小兒肺熱咳喘口服液質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究

趙文明 胡英婕 承 偉

[摘要] 目的 建立小兒肺熱咳喘口服液的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法 采用薄層色譜(TLC)法對(duì)口服液中的甘草酸進(jìn)行定性鑒別;采用雙波長(zhǎng)分光光度法測(cè)定口服液中黃芩苷的含量,以277nm為檢測(cè)波長(zhǎng),242nm為參比波長(zhǎng)。結(jié)果 在薄層色譜(TLC)中能檢測(cè)到甘草酸;黃芩苷濃度在1-9 μg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好,r=0.9996,平均回收率為99.42%,RSD為1.11%。結(jié)論 該操作方法簡(jiǎn)便易行,重現(xiàn)性好,結(jié)果準(zhǔn)確,適用于該制劑的質(zhì)量控制。

[關(guān)鍵詞] 小兒肺熱咳喘口服液;雙波長(zhǎng)分光光度法;黃芩苷;甘草酸;薄層色譜法

[中圖分類(lèi)號(hào)] R965.3[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A[文章編號(hào)] 1004-8650(2009)06-03-03

Quality standard of Xiao'er Feire Kechuan Koufuye

ZHAO Wen-ming , HU Yin-jie , CHENG Wei*

[Abstract] Objective To establish the quality standard of Xiao'er Feire Kechuan Koufuye. Methods Thin layer chromatography(TLC) was used for qualitative identification of glycyrrhizic acid. The content of baicalin was determined by double wavelength spectrophotometry. The determination wavelength was at 277 nm, and the comparison wavelength was at 242 nm. Results glycyrrhizic acid could be detected by TLC.The linearity range was 1-9 μg/ml with a correlation coefficient r = 0.9996, the average recovery was 99.42% , and RSD = 1.11% . Conclusion The method was simple, convenient, quick and sensitive. It provided an effective method for quality control of Xiao'er Feire Kechuan Koufuye.

[Key words] Xiao'er Feire Kechuan Koufuye; double wavelength spectrophotometry; baicalin; glycyrrhizic acid; Thin layer chromatography(TLC)

小兒肺熱咳喘口服液由麻黃、苦杏仁、黃芩、石膏、甘草等十一味中藥組成。具有清熱解毒,宣肺化痰之效,用于熱邪犯于肺衛(wèi)所致發(fā)熱,汗出,微惡風(fēng)寒,咳嗽,痰黃或兼喘息口干而渴等癥[1]。小兒肺熱咳喘口服液為2005年版藥典新增品種,含有多種有效成分,但藥典只測(cè)定了一種有效成分的含量,本實(shí)驗(yàn)采用薄層色譜(TLC)法對(duì)制劑中的甘草酸進(jìn)行了定性鑒別,并采用雙波長(zhǎng)分光光度法對(duì)黃芩苷進(jìn)行了含量測(cè)定[2],從而使其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)更加完善,真正達(dá)到保證藥品安全、有效,維護(hù)人民身體健康的目的。

1儀器與材料

CS-9301(PC)S R928型薄層掃描儀(日本SHIMADZU 公司),TU-1800 紫外分光光度計(jì)(北京普析通用儀器有限公司),TG328B電光分析天平(上海醫(yī)用激光儀器廠),FA2004N電子天平 (上海精密科學(xué)儀器有限公司), KQ-100A型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)。

硅膠GF254(青島海洋化工集團(tuán)公司),甲醇(色譜醇,天津市康科得科技有限公司),無(wú)水乙醚(分析純,天津試劑一廠),鹽酸(分析純,沈陽(yáng)東陵區(qū)紅日化工廠),無(wú)水乙醇(分析純,沈陽(yáng)化學(xué)試劑廠),正丁醇(分析純,沈陽(yáng)化學(xué)試劑廠),冰醋酸(分析純,沈陽(yáng)化學(xué)試劑廠)。

