鴨大腸桿菌的分離鑒定及藥敏試驗(yàn)

趙嬋娟

摘要:試驗(yàn)對(duì)重慶市萬(wàn)州區(qū)某養(yǎng)鴨專業(yè)戶發(fā)病鴨分離的細(xì)菌經(jīng)培養(yǎng)特性及生化試驗(yàn),鑒定為大腸桿菌。用臨床上常用的18種抗菌素紙片對(duì)分離菌株進(jìn)行藥敏試驗(yàn),結(jié)果表明,所分離的大腸桿菌對(duì)呋喃妥因、阿米卡星和痢特靈3種藥物高度敏感,對(duì)頭孢噻肟、菌必治和慶大霉素中度敏感,而對(duì)四環(huán)素、環(huán)丙沙星等藥物表現(xiàn)為耐藥性。

關(guān)鍵詞:鴨;大腸桿菌;分離鑒定;藥敏試驗(yàn)

中圖分類號(hào):S858.32文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A文章編號(hào):1007-273X(2009)12-0021-02

鴨大腸桿菌病是鴨的常發(fā)病,?；旌匣蚶^發(fā)于其他疾病,發(fā)病鴨多以敗血癥為主,主要病理變化表現(xiàn)為心包炎、肝周炎、氣囊炎。近年來(lái),隨著我國(guó)畜牧業(yè)的發(fā)展,獸醫(yī)臨床上抗菌藥物被廣泛應(yīng)用,導(dǎo)致大腸桿菌耐藥不斷增加,治療效果下降。許多養(yǎng)殖戶往往憑經(jīng)驗(yàn)甚至是亂用藥,不僅療效差,且容易造成耐藥性和藥物殘留。因此,對(duì)當(dāng)?shù)胤蛛x的大腸桿菌菌株進(jìn)行抗生素的敏感試驗(yàn)很有必要。筆者對(duì)重慶市萬(wàn)州區(qū)某養(yǎng)殖場(chǎng)送檢的病死鴨進(jìn)行細(xì)菌分離鑒定及藥敏試驗(yàn),并提供臨床指導(dǎo)有效控制了該鴨場(chǎng)大腸桿菌病。現(xiàn)報(bào)道如下。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1病料來(lái)源2009年5月重慶市萬(wàn)州區(qū)養(yǎng)殖戶送檢的病死鴨。

1.1.2培養(yǎng)基的制備麥康凱瓊脂購(gòu)自杭州天和微生物試劑有限公司,批號(hào):20040317。各種糖及MR、VP、吲哚試驗(yàn)、枸櫞酸鹽利用試驗(yàn)和硫化氫試驗(yàn)微量發(fā)酵管,購(gòu)自杭州天和微生物試劑有限公司,批號(hào):20030622。營(yíng)養(yǎng)肉湯、VP試劑等參考文獻(xiàn)配置[1]。

1.1.3試驗(yàn)動(dòng)物9日齡榮昌雛鴨10只,購(gòu)自榮昌縣某養(yǎng)鴨專業(yè)戶,飼養(yǎng)3d后用于作動(dòng)物致病性試驗(yàn)。

1.1.4藥敏紙片藥敏紙片購(gòu)自杭州天和微生物試劑有限公司,批號(hào):20070114。

1.2方法

1.2.1病理剖檢病死鴨剖檢可見(jiàn)纖維素性心包炎,心包膜明顯增厚,其上沉著白色或黃色纖維素性附著物。肝臟腫大,表面附著纖維素樣物。

1.2.2細(xì)菌的分離培養(yǎng)和鏡檢無(wú)菌取送檢病鴨肝臟、心血接種于營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基,37℃增菌培養(yǎng)24h。然后將培養(yǎng)物在麥康凱瓊脂平板上劃線接種,37℃培養(yǎng)24h,觀察細(xì)菌的培養(yǎng)特性及革蘭氏染色結(jié)果。再挑取典型菌落接種鮮血瓊脂斜面37℃培養(yǎng)24h,4℃保存。

1.2.3細(xì)菌的生化試驗(yàn)參照參考文獻(xiàn)[1]進(jìn)行細(xì)菌生化試驗(yàn)。

1.2.5致病性試驗(yàn)取分離菌接種營(yíng)養(yǎng)肉湯,37℃培養(yǎng)18h。將10只雛鴨分為兩組,每組5只,第1組于皮下接種注射純培養(yǎng)物0.2mL/只(約含細(xì)菌0.6億),第2組注射滅菌肉湯0.2mL/只。接種24h后觀察試驗(yàn)動(dòng)物的發(fā)病及死亡情況。

