酸性染料比色法測定百部養(yǎng)肺膏中總生物堿的含量

摘 要 目的：建立百部總生物堿的測定方法，測定百部及其制劑總生物堿的含量。方法：以鹽酸麻黃堿為對照品，采用酸性染料比色法，在波長414 nm處測定百部總生物堿含量。結(jié)果：在51.5～206 ng范圍內(nèi)百部總生物堿的線性關(guān)系良好，回歸方程Y＝0.004 6X+0.038 4，相關(guān)系數(shù)r＝0.999 3(n=5);平均回收率為99.3 %（RSD＝1.0%）。 結(jié)論：該方法準(zhǔn)確、可靠、重復(fù)性好，可作為百部及其制劑的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。

關(guān)鍵詞 百部 生物堿 比色法 

中圖分類號：R92 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：B 文章編號：1006-1533(2008)07-0326-02

百部養(yǎng)肺膏是我院治療咳嗽的特色制劑，主藥百部為常用中藥，性味甘、苦、微溫，歸肺經(jīng)，具有潤肺止咳、殺蟲滅虱的功效，可用于治療咳嗽、肺癆、百日咳、體虱、癬疥等。百部主要有效成分是其所含的多種百部生物堿，為有效地對該藥進(jìn)行質(zhì)量控制，筆者建立了百部的含量測定方法，以提高百部養(yǎng)肺膏中總生物堿的得率和含量。

1 儀器與試藥

1.1 儀器VIS-UV 2450型可見-紫外分光光度計(jì)(日本島津)；Sartorius BS124S型電子天平 (德國賽多利斯公司，1/萬)；BRANSONB5200S－DT超聲清洗儀 (必能信超聲上海有限公司)；梅特勒-托利多 DELTA320型 pH計(jì) 。

1.2 試劑與藥品

鹽酸麻黃堿對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號：171242-200405)；溴甲酚綠(分析純，上海試劑三廠)；醋酸鈉、冰醋酸、正丁醇、甲醇等試劑均為分析純。6批百部養(yǎng)肺煎膏（本院制劑室生產(chǎn)，批號分別為060404，060608，060911，061124，070404，070530）；百部飲片3批（上海虹橋飲片廠提供，批號分別為060427，061101，070411）。

2 方法與結(jié)果

2.1 樣品供試液的制備

百部飲片：精密稱取通過60目篩的百部粉末0．5 g ，精密加入水飽和正丁醇40 mL，放置過夜，超聲20min，濾過，殘?jiān)蒙倭克柡驼〈紱_洗濾過，合并所有濾液，水浴蒸干，殘?jiān)眉状既芙?，轉(zhuǎn)移至5 mL量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

百部養(yǎng)肺膏：精密稱取樣品5 g，加水10 mL及水飽和正丁醇40 mL，放置過夜，超聲20 min，離心，取上清液20 mL，減壓蒸干，殘?jiān)眉状既芙?，轉(zhuǎn)移至5 mL量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。另取不含百部的百部養(yǎng)肺膏陰性空白樣品，同百部養(yǎng)肺膏供試品溶液制備法制得陰性對照供試品液。

2.2 對照品溶液的制備

精密稱取干燥至恒重的鹽酸麻黃堿對照品10 mg，置20 mL量瓶中，加水溶解，并稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.3 溴甲酚綠溶液的配制

精密稱取溴甲酚綠0.05 g，加pH值5.4的醋酸鈉－醋酸緩沖液100 mL，搖勻，溶解，得0.05％溴甲酚綠緩沖溶液。

2.4 測定方法

精密吸取樣品液0.1 mL，置分液漏斗中，加水0.4 mL，0.05％溴甲酚綠緩沖液2 mL，氯仿10 mL，振搖1 min，靜置1 h后，分取氯仿液。同時(shí)取0.5 mL水，同法操作，所得氯仿液作為空白，在波長414 nm處測定吸光度。

2.5 最佳吸收波長的選擇

取按2.4項(xiàng)的方法制備的鹽酸麻黃堿對照品液、樣品供試液、陰性對照液、溶劑空白對照液的氯仿液，分別在 200～800 nm波長進(jìn)行光譜掃描 ，顯示鹽酸麻黃堿對照品液和樣品供試液在波長414 nm處皆有最大吸收，而空白對照液則無吸收，不含百部的陰性對照供試品液亦無吸收，即空白液與陰性對照對生物堿的測定無干擾，故選擇414 nm波長作為測定波長。

