高效液相色譜法測定金英膽舒顆粒中大黃素和大黃酚的含量

孫玉松　朱正煜

摘要：目的：建立金英膽舒顆粒中大黃素和大黃酚的含量測定方法。方法：采用Shim Pack C₁₈柱，甲醇：0.1％磷酸溶液(80:20)為流動相，檢測波長為254nm。結(jié)果：大黃素的回收率為99.63％，RSD=0.79％(n=6)；大黃酚的回收率為98.10％，RSD=2.04％(n=6)。結(jié)論：本法簡便、快速、重現(xiàn)性好，可作為該制劑的定量分析方法。

關(guān)鍵詞：金英膽舒顆粒；大黃素；大黃酚；高效液相色譜

中圖分類號：R927.2文獻標識碼：A

文章編號：1007--2349(2009)09--0059--02

金英膽舒顆粒為臨床驗方開發(fā)的六類新藥，現(xiàn)已取得臨床研究批件，主要由大黃、金錢草、郁金、茵陳、柴胡、木香、蒲公英、枳殼、延胡索、白芍、雞內(nèi)金、甘草共12味中藥組成，具有清熱利濕，理氣止痛，退黃排石的功效，用于膽道感染濕熱氣滯等癥。大黃為方中君藥，而大黃的主要有效成分為蒽醌類，主要為大黃素和大黃酚、大黃甲醚等，因此選擇大黃素和大黃酚作為指標成分，在參考文獻的基礎(chǔ)上，建立了金英膽舒顆粒中大黃素和大黃酚的HPLC測定法，為該藥的質(zhì)量控制提供了定量評價方法。

1儀器與試藥

Waters 600型液相色譜儀(美國)；UV996二極管陣列檢測器(美國)；大黃素對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號：110756--200110)；大黃酚對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號：110709--200310)；甲醇(色譜純)；水(重蒸水)；其他試劑均為分析純。

2方法與結(jié)果

2，1色譜條件色譜柱；Shim Pack C₁₈柱(250×4.6mm，5μm)；流動相：甲醇—0.1％磷酸溶液(80:20)；檢測波長：254nm；柱溫：室溫；流速：1mL／min。在此條件下，樣品中大黃素和大黃酚與其它組分能達到基線分離。見圖1。

2，2對照品溶液制備取大黃素對照品、大黃酚對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1mL含大黃素8μg、大黃酚16μg的混合溶液，即得。

2，3供試品溶液的制備取本品內(nèi)容物，研細(過4號篩)，取約0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25mL，密塞，稱定重量，加熱回流30min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密吸取續(xù)濾液5mL，置具塞錐形瓶中，揮去甲醇，加2.5mol／L硫酸溶液10mL，超聲處理5min，加三氯甲烷10ml，加熱回流1h，冷卻，移至分液漏斗中，用少量三氯甲烷洗滌容器，并入分液漏斗中，分取三氯甲烷液，酸液用三氯甲烷提取2次，每次10mL，合并三氯甲烷液，回收溶劑至干，殘渣加甲醇溫熱溶解，轉(zhuǎn)移至10mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2，4陰性樣品溶液的制備缺大黃的陰性樣品，研細(過4號篩)，取約0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25mL，密塞，稱定重量，加熱回流30min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密吸取續(xù)濾液5mL，置具塞錐形瓶中，揮去甲醇，加2.5mol／L硫酸溶液10mL，超聲處理5分鐘，加三氯甲烷10mL，加熱回流1，冷卻，移至分液漏斗中，用少量三氯甲烷洗滌容器，并入分液漏斗中，分取三氯甲烷液，酸液用三氯甲烷提取2次，每次10mL，合并三氯甲烷液，回收溶劑至干，殘渣加甲醇溫熱溶解，轉(zhuǎn)移至10mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2，5標準曲線的制備

精密吸取大黃素對照品(24，5μg／mL)和大黃酚對照品(44.7μg／mL)混合溶液1.0，2.0，4.0，6.0，8.0mL，分別置10mL量瓶中，分別加甲醇稀釋至刻度，搖勻。分別精密吸取10μL，依次注入液相色譜儀中，按上述色譜條件測定，分別以大黃素濃度和大黃酚濃度為橫坐標，相應(yīng)的峰面積為縱坐標，計算，分別得線性回歸方程為：大黃素：A＝37507C+8045，r＝0.9999(n＝5)。大黃酚：A＝56064C+18217，r＝0.9998(n=5)。大黃素濃度在2.45μg／mL～19.60ug／mL范圍內(nèi)與吸收度峰面積值呈良好的線性關(guān)系；大黃酚濃度在4.47μg／mL～35.76／μg／mL范圍內(nèi)與吸收度峰面積值呈良好的線性關(guān)系。

2，6精密度試驗精密吸取樣品溶液20μL進樣，測定，重復(fù)5次，結(jié)果RSD為1.82％。證明精密度良好。結(jié)果見表1。

2，7色譜進樣穩(wěn)定性試驗取樣品溶液立即測定與在室溫放置，每隔2h進行1次，連續(xù)測定5次，結(jié)果大黃素RSD＝0.81％，大黃酚RSD=0.91％。證明樣品中大黃素和大黃酚在8h內(nèi)穩(wěn)定。

2，8重現(xiàn)性試驗依法取同一樣品，按樣品測定方法項下，進行5次平行試驗，結(jié)果表明本法重復(fù)性較好，大黃素(0.6469mg／g)和大黃酚(1.4801mg／g)的RSD分別為2，18％、1.43％。結(jié)果見表2。

2，9加樣回收率試驗按樣品測定方法項下，精密稱取已知含量的樣品，分別加入一定量的大黃素和大黃酚對照品，按上述色譜條件測定，計算回收率，結(jié)果表明本法具有良好的準確性，結(jié)果見表3。

統(tǒng)計學(xué)處理：大黃素x＝99.63％，RSD＝0.79％；大黃酚X=98.10％，RSD=2.04％2，10樣品的測定精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10μL，按上述色譜條件測定，以外標法計算大黃素和大黃酚含量，結(jié)果見表4。

3討論

大黃素和大黃酚不太穩(wěn)定，見光易氧化，對照品和樣品的配制應(yīng)使用棕色瓶，對照品盡量當天配制當天使用，避免其分解破壞，而影響測定結(jié)果。

流動相進行了大量的篩選，采用甲醇：0.1％磷酸溶液(80:20)為流動相，在保證分離度的同時又能使分析時間較短。因此采用此流動相。

采用本實驗方法結(jié)果表明本法簡便、準確、重現(xiàn)性好，可作為本品的質(zhì)量控制標準，亦可為含大黃制劑的質(zhì)量控制提供參考。