1.2.6細(xì)菌的藥敏試驗(yàn)取細(xì)菌純培養(yǎng)物密集劃線接種于整個(gè)普通瓊脂平板上,將藥敏片依次均勻貼放到平板上。每個(gè)平板放5片,各紙片中心相距約24mm,紙片距平板邊緣約15mm,各紙片間距離相等。將平板倒置于37℃溫箱培養(yǎng)24h,然后觀察藥物的抑菌情況,并測(cè)定各種藥物抑菌圈的大小。

2試驗(yàn)結(jié)果

2.1培養(yǎng)特性及鏡檢結(jié)果

細(xì)菌在普通肉湯中均生長(zhǎng)良好,均勻混濁,管底有灰白色沉淀,輕搖呈云霧狀;在麥康凱瓊脂培養(yǎng)基上生長(zhǎng)出周圍粉紅色,中心深紅色的菌落。該菌經(jīng)革蘭氏染色可見(jiàn)紅色中等大小、兩端鈍圓的球桿菌,多單個(gè)散在排列。

2.2生化試驗(yàn)結(jié)果

該菌能夠發(fā)酵葡萄糖、乳糖、麥芽糖和甘露醇,產(chǎn)酸產(chǎn)氣;發(fā)酵蔗糖,不產(chǎn)氣;吲哚試驗(yàn)和MR試驗(yàn)陽(yáng)性;VP試驗(yàn)、檸檬酸鹽利用試驗(yàn)、硫化氫試驗(yàn)和尿素分解試驗(yàn)為陰性(見(jiàn)表1)。結(jié)合培養(yǎng)特性及鏡檢結(jié)果,鑒定為大腸桿菌。

2.3致病性試驗(yàn)結(jié)果

雛鴨在細(xì)菌接種后24h內(nèi)死亡4只,而剩下的在48h后也死亡。剖檢發(fā)現(xiàn)雛鴨有肝周炎,心包積液,心包膜有輕微的纖維素性滲出等病變。從死亡雛鴨的肝臟和心血中分離到了大腸桿菌。而對(duì)照組無(wú)異常表現(xiàn)。

2.4藥物敏感試驗(yàn)結(jié)果

所分離菌株對(duì)呋喃妥因、阿米卡星和痢特靈3種藥物高度敏感,對(duì)頭孢噻肟、菌必治和慶大霉素中度敏感,而對(duì)四環(huán)素、環(huán)丙沙星等藥物表現(xiàn)為耐藥(見(jiàn)表2)。

3分析討論

(1)根據(jù)分離菌的培養(yǎng)特性、染色特點(diǎn)及生化試驗(yàn)結(jié)果,所分離的細(xì)菌鑒定為大腸桿菌。經(jīng)動(dòng)物試驗(yàn)表明該分離菌株有較強(qiáng)的致病性。

(2)大腸桿菌病是一種常發(fā)病,但是卻難于控制,這不僅因?yàn)槠溲逍投?各血清型間無(wú)交叉保護(hù)性,而且不同血清型對(duì)藥物的敏感性不一致[2,3]。不同地區(qū)的大腸桿菌對(duì)藥物敏感性也各不一致[4,5]。此藥敏試驗(yàn)結(jié)果表明分離菌對(duì)呋喃妥因、阿米卡星和痢特靈3種藥物高度敏感,對(duì)頭孢噻肟、菌必治和慶大霉素中度敏感,而對(duì)四環(huán)素、環(huán)丙沙星等藥物表現(xiàn)為耐藥性,表明當(dāng)?shù)伉喆竽c桿菌分離株對(duì)常見(jiàn)的藥物均有較強(qiáng)的耐藥性。

由于大腸桿菌極易產(chǎn)生耐藥性,且介導(dǎo)其產(chǎn)生耐藥的質(zhì)粒具有遺傳性。所以一般不建議采用抗生素低劑量長(zhǎng)期預(yù)防用藥,臨床最好使用經(jīng)實(shí)驗(yàn)篩選的敏感性藥物治療劑量作治療性用藥,病愈后應(yīng)及時(shí)停止使用以防耐藥性的產(chǎn)生[6,7]。此外,使用高敏藥物時(shí),應(yīng)按說(shuō)明給藥,避免超量和濫用,每個(gè)療程應(yīng)在4d以上較好。當(dāng)畜主按照藥敏試驗(yàn)結(jié)果使用了高敏藥物呋喃妥因5d后,病情得到了很好的控制。

(3)大腸桿菌為一種條件性致病菌,鴨發(fā)大腸桿菌病除了環(huán)境衛(wèi)生條件差外,還與飼養(yǎng)密度、混群飼養(yǎng)、種蛋污染的因素有關(guān)[5]。為減少此病發(fā)生,應(yīng)搞好鴨舍清潔衛(wèi)生,勤掃糞便,定期消毒,做好通風(fēng),飼喂優(yōu)質(zhì)飼料及清潔水,采用“全進(jìn)全出”飼養(yǎng)方式,減少各種不良應(yīng)激。

參考文獻(xiàn):

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