高效液相色譜法在藥品“打假”中的應(yīng)用

凌志甫　陳　博　龐裕玉　梁富耀　雷雪飛

[摘要] 目的：探討高效液相色譜法（HPLC）在藥品“打假”檢驗(yàn)工作中的應(yīng)用。方法：歸納HPLC在幾類經(jīng)常出現(xiàn)的違禁添加藥物中的檢測(cè)實(shí)例，并將HPLC與其他檢測(cè)方法進(jìn)行比較。結(jié)果：HPLC具有同時(shí)分離、分析的功能以及快速、高效、準(zhǔn)確、靈敏等優(yōu)點(diǎn)，現(xiàn)已成為藥品分離、鑒定和含量測(cè)定的首選方法之一。結(jié)論：HPLC在藥品“打假”的檢驗(yàn)工作中發(fā)揮著越來(lái)越重要的作用。

[關(guān)鍵詞] 高效液相色譜法；檢驗(yàn)；假藥；應(yīng)用

[中圖分類號(hào)]R194 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] B[文章編號(hào)] 1673-7210（2009）03（a）-131-02

假藥是困擾全球藥物發(fā)展的重要問(wèn)題，已受到各國(guó)政府的重視，據(jù)估計(jì)，全球藥品貿(mào)易中，大約有6%的藥品為假冒產(chǎn)品。對(duì)假藥的治理與打擊，很大程度上依賴于分析檢測(cè)方法的效能。高效液相色譜法（HPLC）是一種具有同時(shí)分離、分析功能和快速、高效、靈敏等優(yōu)點(diǎn)的檢測(cè)技術(shù)，現(xiàn)已成為分離、鑒定和含量測(cè)定的首選方法，其在對(duì)假藥的日常檢驗(yàn)工作中，正發(fā)揮著越來(lái)越重要的作用，為打擊藥品造假和保障人民用藥安全、有效，提供了有力的技術(shù)支持。

1 HPLC在“打假”中的應(yīng)用

1.1 對(duì)違禁添加壯陽(yáng)類藥物的檢測(cè)

枸櫞酸西地那非（俗稱偉哥）對(duì)治療陽(yáng)痿有特殊療效，因其有使用方便、見(jiàn)效快、效果明顯等優(yōu)點(diǎn)，已成為目前最暢銷的治療男性勃起功能障礙的藥物。該藥為處方藥，醫(yī)院售價(jià)較昂貴，而枸櫞酸西地那非原料卻很便宜，非法摻加可獲得高額利潤(rùn)。張啟明等[1]運(yùn)用HPLC-DAD、HPLC-MS技術(shù)檢測(cè)了中藥中非法摻加枸櫞酸西地那非的情況，發(fā)現(xiàn)22個(gè)廠家10余種劑型的65批產(chǎn)品中有13批非法摻加了枸櫞酸西地那非。

他達(dá)拉非的療效優(yōu)于西地那非，而其毒副作用會(huì)對(duì)心肌梗死、心律失常等心臟疾病患者造成很大的危害，故隨意服用后果嚴(yán)重。而添加他達(dá)拉非具有一定的隱蔽性，因此需要建立一種快速、靈敏、專屬性強(qiáng)的檢測(cè)方法對(duì)其進(jìn)行鑒定。顏杰等[2]通過(guò)研究證實(shí)，HPLC-MS技術(shù)簡(jiǎn)便、快速、專屬性好，可用于不同藥品中他達(dá)拉非的檢測(cè)，從而為藥監(jiān)部門對(duì)其進(jìn)行的認(rèn)定、查處工作提供了參考依據(jù)。

伐地那非是繼西地那非、他達(dá)拉非之后第3個(gè)用于治療男性性功能障礙（非器質(zhì)性）的藥品，其藥效較西地那非和他達(dá)拉非有所改良，但若過(guò)量服用則會(huì)引起頭痛、消化不良、顏色分辨能力下降等不良反應(yīng)[3]；對(duì)于心血管患者，還有可能導(dǎo)致突然死亡。陳稚等[4]建立的HPLC-MS技術(shù)流動(dòng)相簡(jiǎn)單、分析時(shí)間短且試劑預(yù)處理簡(jiǎn)單、靈敏度高，借助MS的定性能力，大大提高了該方法的可靠性和抗干擾能力，能準(zhǔn)確快速地測(cè)定保健食品中的伐地那非。

1.2 對(duì)違禁添加減肥類藥物的檢測(cè)

