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    如何提高冰凍病理切片技術探討

    2009-06-22 02:51:22侯麗欣
    中國當代醫(yī)藥 2009年8期
    關鍵詞:處理方法質(zhì)量

    侯麗欣

    [摘要]目的:探討如何提高冷凍切片技術的常見問題及處理方法。方法:按切片完整性、平整度、染色等指標進行冷凍切片觀察并評價。結果:切片存在不完整,染色差,切片脫落,切片卷縮等問題。結論:預防冷凍切片中各種常見問題的出現(xiàn),提高冷凍切片水平,可更好地發(fā)揮冷凍切片技術在病理診斷中的作用。

    [關鍵詞]冰凍病理切片;質(zhì)量;處理方法

    [中圖分類號]R361+.1

    [文獻標識碼1 B

    [文章編號]1674-4721(2009)04(b)-073-02

    冷凍切片是一項特殊的病理制片技術,冷凍切片的質(zhì)量直接關系到手術中能否迅速作出正確的病理診斷。采用SHANDON.As620型冷凍機。它的速凍裝置可以在幾分鐘之內(nèi)下降至-50~-60℃之間,不僅縮短了制作時間,而且可以有效地保證良好的切片質(zhì)量,從而提高了病理診斷的準確率。筆者從數(shù)千例的恒冷切片制作中.總結了一些影響冷凍切片質(zhì)量的因素及處理方法?,F(xiàn)介紹如下:

    1操作方法

    1.1取材

    組織必須新鮮,盡可能不經(jīng)水洗。取材時應避免組織擠壓,防止人為假象,給診斷造成困難甚至誤診。組織塊厚度應為2.5~3.5mm,并除去周圍多余組織或脂肪,避開骨組織、鈣化組織與線頭,以免給切片造成困難,影響切片質(zhì)量。不同的組織取材厚薄不一。如致密結締組織和脂肪組織等要取薄一些;如較脆的組織,如肝、腦、淋巴結、腎、脾等要適當取厚一點。將取好的組織置于冷凍頭上迅速放入-25℃冷凍機內(nèi)的冷凍臺上。

    1.2溫度設定

    一般調(diào)至-18~-22℃。根據(jù)組織性質(zhì)不同,冷凍溫度的選擇各異:脂肪組織或含有脂肪組織、乳腺腫塊組織則以-25~-30℃為宜;實質(zhì)性腫塊組織溫度適中-18~-22℃:淋巴結、肝、腦、腎、脾等組織溫度要偏高,一般-16~-20℃。組織速凍時間一般以2~3min為宜。

    1.3切片

    冷凍切片與常規(guī)切片一樣,刀角度的調(diào)節(jié)與防卷板的正確調(diào)整,是切制優(yōu)良的冷凍切片最重要的因素,它直接影響切片的質(zhì)量。SHANDON.As620型冷凍切片機刀座調(diào)整傾斜度范圍小,主要是靠樣品頭方位變化來選擇角度,調(diào)至所需角度后固定,不要輕易改變,否則影響切片速度和質(zhì)量。

    1.4固定

    固定液的選擇至關重要。它是制片染色的主要環(huán)節(jié)之一。筆者采用甲醇70ml+無水乙醇20ml+冰醋酸10ml的混合液,固定效果理想,固定時間以30s為宜。

    1.5染色

    將切好的切片放入固定液→取出稍干,加入二甲苯(透明)→無水乙醇(脫水)→95%乙醇→80%乙醇→蘇木素(加溫30~60 s)→水洗→1%鹽酸酒精分化(10-20s)→水洗→蘭化(加溫)→伊紅→80%乙醇→05%乙醇→05%乙醇→無水乙醇(脫水)→二甲苯透明→中性樹膠封固。整個過程約10min,染色結果細胞結構清晰,色彩對比度鮮明。

    2影響切片質(zhì)量的原因及改進方法

    2.1組織切片出現(xiàn)皸裂、破碎,組織塊易脫落,切片出現(xiàn)冰晶和空隙

    主要是冷凍速度不夠快捷,組織取材太厚。切片時組織溫度太低,動作力度過大等因素造成。因此組織取材要適中,為避免組織脫落,取好的組織底部及周圍要及時入放適量的OCT,然后迅速放入冷凍機內(nèi)。OCT不宜過多,否則會影響速凍時間而產(chǎn)生冰晶。為了防止組織脫落,達到速凍效果,有效降低冰晶的產(chǎn)生,對不同組織冷凍溫度的選擇各異:脂肪組織或含有脂肪組織、乳腺腫塊,溫度要偏低-25~-30℃:實質(zhì)性腫塊組織溫度適中-18~-22℃;淋巴結、肝、腦、腎、脾等組織溫度要偏高-16~-20℃。切片時操作要熟練,動作要輕柔。

    2.2切片卷曲、折迭、垂直裂開、變窄或厚薄不均,或前進時不能切

    主要與刀座的固定,刀的角度和防卷板的距離等因素有關。切片時要檢查刀座和防卷板的螺絲是否緊固、刀的角度是否一致、組織是否穩(wěn)固在標本座上,檢查防卷板和刀之間的距離、提高防卷板的高度和調(diào)整防卷板與刀之間的角度。切片時要緩慢,不能太快,要保持刀的鋒利和清潔,防止切片厚薄不均和變窄。正確的方法:操作要熟練,切片時進刀要緩慢,修平組織,暴露最大切面,然后把防卷板調(diào)至恰好與刀刃平行,使切片能順利通過,從而達到連續(xù)切片,選最佳片附貼在載玻片上,貼片時載玻片不能壓印在組織上,讓組織片一端吸附后緩緩向下移,使片子附貼得更平整,達到無皺褶,無重疊。

    2.3切片時組織溶化,粘貼防卷板上

    這是因為防卷板含有殘留油脂和冷凍溫度不夠。應用短毛刷清潔防卷板,并且加長冷凍時間。除切片因素外,組織固定也很重要,使用甲醇和乙醇,雖然滲透力強,固定迅速,不易脫片,但由于乙醇收縮力強,滲透不徹底,且有硬化作用,故加上冰醋酸能起到輕度膨脹、軟化和均勻作用,并使細胞結構著色清晰,核染色對比度鮮明,起到互補作用,使組織達到更理想的固定和染色效果。

    制作一張優(yōu)良的切片是病理技術的永恒主題,是每位病理技術人員不懈的追求。制作一張優(yōu)良的切片必須一環(huán)扣一環(huán),環(huán)環(huán)要認真。影響切片質(zhì)量的因素很多,包括取材、切片、固定、染色,而切片過程尤為重要。只有不斷地探索和追求,才能不斷提高切片質(zhì)量。

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