炮制方法對(duì)杜仲中松脂醇二葡萄糖苷含量的影響

張亞強(qiáng)　宋莎莎　彭修娟　崔九成

摘 要：目的：研究不同炮制方法對(duì)杜仲中松脂醇二葡萄糖苷含量的影響。方法：采用HPLC法測(cè)定杜仲生品及6種不同炮制品中松脂醇二葡萄糖苷的含量。結(jié)果：不同炮制方法松脂醇二葡萄糖苷的含量不同，其中：鹽制砂炒Ⅱ>鹽蒸制>鹽制砂炒Ⅰ>鹽炒制Ⅱ>鹽炒制Ⅰ>清炒>生品。結(jié)論：炮制方法對(duì)杜仲中松脂醇二葡萄糖苷含量有顯著影響，且以傳統(tǒng)的杜仲鹽制砂炒方法較為理想。

關(guān)鍵詞：杜仲；炮制方法；松脂醇二葡萄糖苷

中圖分類號(hào)：R283.3文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A文章編號(hào)：1673-2197（2009）02-0049-02

杜仲為杜仲科植物杜仲（Eucommia ulmoides Oliv.）的干燥樹皮，為我國(guó)名貴藥材，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，列為上品，具有補(bǔ)肝腎、強(qiáng)筋骨、安胎［1］之功效。杜仲皮含有多種活性成分［2］，其中松脂醇二葡萄糖苷(Pinores inoldiglucoside，PDG)和綠原酸(Chlorogenic Acid)有降壓作用 ［3，4］。鹽制杜仲為2005版藥典收載的炮制品，本篇以松脂醇二葡萄糖苷含量為指標(biāo)，比較不同炮制方法對(duì)其含量的影響，為臨床鹽制杜仲提供科學(xué)依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Sartorius BP211D型電子分析天平（德國(guó)），F(xiàn)W177型中草藥粉碎機(jī)（天津市泰斯特儀器有限公司），Waters2690高效液相色譜儀，Waters996二極管陣列檢測(cè)器，Millennium32色譜工作站，H66025T型超聲清洗儀。

1.2 試藥

杜仲原藥材購自西安市藥材市場(chǎng)，經(jīng)生藥教研室王繼濤教授鑒定為杜仲科植物杜仲（Eucommia ulmoides Oliv.）的干燥樹皮。松脂醇二葡萄糖苷對(duì)照品（購于中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)111537-200501）。流動(dòng)相所用甲醇為色譜純，水為重蒸水(實(shí)驗(yàn)室自制)，鹽水均為2％的食鹽水溶液，磷酸等其它試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 不同炮制品的制備

杜仲生品的制備：將杜仲除去粗皮，洗凈潤(rùn)透，用切藥刀切成3～4㎜的橫絲（垂直于膠絲的生長(zhǎng)方向）。

不同炮制品的制備（所用鹽水均為2％的食鹽水溶液）：

（1）清炒法：取100g杜仲絲置炒制容器內(nèi)，中火炒至顏色加深，有焦斑，絲易斷時(shí)，取出晾涼。

（2）鹽炒制Ⅰ：取100g杜仲絲，置容器內(nèi)加鹽水拌勻，加蓋悶潤(rùn)。待鹽水被吸盡后，置炒制容器內(nèi)，中火炒至顏色加深，有焦斑，絲易斷時(shí)，取出晾涼。

（3）鹽炒制Ⅱ：取100g杜仲絲，置炒制容器內(nèi)，中火炒至顏色加深，有焦斑，絲易斷時(shí)，取出，噴淋鹽水拌勻，再置炒制容器內(nèi)炒干，取出晾涼。

（4）鹽制砂炒Ⅰ：將河砂置鍋內(nèi)炒至靈活狀態(tài)后，取用鹽水悶潤(rùn)好的杜仲絲100g傾入鍋內(nèi)，中火反復(fù)翻炒20min，取出晾涼。

（5）鹽制砂炒Ⅱ：將專用溫度計(jì)置入鍋內(nèi)，放入適量細(xì)砂，將100g杜仲絲置入鍋內(nèi)，中火反復(fù)翻炒20min后取出，篩去細(xì)砂，噴淋鹽水拌勻，再置炒制容器內(nèi)炒干，取出晾涼。

（6）鹽蒸制：取100g杜仲絲，置容器內(nèi)加鹽水拌勻，加蓋悶潤(rùn)。待鹽水被吸盡后，置鍋內(nèi)中火蒸制1h，取出晾涼。

2.2 色譜條件

色譜柱：Welch Materials C18(4.6mm×250mm，5μm)；流動(dòng)相：甲醇-0.4％磷酸溶液（25∶75）；柱溫：25℃；檢測(cè)波長(zhǎng)： 277nm；流速：1mL?min-1；進(jìn)樣量：10μL。

2.3 對(duì)照品溶液的制備

取松脂醇二葡萄糖苷對(duì)照品適量，置于五氧化二磷減壓干燥器中干燥12h，精密稱定，加甲醇溶解、定容，制成每1mL含松脂醇二葡萄糖苷0.218mg的對(duì)照品溶液，備用。