鹽酸西布曲明是目前國(guó)際、國(guó)內(nèi)廣泛采用的一種新型減肥西藥，但過(guò)量服用會(huì)導(dǎo)致消化系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)等的嚴(yán)重不良反應(yīng)[5]，因此必須在醫(yī)生的指導(dǎo)下使用。個(gè)別不法廠家在減肥中成藥、保健品中私自摻加鹽酸西布曲明，這種行為對(duì)人們的健康危害極大。張小松等[6]采用HPLC-MS技術(shù)建立了鹽酸西布曲明的檢測(cè)方法，通過(guò)對(duì)市面上15種減肥保健品進(jìn)行檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)其中有13種含有違禁的鹽酸西布曲明；該方法專屬性強(qiáng)、靈敏度高、操作簡(jiǎn)便，可用于中藥保健品中鹽酸西布曲明的監(jiān)督檢查。

芬氟拉明、安非拉酮可以通過(guò)抑制食欲達(dá)到減肥的目的，但同時(shí)也存在致幻或損傷心臟等許多副作用，對(duì)人體健康危害很大。美國(guó)及歐洲等許多國(guó)家已將其淘汰出藥品、食品市場(chǎng)，我國(guó)衛(wèi)生部也已明令禁止其在食品中的使用。然而，近年來(lái)仍有一些因食用含這些藥物的減肥食品而致死的事件發(fā)生，因此亟需一種準(zhǔn)確、靈敏的分析方法來(lái)對(duì)其進(jìn)行監(jiān)測(cè)。孫麗艷等[7]建立了同時(shí)檢測(cè)西布曲明、安非拉酮和芬氟拉明這3種成分的HPLC技術(shù)，證明該方法定性、定量準(zhǔn)確，實(shí)際應(yīng)用性強(qiáng)，并應(yīng)用此方法對(duì)12種市售減肥食品進(jìn)行檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)其中6種含有鹽酸西布曲明，提示目前減肥食品具有嚴(yán)重的安全隱患。

1.3 對(duì)違禁添加降糖類藥物的檢測(cè)

苯乙雙胍、二甲雙胍、格列本脲、格列齊特、格列甲嗪、格列美脲、甲苯磺丁脲是常用的降糖藥物，由于這些藥物原料的成本相對(duì)較低，且見(jiàn)效快，一些不法分子經(jīng)常在降糖類保健品和中藥制劑中擅自加入這些成分，患者在不知情的情況下長(zhǎng)期服用這些藥品，可能會(huì)導(dǎo)致患者體內(nèi)胰島素代謝紊亂，嚴(yán)重的甚至?xí)?dǎo)致腎功能衰竭等多種疾病的發(fā)生。而若采用HPLC對(duì)其逐一鑒定，則費(fèi)時(shí)耗材，曾茂法等[8]經(jīng)過(guò)多次試驗(yàn)，摸索出了用兩種不同色譜條件的HPLC-DAD技術(shù)，同時(shí)分離鑒定格列本脲、苯乙雙胍、二甲雙胍、甲苯磺丁脲的方法，且該法快速、簡(jiǎn)便、可靠。蔡增軒等[9]通過(guò)對(duì)格列齊特、格列甲嗪、格列美脲、格列本脲、苯乙雙胍的同時(shí)檢測(cè)，也證實(shí)了HPLC-DAD處理樣品簡(jiǎn)便、結(jié)果準(zhǔn)確可靠、重復(fù)性好、靈敏度高的特點(diǎn)。

1.4 對(duì)違禁添加其他藥物的檢測(cè)

1.4.1 麻黃堿的檢測(cè)麻黃堿是一種治療支氣管哮喘的藥物，近年來(lái)市場(chǎng)上不斷出現(xiàn)在哮喘保健品和重要保健品中非法摻入鹽酸麻黃堿的情況，這些行為嚴(yán)重危害了人民群眾的身體健康。江生[10]采用HPLC-MS對(duì)市場(chǎng)上一些哮喘保健品進(jìn)行了檢測(cè)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明，該法能快速、準(zhǔn)確地分析出保健品中是否摻有鹽酸麻黃堿，可作為此類商品“打假”的檢測(cè)方法。

1.4.2 雙氯芬酸鈉的檢測(cè)馮了性風(fēng)濕跌打酒以其療效好、價(jià)廉物美的優(yōu)點(diǎn)，一直深受廣大患者的喜愛(ài)。近年來(lái)，有一些不法廠家擅自在藥酒中添加雙氯芬酸鈉，以增強(qiáng)其抗炎止痛的效果，而此舉既會(huì)造成胃腸道出血、肝功能損傷、皮疹過(guò)敏等不良反應(yīng)的發(fā)生，又違反了《藥品管理法》的有關(guān)規(guī)定。宋輝等[11]通過(guò)實(shí)驗(yàn)，建立了HPLC定量測(cè)定雙氯芬酸鈉的方法，且該法準(zhǔn)確、簡(jiǎn)便、可操作性強(qiáng)，為該類假藥的查處提供了技術(shù)支持。

