白果內(nèi)酯——銀杏葉制劑有效成分研究現(xiàn)狀

中圖分類號：R97 文獻標(biāo)識碼：A 文章編號：1006-1533(2008)08-0365-03

白果內(nèi)酯是從銀杏葉中提取而得的萜類內(nèi)酯的有效部位，是傳統(tǒng)的銀杏葉提取物的重要活性成分，對拮抗血小板活化因子作用較弱，但對神經(jīng)系統(tǒng)有保護作用［1］。近年研究表明，白果內(nèi)酯在促進神經(jīng)生長，防止腦、脊髓神經(jīng)脫髓鞘以及營養(yǎng)神經(jīng)、保護神經(jīng)等方面發(fā)揮著重要作用［2］。

但2005年版《中華人民共和國藥典》（一部）以及國家食品藥品監(jiān)督管理局WS-096（Z-016）-2004（Z）中，僅對銀杏葉制劑中萜類內(nèi)酯的總量有限制，而對白果內(nèi)酯的含量沒有明確的要求，導(dǎo)致市場所售銀杏葉制劑中白果內(nèi)酯含量參差不齊。而國際上一般將銀杏葉提取物產(chǎn)品的生產(chǎn)歷程劃分為4個時代［3］，對第4代明確要求嚴(yán)格標(biāo)示白果內(nèi)酯及銀杏內(nèi)酯的含量。

有關(guān)研究表明，影響內(nèi)酯類成分的主要因素有產(chǎn)地、采葉時間、加工方式等［4］。因此，通過控制銀杏葉產(chǎn)地、采摘時間及加工方式等可提高銀杏葉制劑中白果內(nèi)酯含量。本文就白果內(nèi)酯的作用機制、質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)及含量影響因素作一綜述。

1 白果內(nèi)酯神經(jīng)保護機制

1.1 白果內(nèi)酯保護線粒體功能

Janssens等［5］認(rèn)為，白果內(nèi)酯可抑制缺氧引起的血管內(nèi)皮細(xì)胞中三磷酸腺苷( adenosine triphosphateoe，ATP)含量的降低，這一作用可能與細(xì)胞呼吸功能增強有關(guān)，體外試驗發(fā)現(xiàn)，大鼠口服白果內(nèi)酯增加了從肝分離出來的線粒體的呼吸控制率(respiratorg control ratio，RCR)。由此可推斷，由于局部缺血可發(fā)生氧化磷酸化(0XPH0S)的解偶聯(lián)作用，白果內(nèi)酯能抵抗缺氧引起的ATP降低，只要存在氧氣，就能保存線粒體，重新生成ATP。從采用白果內(nèi)酯處理大鼠體內(nèi)分離出來的線粒體，可以進一步觀察到，這一類萜可保護線粒體免于安米妥引起的(OXPHOS的)復(fù)合物I的抑制，以及抗霉素A或粘噻唑引起的復(fù)合物III的抑制。 

1.2 白果內(nèi)酯與細(xì)胞存活

Ahlemeyer等［6］發(fā)現(xiàn)，采用白果內(nèi)酯(1μM)、銀杏內(nèi)酯B(10 μM)和銀杏內(nèi)酯J(100μM)，可將因24 h失血清凋亡小雞胚胎神經(jīng)元上升現(xiàn)象降低到控制水平。白果內(nèi)酯(10 μM)還能將小雞神經(jīng)元星形孢菌素處理12 h引起的凋亡損傷降低到接近控制水平。在取自新生大鼠海馬的神經(jīng)元和星形細(xì)胞的混合培養(yǎng)物中，總提取物(EGb 761；100 mg/L)和白果內(nèi)酯(100 μM)使神經(jīng)元免于因血清缺失而引起的凋亡，白果內(nèi)酯(100 μM)和銀杏內(nèi)酯B(100 μM)降低了星形孢菌素引起的凋亡損傷。研究人員認(rèn)為，EGb 76l具有抗凋亡活性，白果內(nèi)酯是其最有效的成分。

1.3 白果內(nèi)酯和基因表達

Chandrasekaran等［7］以神經(jīng)生長因子鑒別的大鼠PC12細(xì)胞的形態(tài)變體加以研究，結(jié)果表明，在培養(yǎng)介質(zhì)中加入白果內(nèi)酯 (15.3或30.6 μM) 而不是銀杏內(nèi)酯B(11.8或23.6 μM)，將細(xì)胞色素C氧化酶的線粒體DNA(mtDNA)編碼的COX III亞單位提高了2倍。

有關(guān)NO合成酶(NOS)異構(gòu)體和N0的產(chǎn)生，Cheung等人［8］研究表明，白果內(nèi)酯(0.8～3 μM)抑制了誘導(dǎo)性酶在人體THP-1 巨噬細(xì)胞中催化產(chǎn)生NO，但不是通過內(nèi)皮型一氧化氮合酶在人體內(nèi)皮細(xì)胞中產(chǎn)生NO。

此外，白果內(nèi)酯還能增加大鼠星形細(xì)胞中膠質(zhì)細(xì)胞源性的神經(jīng)營養(yǎng)因子和血管內(nèi)皮生長因子的表達［9］。

2 國內(nèi)含量控制標(biāo)準(zhǔn)

2.1 國內(nèi)含量控制標(biāo)準(zhǔn)

2005年版《中華人民共和國藥典》（一部）：本品（銀杏葉片）含萜類內(nèi)酯以銀杏內(nèi)酯A、銀杏內(nèi)酯B、銀杏內(nèi)酯C和白果內(nèi)酯的總量計，不得少于0.25% 。