小兒肺熱咳喘口服液(黑龍江葵花藥業(yè)股份有限公司,批號(hào):20050204、20050309、20050613、20050814、0050922),甘草陰性樣品(自制,批號(hào):20060301),黃芩陰性樣品(自制,批號(hào):20060416),甘草酸對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所,批號(hào):105429-200312),黃芩苷對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所,批號(hào):154725-200401)。

2方法與結(jié)果

2.1甘草酸的鑒別

2.1.1 對(duì)照品溶液的制備:精密稱(chēng)量甘草酸對(duì)照品2 mg, 用甲醇制成濃度為1 mg/ml的對(duì)照液溶液。

2.1.2 供試品溶液的制備:精密量取小兒肺熱咳喘口服液20 ml,加稀鹽酸1 ml,用乙醚振搖提取兩次,每次10 ml,合并乙醚提取液,搖勻,蒸干,殘?jiān)蛹状? ml使溶解,作為供試品溶液[3]。

2.1.3 陰性對(duì)照品溶液的制備:取不含甘草的其他藥材,照小兒肺熱咳喘口服液制備工藝制得甘草陰性樣品,按照供試品溶液的制備方法制成溶液,作為陰性對(duì)照液。

2.1.4 甘草酸的鑒別:吸取甘草酸對(duì)照品溶液、供試品溶液和陰性對(duì)照品溶液20 μl,分別點(diǎn)于同一硅膠GF254板上,以正丁醇-醋酸-水(6:1:3)的上層溶液為展開(kāi)劑,展開(kāi),取出,晾干,置紫外燈(254 nm)下檢視[4]。供試品在與對(duì)照品相應(yīng)位置上出現(xiàn)相同的暗斑點(diǎn),而陰性樣品在此處則無(wú)斑點(diǎn)(圖1)。

2.2黃芩苷的含量測(cè)定

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備:精密量取黃芩苷對(duì)照品10 mg,用95%乙醇溶解后定容于100 ml容量瓶中,配制成0.1 mg/ml的對(duì)照品儲(chǔ)備液。精密吸取0.5 ml該儲(chǔ)備液于10 ml容量瓶中用70%稀釋至刻度,配制成5 μg/ml的對(duì)照品溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備:取制劑2 ml,置100 ml容量瓶中,用70%乙醇稀釋至刻度,過(guò)濾,再精密量取濾液1 ml置10 ml容量瓶中,用70%乙醇稀釋至刻度,配制成供試品溶液。

2.2.3 陰性對(duì)照品溶液的制備:按配方制備方法,制備缺黃芩苷的口服液,按供試品溶液配制方法配制成陰性對(duì)照液。

2.2.4測(cè)定波長(zhǎng)及參比波長(zhǎng)的選擇:量取黃芩苷對(duì)照品溶液、供試品溶液和陰性對(duì)照品溶液,分別以水為空白,在220-300 nm范圍內(nèi)進(jìn)行紫外掃描。掃描圖見(jiàn)圖2。

由圖可知,在波長(zhǎng)277 nm與242 nm處,輔料吸收度差值ΔA=A277-A242=0。因此確定檢測(cè)波長(zhǎng)為277 nm,參比波長(zhǎng)為242 nm,用等吸收雙波長(zhǎng)消去法測(cè)定黃芩苷的含量 [5-6]。

2.2.5 線性關(guān)系考察:精密吸取黃芩苷對(duì)照品儲(chǔ)備液(0.1 mg/ml)0.1、0.3、0.5、0.7、0.9、1.1、1.3 ml于10 ml容量瓶中,用70%乙醇稀釋至刻度,用紫外分光光度計(jì)在242 nm、277 nm波長(zhǎng)處分別測(cè)定其吸光度,以吸光度ΔA為縱坐標(biāo),濃度為橫坐標(biāo),計(jì)算回歸方程和相關(guān)系數(shù)。黃芩苷濃度在1-9 μg/ml范圍內(nèi)的回歸方程: ΔA =0.050C+0.052,r=0.9996。

