HPLC法測定中藥退黃外洗液中梔子苷的含量

唐光明　陳學(xué)松　劉慧妍

[摘要] 目的:建立測定中藥退黃外洗液中的梔子苷含量方法。方法:采用高效液相色譜法,色譜柱為島津Shim-pack C18(250 mm×4.6 mm,5 μm),以乙腈-水(15:85)為流動相,檢測波長為238 nm,流速為1.0 ml/min,柱溫為30℃。結(jié)果:梔子苷在0.0312～0.936 μg范圍呈良好的線性關(guān)系,r=0.9997,平均回收率為99.9%,RSD=2.4%。結(jié)論:該方法簡便、專屬性好、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好,可用于中藥退黃外洗液的質(zhì)量控制。

[關(guān)鍵詞] 中藥退黃外洗液;梔子苷;HPLC;含量測定

[中圖分類號]R284.1[文獻(xiàn)標(biāo)識碼]B [文章編號]1674-4721(2009)07(b)-137-02

中藥退黃外洗液由梔子、茵陳、大黃、柴胡、郁金、金錢草、車前子等十六味中藥組成。臨床上具有治療或預(yù)防新生兒黃疸的作用[1]。方中君藥梔子為瀉火除煩,清熱利尿,涼血解毒藥[2],調(diào)查發(fā)現(xiàn),梔子中含有多種的化學(xué)成分,如黃酮、環(huán)烯醚萜苷、三萜、有機(jī)酸酯,另外還含有D-甘露醇、甾醇、長鏈烷烴、醇、色素及多糖等[3]。《中國藥典》2005年版一部“梔子”項(xiàng)下收載有梔子苷的含量測定方法[4],為確保中藥退黃外洗液的療效和質(zhì)量,擬增加其有效成分梔子苷含量測定方法,作為本品的質(zhì)量控制指標(biāo)。

1 儀器與試藥

高效液相色譜儀:Agilent1200,Chemstation工作軟件;乙腈為色譜純試劑,水為重蒸水,其他試劑均為分析純;梔子苷對照品(中國藥品生物制品檢定所,批號110749-200613);中藥退黃外洗液(批號:080225,080515,080827)及缺梔子的陰性對照樣品(均由南寧市第一人民醫(yī)院提供)。

2 方法與條件

2.1色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱:Shim-pack C18(4.6 mm×250 mm,5 μm);流動相:乙腈-水(15:85);流速:1.0 ml/min;檢測波長:238 nm;進(jìn)樣量:10 μl,柱溫:30℃,分離度:1.5。理論板數(shù)按梔子苷峰計(jì),應(yīng)不低于5 000。

2.2 對照品溶液的制備

取梔子苷對照品適量,精密稱定,加甲醇制成每毫升含30 μg的溶液,即得。

2.3 供試品溶液的制備

精密量取本品2 ml,置100 ml容量瓶中,加甲醇至刻度,搖勻,濾過,即得。

2.4 陰性對照試驗(yàn)

取缺梔子的陰性對照溶液,按供試品溶液制備方法制成陰性對照溶液。并按上述色譜方法測定,結(jié)果表明,陰性對照溶液在與梔子苷對照品相同保留時間處未顯色譜峰,故陰性無干擾。

2.5線性關(guān)系考察

取梔子苷對照品溶液(31.2 μg/ml)。精密吸取對照品溶液,1、3、5、10、20、30 μl進(jìn)樣,按上述色譜條件測定梔子苷峰面積,以對照品進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo)(X), 峰面積為縱坐標(biāo)(Y),得回歸直線方程Y=893.51X+34.78,r=0.9997。結(jié)果表明,梔子苷進(jìn)樣量在0.0312～0.936 μg 范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.6重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批樣品(080225)5份,按正文擬訂的方法測定,測得梔子苷的平均含量為1.08 mg/ml,RSD=2.1%(n=5)。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一供試品溶液(080225),于0、1、2、4、8、12 h進(jìn)樣,結(jié)果測定的RSD=1.4%(n=6),試驗(yàn)表明,在12 h內(nèi),供試品溶液穩(wěn)定。

2.8 精密度試驗(yàn)

取同一供試品溶液(080225)重復(fù)進(jìn)樣5次,測定結(jié)果的RSD=0.4%,結(jié)果表明精密度理想。

2.9 加樣回收試驗(yàn)

取經(jīng)測定含量的中藥退黃外洗液(批號:080225)1 ml,平行取樣6份,分別精密加入濃度為0.59 mg/ml的梔子苷對照品溶液各2 ml,按正文擬訂的方法測定。計(jì)算加樣回收率。平均回收率為99.9%,RSD=2.4%。

2.10 樣品的測定

吸取供試品溶液與對照品溶液各10 μl,按上述色譜條件進(jìn)行測定。

3 討論

3.1 色譜條件的選擇

關(guān)于梔子苷在復(fù)方中含量測定的研究,有很多報(bào)道[5-7],本實(shí)驗(yàn)梔子苷的檢測波長“238 nm”,流動相的選擇“乙腈:水(15:85)”均參照中國藥典2005年版一部“梔子”[3]含量測定項(xiàng)下的方法。在該色譜條件下,對照品峰與雜質(zhì)峰分離較完全。

3.2 樣品溶液制備方法的選擇

本品的制備采用了水提醇沉的方法,由于梔子苷為環(huán)烯醚萜苷,極性較大[8],可以通過水提來提取,而醇沉則使到極性更大的雜質(zhì)去除掉,故本品供試品溶液制備考慮直接稀釋的方法。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,對照品峰與雜質(zhì)成分的分離效果較好,峰面積重現(xiàn)性好,加樣回收率較理想,說明該樣品溶液制備方法簡單可行。

[參考文獻(xiàn)]

[1]黃仕孫,高桂娥.中藥退黃外洗液皮膚給藥刺激性試驗(yàn)[J].兒科藥學(xué)雜志,2008,14(1):23-25.

[2]劉瑛,張浩.梔子藥材中梔子苷的含量測定[J].華西藥學(xué)雜志,2003,18(5):374-375.

[3]趙超,康文藝.梔子中梔子甙的提取工藝研究[J].河南大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版),2007,26(1):43-44.

[4]國家藥典委員會.中國藥典[S].一部.北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2005:173.

[5]肖佳尚,李曉蒙,葉向陽.復(fù)方三黃消炎片中梔子苷含量測定方法[J].中國藥品標(biāo)準(zhǔn),2006,7(5):33.

[6]王博,滕利榮,王健,等.高效液相色譜測定克郁舒神顆粒中梔子苷的含量[J].中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2007,13(4):6.

[7]王秀蘭,邰文泉,吳龍?zhí)?高效液相色譜法測定五味風(fēng)濕膠囊中梔子苷的含量[J].中國現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)雜志,2007,24(1):59.

[8]喬曉莉,肖學(xué)鳳.黃連解毒湯中梔子苷在缺血性腦血管病模型大鼠體內(nèi)的藥動學(xué)研究[J].時珍國醫(yī)國藥,2008,19(10):2462-2464.

(收稿日期:2009-04-27)