎng)魚模式2號池塘在5月8日、8月17日測定的氨氮或亞硝酸鹽氮、或兩者均高于生產(chǎn)經(jīng)驗值。精養(yǎng)蝦模式11號池塘在7月24日、8月3日、8月24日測定的氨氮或亞硝酸鹽氮，或兩者均高于生產(chǎn)經(jīng)驗值。但2號池塘細(xì)菌數(shù)量未發(fā)生異常變化，11號池細(xì)菌數(shù)量僅8月3日略微波動，這兩個池塘上述時間點均未出現(xiàn)病害。而同樣時間兩個池塘溶解氧測定值均在5 mg/L以上，綜合分析對養(yǎng)殖池塘細(xì)菌數(shù)量影響不顯著。pH變化范圍的最高值9.53出現(xiàn)在6月上旬采樣的精養(yǎng)蝦模式池塘，明顯高于漁業(yè)水質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的6.5～8.5的范圍。整個采樣監(jiān)測周期內(nèi)，pH>8.8發(fā)生于兩種模式的養(yǎng)殖池塘，時間分別為6月上旬和7月上旬，當(dāng)時池塘池塘細(xì)菌數(shù)量未發(fā)生異常波動。據(jù)有關(guān)研究，水產(chǎn)養(yǎng)殖總堿度適宜范圍為75～200 mg/L。鹽度5‰的養(yǎng)殖池塘鈣鎂離子總量為600 mg/L時，南美白對蝦的存活和生長表現(xiàn)最佳。鹽度5‰，鈣離子和鎂離子濃度保持在25～225 mg/L和270～625 mg/L，能夠保證南美白對蝦的存活和最佳生長。因此，精養(yǎng)蝦模式池塘水體鈣離子和鎂離子量低于養(yǎng)殖生產(chǎn)品種的實際需要，生產(chǎn)上向養(yǎng)殖戶提出，根據(jù)測定值采取添加乳酸鈣以及含鎂離子的肥料進行補充。

3.2?水體病原菌含量與養(yǎng)殖池塘發(fā)病關(guān)聯(lián)性分析

6月20日采樣，2號池塘細(xì)菌總菌量出現(xiàn)異常波動，嗜水氣單孢菌數(shù)量波動異常，經(jīng)平板計數(shù)、稀釋梯度計算后，病原菌含量超過了104數(shù)量級，分別為總菌22.63×104 cfu/mL、嗜水氣單胞菌3.34×104 cfu/mL（RS培養(yǎng)基）和9.88×104 cfu/mL（AHM培養(yǎng)基），后此池塘鯽魚出現(xiàn)赤皮病。8月3日采樣遇到強降雨，結(jié)果顯示，精養(yǎng)蝦兩個池塘的弧菌數(shù)量以及主養(yǎng)成魚5號和7號池塘的總菌和嗜水氣單胞菌在此次降雨中變化波動比較大。病原菌含量分別為11號蝦池弧菌0.3×104 cfu/mL，5號和7號池塘的總菌1.5×104 cfu/mL，嗜水氣單孢菌1×104 cfu/mL（RS培養(yǎng)基）和0.44×104 cfu/mL（AHM培養(yǎng)基）。強降雨等天氣突變易使養(yǎng)殖池塘水環(huán)境發(fā)生變化，對藻類和細(xì)菌的種類和數(shù)據(jù)產(chǎn)生影響。繼而可能會導(dǎo)致水生動物產(chǎn)生應(yīng)激反應(yīng)，增大致病害發(fā)生幾率。因此，在生產(chǎn)期間關(guān)注氣象，根據(jù)天氣變化提前做好防范工作十分必要。

3.3?浮游生物與養(yǎng)殖池塘水體細(xì)菌數(shù)量及養(yǎng)殖品種發(fā)病關(guān)聯(lián)性分析

兩種模式在整個養(yǎng)殖過程中，藍藻和綠藻一直有種類為優(yōu)勢種，并且前期綠藻種類數(shù)多于藍藻，但是到了養(yǎng)殖后期藍藻種類數(shù)明顯多于綠藻。在整個養(yǎng)殖過程中成魚套蝦模式的優(yōu)勢種類數(shù)明顯多于精養(yǎng)蝦模式，因此精養(yǎng)蝦池塘后期藍藻成為優(yōu)勢可能對養(yǎng)殖動物產(chǎn)生不利影響。

4?結(jié)論

綜上，鹽堿水池塘養(yǎng)殖中病原菌數(shù)量變化受單一理化指標(biāo)變化的影響不顯著。鹽堿水池塘總堿度、總硬度過高或過低會對養(yǎng)殖水體穩(wěn)定性產(chǎn)生影響，藻類種類單一遇暴雨等天氣突變因素會增加轉(zhuǎn)水的風(fēng)險，上述理化生物指標(biāo)的疊加作用會對養(yǎng)殖動物產(chǎn)生應(yīng)激反應(yīng)。另外，本項目實驗數(shù)據(jù)表明，當(dāng)病原菌數(shù)量達到總菌數(shù)量的15%以上養(yǎng)殖池通常會發(fā)病，但生產(chǎn)實際中還是需要結(jié)合池塘理化指標(biāo)、浮游生物種類數(shù)量等因素進行綜合分析判斷。