阿奇霉素片在ｂｅａｇｌｅ犬體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)研究

韓　平

【摘要】目的 研究阿奇霉素片在beagle犬體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)。方法 10只beagle犬單次口服500mg/kg，服藥后0～216 h間隔內(nèi)定時(shí)采集血樣，應(yīng)用高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀聯(lián)用測(cè)試樣品濃度，梯形面積法計(jì)算藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)。結(jié)果 主要的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)：Ke為(0.013±0.005)h^-1，t1/2為(65.6+36.57) h， tmax為(3.80±4.80) h, Cmax為(455.2±222.8) ug·L^-1，CL/F為(0.49±0.16 ) L·(h·kg)^-1，AUC0-216和AUC– 分別為(9296.9±2285.9) mg·h·L^-1和 (11242.5±3751.9) mg·h L^-1。結(jié)論 該方法靈敏度高、快速、簡(jiǎn)便、無(wú)雜質(zhì)干擾,適合于阿奇霉素濃度檢測(cè)以及生物等效性研究。

【關(guān)鍵詞】阿奇霉素片；高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜；藥代動(dòng)力學(xué)

Study on the Pharmacokinetics of AzithromycinTablet inBeagleDogs HAN Ping .（Department ofPharmacy ,Eerduosi Center Hospital, Eerduosi017000,China）

【Abstract】Objective To study the pharmacokinetics of azithromycin tablet in beagle dogs.Methods Ten beagle dogs were given a single oral dose of 500 mg/kg azithromycin tablet. The serum concentrations of azithromycin were determined by LC-MS/MS. The pharmacoki-netic parameters were calculated by DAS program.Results The main pharmacokinetic parameters of azithromycin for orally administered tablet were as follows: Ke is (0.013+0.005) -1 h，t1/2為is (65.6+36.57)h, tmax is (3.80+4.80) h, Cmaxis (455.2+222.8) ug·L^-1, CL/F is (0.49+0.16 ) L·(h·kg) ^-1, AUC0-216and AUC– is(9296.9+2285.9) mg·h·L^-1and (11242.5+3751.9) mg·h L^-1.Conclusion This is a senstivquick methodthat fit to determine the serum concentrations of azithromycin.

【Key words】Azithromeycin tablet; LC-MS/MS; Pharmacokinetics

【中圖分類(lèi)號(hào)】R969.1

【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A

【文章編號(hào)】1814-8824(2009)-03-0006-03

阿奇霉素(azithromycin )是新一代大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)抗生素，特點(diǎn)是耐胃酸，口服吸收好，體液、組織分布廣泛，半衰期長(zhǎng)。臨床廣泛用于呼吸道、泌尿生殖系統(tǒng)及皮膚軟組織感染的治療，對(duì)革蘭陰性菌、厭氧菌及細(xì)胞內(nèi)病原體等抗菌活性優(yōu)于紅霉素和氟羅沙星。為此，本試驗(yàn)對(duì)其藥代動(dòng)力學(xué)進(jìn)行研究，為臨床用藥提供參考。

1 藥品、試劑與儀器

藥品及試劑：阿奇霉素片，規(guī)格：每片250 mg，批號(hào)：030901，上?，F(xiàn)代浦東藥廠有限公司；阿奇霉素標(biāo)準(zhǔn)品（Azithromycin，純度>99%，中國(guó)藥品生物制品檢定所提供，批號(hào)：200202-200702）；甲醇及乙腈均為色譜純；磷酸二氫鈉、氯仿和正己烷均為分析純。

儀器：API-3000型三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜儀，配有離子噴霧離子源以及Analyst 1.4.2數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)，美國(guó)Applied Biosystem公司；Agilent 1200高效液相色譜輸液泵，自動(dòng)進(jìn)樣器，美國(guó)Agilent公司；色譜柱為Zorbax extend C18柱（2.1×150 mm I.D.，5μm粒徑），美國(guó)Agilent公司

2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

Beagle犬，普通級(jí)，共25只，雌雄兼有，按體重隨機(jī)分組，動(dòng)物月齡：6～7個(gè)月，動(dòng)物體重：8.5～10 kg，動(dòng)物來(lái)源：軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物合格證號(hào)：SCXK-（軍）2002-001，動(dòng)物房：實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證號(hào)，SYXK-（軍）2002-001。

