如何提高冰凍病理切片技術探討

侯麗欣

[摘要]目的：探討如何提高冷凍切片技術的常見問題及處理方法。方法：按切片完整性、平整度、染色等指標進行冷凍切片觀察并評價。結果：切片存在不完整，染色差，切片脫落，切片卷縮等問題。結論：預防冷凍切片中各種常見問題的出現(xiàn)，提高冷凍切片水平，可更好地發(fā)揮冷凍切片技術在病理診斷中的作用。

[關鍵詞]冰凍病理切片；質(zhì)量；處理方法

[中圖分類號]R361+.1

[文獻標識碼1 B

[文章編號]1674-4721(2009)04(b)-073-02

冷凍切片是一項特殊的病理制片技術，冷凍切片的質(zhì)量直接關系到手術中能否迅速作出正確的病理診斷。采用SHANDON.As620型冷凍機。它的速凍裝置可以在幾分鐘之內(nèi)下降至-50～-60℃之間，不僅縮短了制作時間，而且可以有效地保證良好的切片質(zhì)量，從而提高了病理診斷的準確率。筆者從數(shù)千例的恒冷切片制作中.總結了一些影響冷凍切片質(zhì)量的因素及處理方法?，F(xiàn)介紹如下：

1操作方法

1.1取材

組織必須新鮮，盡可能不經(jīng)水洗。取材時應避免組織擠壓，防止人為假象，給診斷造成困難甚至誤診。組織塊厚度應為2.5～3.5mm，并除去周圍多余組織或脂肪，避開骨組織、鈣化組織與線頭，以免給切片造成困難，影響切片質(zhì)量。不同的組織取材厚薄不一。如致密結締組織和脂肪組織等要取薄一些；如較脆的組織，如肝、腦、淋巴結、腎、脾等要適當取厚一點。將取好的組織置于冷凍頭上迅速放入-25℃冷凍機內(nèi)的冷凍臺上。

1.2溫度設定

一般調(diào)至-18～-22℃。根據(jù)組織性質(zhì)不同，冷凍溫度的選擇各異：脂肪組織或含有脂肪組織、乳腺腫塊組織則以-25～-30℃為宜；實質(zhì)性腫塊組織溫度適中-18～-22℃：淋巴結、肝、腦、腎、脾等組織溫度要偏高，一般-16～-20℃。組織速凍時間一般以2～3min為宜。

1.3切片

冷凍切片與常規(guī)切片一樣，刀角度的調(diào)節(jié)與防卷板的正確調(diào)整，是切制優(yōu)良的冷凍切片最重要的因素，它直接影響切片的質(zhì)量。SHANDON.As620型冷凍切片機刀座調(diào)整傾斜度范圍小，主要是靠樣品頭方位變化來選擇角度，調(diào)至所需角度后固定，不要輕易改變，否則影響切片速度和質(zhì)量。

1.4固定

固定液的選擇至關重要。它是制片染色的主要環(huán)節(jié)之一。筆者采用甲醇70ml+無水乙醇20ml+冰醋酸10ml的混合液，固定效果理想，固定時間以30s為宜。

1.5染色

將切好的切片放入固定液→取出稍干，加入二甲苯(透明)→無水乙醇(脫水)→95％乙醇→80％乙醇→蘇木素(加溫30～60 s)→水洗→1％鹽酸酒精分化(10-20s)→水洗→蘭化(加溫)→伊紅→80％乙醇→05％乙醇→05％乙醇→無水乙醇(脫水)→二甲苯透明→中性樹膠封固。整個過程約10min，染色結果細胞結構清晰，色彩對比度鮮明。

2影響切片質(zhì)量的原因及改進方法

2.1組織切片出現(xiàn)皸裂、破碎，組織塊易脫落，切片出現(xiàn)冰晶和空隙

主要是冷凍速度不夠快捷，組織取材太厚。切片時組織溫度太低，動作力度過大等因素造成。因此組織取材要適中，為避免組織脫落，取好的組織底部及周圍要及時入放適量的OCT，然后迅速放入冷凍機內(nèi)。OCT不宜過多，否則會影響速凍時間而產(chǎn)生冰晶。為了防止組織脫落，達到速凍效果，有效降低冰晶的產(chǎn)生，對不同組織冷凍溫度的選擇各異：脂肪組織或含有脂肪組織、乳腺腫塊，溫度要偏低-25～-30℃：實質(zhì)性腫塊組織溫度適中-18～-22℃；淋巴結、肝、腦、腎、脾等組織溫度要偏高-16～-20℃。切片時操作要熟練，動作要輕柔。

2.2切片卷曲、折迭、垂直裂開、變窄或厚薄不均，或前進時不能切

主要與刀座的固定，刀的角度和防卷板的距離等因素有關。切片時要檢查刀座和防卷板的螺絲是否緊固、刀的角度是否一致、組織是否穩(wěn)固在標本座上，檢查防卷板和刀之間的距離、提高防卷板的高度和調(diào)整防卷板與刀之間的角度。切片時要緩慢，不能太快，要保持刀的鋒利和清潔，防止切片厚薄不均和變窄。正確的方法：操作要熟練，切片時進刀要緩慢，修平組織，暴露最大切面，然后把防卷板調(diào)至恰好與刀刃平行，使切片能順利通過，從而達到連續(xù)切片，選最佳片附貼在載玻片上，貼片時載玻片不能壓印在組織上，讓組織片一端吸附后緩緩向下移，使片子附貼得更平整，達到無皺褶，無重疊。

2.3切片時組織溶化，粘貼防卷板上

這是因為防卷板含有殘留油脂和冷凍溫度不夠。應用短毛刷清潔防卷板，并且加長冷凍時間。除切片因素外，組織固定也很重要，使用甲醇和乙醇，雖然滲透力強，固定迅速，不易脫片，但由于乙醇收縮力強，滲透不徹底，且有硬化作用，故加上冰醋酸能起到輕度膨脹、軟化和均勻作用，并使細胞結構著色清晰，核染色對比度鮮明，起到互補作用，使組織達到更理想的固定和染色效果。

制作一張優(yōu)良的切片是病理技術的永恒主題，是每位病理技術人員不懈的追求。制作一張優(yōu)良的切片必須一環(huán)扣一環(huán)，環(huán)環(huán)要認真。影響切片質(zhì)量的因素很多，包括取材、切片、固定、染色，而切片過程尤為重要。只有不斷地探索和追求，才能不斷提高切片質(zhì)量。