1.4.3 吲哚美辛的檢測(cè)天麻膠囊是用于治療風(fēng)濕性疾病的中藥成分制劑，屬于非處方藥，而目前市場(chǎng)上，一些天麻膠囊卻添加了非甾體類抗感染藥——吲哚美辛。吲哚美辛有較強(qiáng)的解熱、消炎、抗風(fēng)濕作用，但其毒副作用也較嚴(yán)重，不良反應(yīng)發(fā)生率為35%～50%。周艷等[12]采用HPLC-DAD技術(shù)，建立了吲哚美辛的檢測(cè)方法，并對(duì)7個(gè)廠家的11批產(chǎn)品進(jìn)行了檢查，共查出2批產(chǎn)品含有吲哚美辛。此法可供相關(guān)部門開(kāi)展工作時(shí)使用。

2 HPLC與其他檢測(cè)方法在應(yīng)用中的比較

2.1 與紫外分光光度法的比較

如醋酸潑尼松片[13]，用紫外分光光度法（UV）檢驗(yàn)含量合格，而用HPLC法測(cè)定含量?jī)H為30%～40%，為不合格。醋酸地塞米松片[13]也有類似情況，用UV法測(cè)定其含量合格，而用HPLC法測(cè)定含量卻很低，最低的甚至只有26%～31%。有文獻(xiàn)[14]報(bào)道，按《中國(guó)藥典》的UV法測(cè)定含量為96.9%的維生素B1片，用HPLC法測(cè)定時(shí)，其含量?jī)H為20.7%。

2.2 與重鉻酸鉀滴定法的比較

鹽酸小檗堿用0.016 67 mol/L重鉻酸鉀滴定液滴定測(cè)得結(jié)果為99.8%，而用HPLC檢測(cè)時(shí)其含量?jī)H為60.7%。經(jīng)分析發(fā)現(xiàn)，0.016 67 mol/L的重鉻酸鉀滴定液可以與堿性物質(zhì)發(fā)生反應(yīng)，而鹽酸小檗堿為生物堿類提取物，其提取過(guò)程中很有可能引入其他的生物堿類物質(zhì)；而HPLC法可以把鹽酸小檗堿和其他生物堿類物質(zhì)分離開(kāi)來(lái)，因而含量測(cè)定結(jié)果更準(zhǔn)確、精密。因此，《中國(guó)藥典》2005年版中鹽酸小檗堿片和鹽酸小檗堿膠囊的含量測(cè)定方法已改為高效液相色譜法[15]。

2.3 與碘滴定法的比較

《中國(guó)藥典》2000年版中，安乃近片的含量測(cè)定方法是用0.1 mol/L碘滴定液滴定法進(jìn)行的，湖南省藥檢所在檢驗(yàn)過(guò)程中發(fā)現(xiàn)有的企業(yè)生產(chǎn)的該藥品，用滴定法測(cè)得含量為96%，甚至更高，但用HPLC測(cè)定其含量卻為不合格。為此，湖南省藥檢所向國(guó)家藥品監(jiān)督管理局匯報(bào)，國(guó)家藥品監(jiān)督管理局為此特頒發(fā)了藥品檢驗(yàn)補(bǔ)充方法和檢驗(yàn)項(xiàng)目批準(zhǔn)件2005019[16]。

3 HPLC法的應(yīng)用前景

HPLC法不是萬(wàn)能的，其還有需要不斷完善的地方，但HPLC法具有同時(shí)分離、分析的功能和快速、高效、靈敏的優(yōu)點(diǎn)，及不受樣品的沸點(diǎn)、熱穩(wěn)定性和分子量等的限制，無(wú)論是合成藥物還是微生物發(fā)酵產(chǎn)生的藥物或天然物，無(wú)論是原料藥還是制劑或生物樣品中的藥物，都能適用。因此HPLC法已成為分離、鑒定和含量測(cè)定的首選方法，在鑒別假藥的檢驗(yàn)工作中更是獨(dú)當(dāng)一面，為打擊藥品造假和保障人民用藥安全、有效提供了有力的技術(shù)支持。HPLC法正發(fā)揮著其越來(lái)越重要的作用。隨著科技的發(fā)展，如HPLC-MS/MS等儀器會(huì)越來(lái)越先進(jìn)、精密，相信在不久的未來(lái)，其在藥品監(jiān)測(cè)中的應(yīng)用會(huì)更加廣泛。

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[16]國(guó)家藥品監(jiān)督管理局.藥品檢驗(yàn)補(bǔ)充方法和檢驗(yàn)項(xiàng)目批準(zhǔn)件[S].2005019.

（收稿日期：2008-11-18）