3 給藥方法及血樣采集

禁食12 h，口服給藥，具體方法如下：給藥日早晨空腹給藥1次，用一小塊饅頭將膠囊包住，將犬嘴扳開(kāi)，用手將包有膠囊的饅頭送入犬后咽部，將犬嘴關(guān)閉，確認(rèn)咽下后將嘴松開(kāi)。服藥后4h再進(jìn)食。分別于服藥前0及服藥后0.5，1.0，2.0，3.0，4.0，6.0，8.0，12.0，24.0，48.0，96.0，144.0 h，采集前肢靜脈血6 mL，置肝素抗凝管中；轉(zhuǎn)速3 000 r·min^-1離心10 min，分離出血清；置-20℃冰箱保存，待測(cè)。

3.1 色譜條件 色譜柱：Zorbax Extend-C18柱（2.1×150 mm，5μm）；流動(dòng)相：甲醇(0.4%甲酸)：水(0.4%甲酸) = 9：1（v/v）；流速：0.3 ml·min^-1；柱溫：40℃；進(jìn)樣量：20 μL。

3.2 質(zhì)譜條件 離子源：離子噴霧離子化源；離子噴射電壓：1800 V；溫度：400℃；源內(nèi)氣體1（GS1，N2）壓力：65 p.s.i；源內(nèi)氣體2（GS2，N2）壓力：55 p.s.i；氣簾氣體（N2）壓力：15 p.s.i；正離子方式檢測(cè)；掃描方式：選擇離子反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）方式；用于定量分析的離子對(duì)為m/z749.7→ m/z 591.6(阿奇霉素)和m/z 515.4→m/z 276.0（替米沙坦，內(nèi)標(biāo)）。

4 方法學(xué)考察

4.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備阿奇霉素：取Beagle犬空白血漿50 μL，依次加入阿奇霉素標(biāo)準(zhǔn)系列溶液50 μL , 配制成相當(dāng)于血漿濃度為10，25，50，300，100，200，400和800 μg·L^-1的血漿樣品，每點(diǎn)為5樣本，按“血漿樣品的分析方法”項(xiàng)下操作，取20 μL進(jìn)行LC/MS/MS分析，記錄色譜圖；以待測(cè)物濃度為橫坐標(biāo)，待測(cè)物與內(nèi)標(biāo)物的峰面積比值為縱坐標(biāo)，用加權(quán)（W=1/χ2）最小二乘法進(jìn)行回歸運(yùn)算，得阿奇霉素標(biāo)準(zhǔn)曲線。y = 0. 0042 x + 0. 0546,相關(guān)系數(shù)r = 0. 9993, 線性范圍為3. 91 ～1 000 μg·L ^-1,最低定量限為3. 91μg·L^-1。

4.2 專屬性 在本色譜條件下測(cè)得色譜圖

A 空白血漿色譜圖

B 空白血漿中加入內(nèi)標(biāo)替米沙坦5ug·L^-1、阿奇霉素50 ug·L^-1的色譜圖

C 4號(hào)受試犬服用阿奇霉素4 h后的血漿樣品色譜圖

（1代表阿奇霉素；2代表替米沙坦）

4.3 精密度 本法測(cè)定犬血漿中阿奇霉素血藥濃度的日內(nèi)、日間精密度均<10%，符合生物樣品分析測(cè)定的要求 。阿奇霉素低25(μg·L^-1)、中100(μg·L^-1)、高400(μg·L^-1)三個(gè)濃度的提取回收率(n=5)分別為98.48%、96.02 %和96.4 %。

4.4 藥-時(shí)曲線圖

4.5 藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù) 見(jiàn)表1。

5 討論

考慮阿奇霉素分子結(jié)構(gòu)無(wú)強(qiáng)紫外吸收的基團(tuán)和自身試驗(yàn)條件，本研究建立了LC-MS/MS法測(cè)定犬血漿中阿奇霉素的濃度。與國(guó)內(nèi)外其他測(cè)定方法相比具有以下特點(diǎn)：①與國(guó)內(nèi)普遍采用的微生物測(cè)定干擾少。②與HPLC2UV 測(cè)定法相比其定量下限低可達(dá)到3.91 μg·L^-1，而HPLC2UV法［3］檢測(cè)的定量下限只有50μg·L^-1,無(wú)法滿足人體藥動(dòng)學(xué)及生物等效性研究的要求。③與電化學(xué)檢測(cè)法相比，質(zhì)譜檢測(cè)對(duì)試劑、試驗(yàn)周邊環(huán)境的要求較低，電化學(xué)檢測(cè)器過(guò)于靈敏易受多種外界因素干擾。

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