2.4 供試品溶液的制備

取上述不同炮制品粉末各1g，精密稱定，置于三角瓶?jī)?nèi)，精密加入甲醇25mL，稱重，超聲處理1h后，放涼，用甲醇補(bǔ)足缺失量，濾過，棄去初濾液，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.5 線性關(guān)系考察

精密吸取松脂醇二葡萄糖苷對(duì)照品溶液1、3、5、7、9μL，按2.2項(xiàng)下的色譜條件測(cè)定。以進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程為Y=441480X-3092.9（r=0.9995）。結(jié)果顯示，松脂醇二葡萄糖苷在0.218～1.962μg線性關(guān)系良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一供試品溶液，分別于0、2、4、6、8、10、12h進(jìn)樣10μl，測(cè)定松脂醇二葡萄糖苷的峰面積，結(jié)果表明，該供試樣品在12h內(nèi)具有良好的穩(wěn)定性，RSD為2.2%。

2.7 精密度試驗(yàn)

取同一供試品溶液10μL，連續(xù)進(jìn)樣5次，測(cè)定松脂醇二葡萄糖苷的峰面積。結(jié)果表明本法精密度較好，RSD為1.62%。

2.8 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

取同一樣品共5份，照“供試品溶液制備”項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，測(cè)定松脂醇二葡萄糖苷的峰面積，結(jié)果表明本法重復(fù)性良好，RSD為1.82%。

2.9 回收率試驗(yàn)

取已知含量的樣品6份，精密加入一定量的松脂醇二葡萄糖苷對(duì)照品溶液，照“供試品溶液制備”項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，取10μL注入液相色譜儀，測(cè)定松脂醇二葡萄糖苷的峰面積，計(jì)算回收率，結(jié)果顯示，松脂醇二葡萄糖苷的平均回收率為99.49%，RSD為1.81%(見表1)。

2.10 樣品的含量測(cè)定

分別吸取各供試品溶液10μL，注入液相色譜儀，按2.2項(xiàng)下的色譜條件測(cè)定，記錄峰面積，由回歸方程計(jì)算松脂醇二葡萄糖苷的含量，結(jié)果見表2。松脂醇二葡萄糖苷對(duì)照品與樣品色譜圖見圖1。

結(jié)果表明：采用不同炮制方法，松脂醇二葡萄糖苷含量不同，呈以下趨勢(shì)：鹽制砂炒Ⅱ>鹽蒸制>鹽制砂炒Ⅰ>鹽炒制Ⅱ>鹽炒制Ⅰ>清炒>生品。傳統(tǒng)的杜仲鹽制砂炒方法較為理想，松脂醇二葡萄糖苷的含量較高。

3 討論

（1）在流動(dòng)相的選擇上，通過對(duì)乙腈-不同濃度磷酸溶液系統(tǒng)，及其乙腈-磷酸溶液不同比例的洗脫系統(tǒng)進(jìn)行研究，最終選擇甲醇－0.4％磷酸溶液（25∶75）出峰較為合適，可達(dá)到基線分離。

（2）本研究對(duì)于檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇，進(jìn)行了全波長(zhǎng)掃描，松脂醇二葡萄糖苷選用277nm，系統(tǒng)穩(wěn)定性好，干擾小。

（3）通過對(duì)不同炮制方法對(duì)杜仲中有效成分的影響的實(shí)驗(yàn)研究，結(jié)果表明，生品的松脂醇二葡萄糖苷含量均明顯低于各炮制品，這可能是由于生品杜仲中橡膠絲的作用使其有效成分難以溶出，這為傳統(tǒng)的“炒斷絲”炮制標(biāo)準(zhǔn)提供了理論依據(jù)。

（4）鹽制杜仲中，松脂醇二葡萄糖苷含量大于清炒法和生品，這為鹽制杜仲的傳統(tǒng)方法提供了科學(xué)依據(jù)。

（5）通過對(duì)不同鹽制杜仲方法的比較，結(jié)果表明，砂炒杜仲中松脂醇二葡萄糖苷的含量高于不加砂的炮制方法，這可能是由于砂可以提高炒制溫度，傳熱也比較均勻，進(jìn)而提高了杜仲的斷絲率所致。

（6）鹽蒸制杜仲中松脂醇二葡萄糖苷的含量最高，但是否優(yōu)于傳統(tǒng)的炒制法，還有待于進(jìn)一步研究。

參考文獻(xiàn)：

［1］ 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典［M］.一部.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005.

［2］ 國(guó)家中醫(yī)藥管理局中華本草編委會(huì).中華本草［M］.上冊(cè).上海:上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，1996.

［3］ Charles J Sih， Ravikumar P， Huang Fuchin，et al. Separation and Synthesis of pinoresinol diglucoside moides olive［J］. Am Chem Soc，1976，17:5412.

［4］ 李家實(shí).杜仲皮與葉化學(xué)成分初步研究［J］.中藥通報(bào)，1986，11(8):41.

［5］ 臧友維.杜仲化學(xué)成分研究進(jìn)展［J］.中草藥，1989，20(4):42-43.

（責(zé)任編輯：陳涌濤）