2．6 線性關(guān)系考察

取 105 ℃干燥至恒重的鹽酸麻黃堿10.3 mg，精密稱定，置于20 mL容量瓶中 ，加水至刻度，搖勻，得濃度為0.515mg/mL的鹽酸麻黃堿溶液；分別精密量取上述溶液0.1、0.2、0.3、0.35、0.4 mL置分液漏斗中，各加水至0.5 mL，再依次精密加入0.05％溴甲酚綠溶液2 mL和氯仿10 mL，振搖1 min，靜置1 h，分別取氯仿液供測定用。同時(shí)取0.5 mL去離子水，同上述操作，將所得氯仿液作為空白。在波長414 nm處測定吸收度。以鹽酸麻黃堿的重量為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，進(jìn)行回歸，得回歸方程為Y=0.004 6X+0.038 4；相關(guān)系數(shù)r=0.999 3(n=5)，表明鹽酸麻黃堿對照品在51.5～206 ng呈良好的線性關(guān)系。

2．7 樣品穩(wěn)定性試驗(yàn)

取樣品供試液在室溫下每隔0.5 h測定1次吸收度，結(jié)果表明1 h后吸收度基本穩(wěn)定，連續(xù)測定6次，其吸收度RSD =0．1％ (n=6)。表明樣品供試液在1～3 h內(nèi)穩(wěn)定。

2．8 加樣回收試驗(yàn)

精密稱取已知總生物堿含量的百部粉末0．2 g共6份，分別準(zhǔn)確加入1.008 mg/mL鹽酸麻黃堿對照液4 mL，按2.1和2．4項(xiàng)制備樣品供試液和空白，在波長414 nm處測定吸光度，計(jì)算加樣回收率 。結(jié)果平均回收率為99.28％，RSD=1.00％(n=6)。

2.9 重復(fù)性試驗(yàn)

取百部養(yǎng)肺膏（批號：061124）5 g，精密稱定共6份，按擬定的方法制備測定，結(jié)果平均含量為1.36 mg/g，RSD為1.51％。

2.10 百部及百部養(yǎng)肺膏總生物堿的含量測定

將3批不同來源的百部飲片和6批百部養(yǎng)肺膏分別精密稱取，按2．1和2.4項(xiàng)下方法分別制備樣品供試液及空白，在波長414 nm處分別測定其吸光度，按標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算含量，結(jié)果見表1。

3 討論

百部的化學(xué)成分主要是具有復(fù)雜多環(huán)結(jié)構(gòu)的生物堿，到目前為止已分離得到近60種［1］，其中的新對葉百部堿具有顯著的鎮(zhèn)咳作用［2］，但百部服用過量會降低呼吸中樞興奮性，導(dǎo)致呼吸中樞麻痹。用于治療呼吸道疾病，百部生物堿含量與百部鎮(zhèn)咳作用的相關(guān)性量效關(guān)系的研究未見報(bào)道，本文建立了測定百部總生物堿的方法，為進(jìn)一步研究養(yǎng)肺膏中百部生物堿與鎮(zhèn)咳作用的相關(guān)量效關(guān)系提供依據(jù)。采用酸性染料比色法［3］，根據(jù)生物堿在一定的pH介質(zhì)中與某些酸性染料定量的結(jié)合形成有色絡(luò)合物，用有機(jī)溶劑萃取有色絡(luò)合物，從而求得相對的總生物堿含量。因未能獲得符合含量測定用的百部生物堿對照品，故選用廉價(jià)、易得、具有國家標(biāo)準(zhǔn)可溯源的鹽酸麻黃堿作為測定總生物堿的對照品。通過最佳測定波長的選擇，本文方法所得的測定液百部生物堿與鹽酸麻黃堿均在414 nm處有最大吸收。

百部養(yǎng)肺膏使用的原料是生百部飲片，按表1依次編號的三批飲片分別為批號061124、070404、070530三批養(yǎng)肺煎膏的投料飲片，按處方折算，總生物堿的得率分別為27.4％、27.2%和30.9％。表明目前的制劑工藝對總生物堿的提取率基本穩(wěn)定，同時(shí)可見，制劑過程中的加熱對總生物堿的提取有較大影響，養(yǎng)肺膏中的生物堿含量明顯低于藥材飲片中生物堿的含量。

取0.05％溴甲酚綠溶液1 mL、2 mL、3 mL、4 mL和5 mL對顯色劑用量進(jìn)行考察，發(fā)現(xiàn)用0.05％酸性染料緩沖液2 mL進(jìn)行顯色，已能保證本試驗(yàn)條件下樣品中的生物堿充分反應(yīng)，萃取進(jìn)入氯仿中，氯仿液的吸收度值最高。

本文建立的測定方法對百部藥材和百部養(yǎng)肺煎膏均適用，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，重復(fù)性好。

參考文獻(xiàn)

1 張宏武，鄒忠梅，徐麗珍.中藥百部炮制歷史沿革及現(xiàn)代研究概況［J］.國外醫(yī)學(xué)中醫(yī)中藥分冊，2004，26（5）：265-270.

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3 于超，張明，王宇等.栽培、野生及不同產(chǎn)地半夏總生物堿測定［J］.中國中藥雜志，2004，29（6）：583-584.

(收稿日期：2008-01-29)