2.2.6精密度試驗(yàn):精密吸取同一黃芩苷對(duì)照品溶液(5 μg/ml),以70%乙醇為空白,分別測(cè)定六次242、277 nm波長(zhǎng)處的吸光度值,重復(fù)進(jìn)樣6次,RSD為0.22%。

2.2.7重現(xiàn)性試驗(yàn):取同一批號(hào)(20050313)小兒肺熱咳喘口服液六支,按“2.2.2項(xiàng)”下配制照供試品溶液,配制成六份供試品溶液。以70%乙醇為空白,分別測(cè)定242nm、277 nm波長(zhǎng)處的吸光度值,RSD為0.47%。

2.2.8 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn):取同一供試品溶液,以70%乙醇為空白,分別在0、1、3、5、7、8 h測(cè)定242nm、277 nm波長(zhǎng)處的吸光度值,所配溶液在8小時(shí)內(nèi)吸收度幾乎無(wú)變化,表明供試品溶液在8小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。

2.2.9 加樣回收率實(shí)驗(yàn):精密稱(chēng)取105℃干燥至恒重的黃芩苷對(duì)照品6份(三個(gè)水平,每個(gè)水平兩份),加至已知含量的小兒肺熱咳喘口服液(批號(hào)20050313)中,按“2.2.2項(xiàng)”下供試品溶液配制方法,配制成加樣供試品溶液。以70%乙醇為空白,分別測(cè)定242nm、277 nm波長(zhǎng)處的吸光度值,實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,本方法回收率較好,結(jié)果見(jiàn)表1。

2.2.10 樣品含量測(cè)定

取五個(gè)批號(hào)小兒肺熱咳喘口服液,每個(gè)批號(hào)2瓶,按照黃芩苷含量測(cè)定方法,測(cè)定黃芩苷含量,結(jié)果見(jiàn)表2。

3討論

3.1本品組方較復(fù)雜,干擾因素多,經(jīng)反復(fù)實(shí)驗(yàn),試用多種展開(kāi)系統(tǒng)及樣品純化方法,摸索出了甘草的鑒別方法,方法分離效果好,斑點(diǎn)圓整,比移值適中,重現(xiàn)性和專(zhuān)屬性好,可有效控制制劑質(zhì)量。

3.2由于本方藥味較多,成分復(fù)雜,若經(jīng)化學(xué)方法分離提純后單波長(zhǎng)分光光度法測(cè)定含量,不僅操作繁瑣,而且不能完全消除干擾。本文所用的雙波長(zhǎng)紫外分光光度法樣品不用事先分離,直接稀釋后測(cè)定,經(jīng)計(jì)算后也可消除干擾組分的影響,是一個(gè)簡(jiǎn)便、可行的方法。

3.3本法所用儀器設(shè)備簡(jiǎn)單,只需普通的分光光度計(jì),主要誤差來(lái)源是儀器波長(zhǎng)刻度的位移對(duì)吸收曲線斜坡上的吸收值測(cè)定誤差,因而操作時(shí)要仔細(xì),儀器波長(zhǎng)要標(biāo)準(zhǔn)。

參考文獻(xiàn):

[1] 錢(qián)忠直,齊平,王國(guó)榮.《中國(guó)藥典》2005年版 (一部)品種主要增修訂情況[J].中國(guó)藥品標(biāo)準(zhǔn),2005,6(1):25.

[2] 蔣巍,劉艷杰等.黃芩苷含量測(cè)定方法研究進(jìn)展.天津化工,2006,18(6):76-78.

[3] 白莉莉,吳新安,趙剛.咳速?？诜嘿|(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究.中國(guó)藥房,2008,19(3):213-214.

[4] 趙昕,張治國(guó),鄭家富.胃靈散質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究.時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥,2001,12(5):408-409

[5] 李發(fā)美.分析化學(xué).北京:人民衛(wèi)生出版社,2004:212-213.

[6] 易毅仁,王建.雙波長(zhǎng)分光光度法測(cè)定傷速愈噴霧劑中黃芩苷的含量.基層中藥雜志,2001,15(3):8-9.

(收稿日期2009-05-08)