國家食品藥品監(jiān)督管理局國家藥品標(biāo)準(zhǔn)WS-096（Z-016）-2004（Z）：本品（銀杏葉膠囊）每粒含萜類內(nèi)酯以白果內(nèi)酯、銀杏內(nèi)酯A、銀杏內(nèi)酯B、銀杏內(nèi)酯C的含量之和計，不得少于2.4 mg 。

2.2 國外含量控制標(biāo)準(zhǔn)

國際上，一般將銀杏葉提取物產(chǎn)品的生產(chǎn)歷程劃分為4個時代：第1代只標(biāo)定銀杏葉提取物的含量；第2代除了標(biāo)定銀杏葉提取物的含量以外，還標(biāo)定了提取物中黃酮苷的含量；第3代則在第2代的基礎(chǔ)上又增加了內(nèi)酯含量的標(biāo)定；第4代明確指出要嚴(yán)格標(biāo)示銀杏內(nèi)酯A、銀杏內(nèi)酯B、銀杏內(nèi)酯C及白果內(nèi)酯的含量。當(dāng)前對銀杏葉提取物產(chǎn)品的質(zhì)量要求為：含黃酮苷22%～24%或以上，含萜類內(nèi)酯2.5%～4.5%或以上，其中含白果內(nèi)酯2.0%～4.0%或以上，含銀杏酸10 mg/kg以下。

3 市售銀杏葉制劑白果內(nèi)酯含量

3.1 銀杏葉口服制劑有效成分質(zhì)量評價研究

趙榮生、嚴(yán)寶霞等［10］受北京市藥學(xué)會委托，為考察上市后的產(chǎn)品質(zhì)量，按國家藥品標(biāo)準(zhǔn)，采用HPLC方法對4廠家各3個批次銀杏葉口服制劑的含量進行測定，以銀杏葉制劑中銀杏總黃酮醇苷和銀杏萜類內(nèi)酯的含量為評價指標(biāo)，結(jié)果顯示：各廠家的銀杏葉制劑中白果內(nèi)酯及銀杏內(nèi)酯A、B、C這4種萜類內(nèi)酯的含量都不一樣，其中D廠有2個批次未檢出白果內(nèi)酯。 

3.2 市售銀杏葉提取物制劑產(chǎn)品分析報告

中國科學(xué)院上海藥物研究所采用HPLC外標(biāo)法對部分市售銀杏葉提取物制劑有效成分以及控制成分的含量進行了定量分析，結(jié)果見表1。

3.3 百路達銀杏葉膠囊產(chǎn)品分析報告

上海信誼百路達藥業(yè)有限公司 采用HPLC外標(biāo)法對本單位部分銀杏葉提取物制劑有效成分以及控制成分的含量進行了定量分析，結(jié)果見表2。

4 影響白果內(nèi)酯含量的主要因素

4.1 銀杏葉生長環(huán)境

劉叔倩等［11］通過系統(tǒng)比較全國不同氣候的銀杏分布區(qū)銀杏葉中黃酮和萜內(nèi)酯含量， 發(fā)現(xiàn)不同氣候區(qū)之間銀杏葉中這兩類成分含量差異很大?？諝夂屯寥罍囟葘︺y杏生長影響很大。銀杏生長季節(jié)的有效起點溫度為6~10 ℃，10 ℃以上才開始活躍，有效溫度的積累值為生物有效積溫。積溫和年均溫度，可作為銀杏對溫度要求的指數(shù)，以衡量銀杏在某地區(qū)能否栽植的標(biāo)準(zhǔn)。年平均氣溫為10 ℃是銀杏生長的低溫界線，小于10 ℃則生長不良甚至受凍而死亡。長江流域年均氣溫在10~22 ℃，而以年均氣溫15~16 ℃為最適宜地區(qū)。

4.2 銀杏葉樹株

一般認(rèn)為銀杏葉中黃酮和萜內(nèi)酯的含量: 幼齡樹> 老齡樹。

4.3 采摘時間

銀杏葉中黃酮類成分含量最高的月份， 分別報道為: 4～ 5 月， 9～ 11 月;萜類內(nèi)酯成分含量最高的月份， 分別報道為: 5月及8～ 10 月。所以各產(chǎn)地的銀杏葉最佳采收條件應(yīng)在分析測定后。

4.4 加工方式

銀杏葉中黃酮類和萜內(nèi)酯類的提取分離方法有: 有機溶劑萃取法，、樹脂法、酶法、超臨界CO2 萃取法和高速逆流色譜法等［11］。張立國等提出在乙醇-水體系中加入10% 對內(nèi)酯有較高溶解度的溶劑， 形成新的溶劑體系EPW ， 并用氮氣保護提取， 使黃酮含量提高22% ， 內(nèi)酯含量提高33%。

5 結(jié)語

為保證銀杏葉制劑中所含白果內(nèi)酯的含量，確保產(chǎn)品的質(zhì)量及療效，上海信誼百路達藥業(yè)充分考慮光照、溫度、土壤、氣候、水質(zhì)等綜合因素，在生態(tài)島嶼——崇明島建立了6 000多畝銀杏種植基地；嚴(yán)格遵循GAP標(biāo)準(zhǔn)；確定采摘的最佳時間為每年的8～9月，并根據(jù)采樣檢測確定最佳的采摘日期；同時采用獨有的二次低溫大孔樹脂吸附法提取有效成分。

目前，百路達正在建立自己的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜，并將指紋圖譜引入到其產(chǎn)品銀杏葉膠囊質(zhì)量評價體系中，以提高該產(chǎn)品在國際市場上的競爭力。

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(收稿日期：2008-06-18)