十精丸延緩大鼠皮膚衰老作用的實驗研究

[摘要]目的：探討中藥復方十精丸對皮膚的抗衰老功效及作用機制。方法：觀察十精丸對老齡大鼠皮膚中SOD活力、Hyp含量、血清MDA含量及皮膚組織形態(tài)學的影響。結果：十精丸高低劑量組皮膚中SOD活力、Hyp含量高于老齡對照組（P＜0.01）；而血清MDA含量則明顯低于老齡對照組（P＜0.01），尤以高劑量組明顯；形態(tài)學觀察表明十精丸能促進皮膚真皮膠原纖維增殖，減少基底層色素沉著，角質(zhì)層變薄。結論：十精丸能夠改善皮膚衰老狀態(tài)，具有延緩皮膚衰老的作用。

[關鍵詞]十精丸；皮膚衰老；超氧化物歧化酶(SOD)；羥脯氨酸（Hyp）；皮膚形態(tài)學

[中圖分類號]Q813[文獻標識碼]A[文章編號]1008-6455（2008）10-1485-03

Experimental study on anti-skin aging of \"Shi Jing Wan\"

CHEN Li-juan，WANG Xing-yan，DONG Xing-zhong，HAN Ying，LI Zheng-nan，TAO Gui-yi

(Department of Cosmetology，Jiamusi College， Heilongjiang University of Traditional Chinese

Medicine，Jiamusi 154007，Heilongjiang，China)

Abstract： ObjectiveTo investigate the anti-aging effect and it's mechanism of \"Shi Jing Wan\" on rat skin.MethodsThe influence of \"Shi Jing Wan\" on the vigour of SOD， the content of Hyp and MDA and the changes of the histomorphology of the skin were investigated.Results\"Shi Jing Wan\" could increase the vigour of SOD and the content of Hyp(P<0.01). It also could decrease the amounts of MDA(P<0.01). The morphology of skin indicated that the complex prescription could promote collagen fibers forming， inhibit deposition of pigment and thin the corneum layer.Conclusions\"Shi Jing Wan\" can improve the aging state of the aged rats skin， delay the aging process of the skin.

Key words: Shi Jing Wan；skin aging；SOD；Hyp；morphology of skin

隨著增齡，衰老的最直觀變化即為皮膚晦暗、出現(xiàn)皺紋、色素沉著等。皮膚老化是整個機體衰老在皮膚上的反應。近年來，延緩衰老的研究日趨深入，但內(nèi)服中藥制劑來延緩衰老及防治皮膚老化的研究并不多見。目前，從中藥內(nèi)服延緩衰老角度來看，古代經(jīng)方及名藥的研究很受人們的關注。十精丸為補腎方藥之一，出自明代《普濟方》卷二百二十三·諸虛門·補虛駐顏色附論，是中醫(yī)美容保健，延年益壽之傳統(tǒng)名方。功效：溫腎滋腎，益精填髓，養(yǎng)心益智、平肝明目；烏須發(fā)，悅?cè)蓊?，久服能輕身延年。本實驗通過該方對老齡大鼠皮膚中超氧化物歧化酶(SOD)活力、過氧化脂質(zhì)的分解產(chǎn)物丙二醛（MDA）、皮膚羥脯氨酸含量（Hyp）的影響，探討該方延緩皮膚老化的作用機制，為其臨床應用提供實驗依據(jù)。

1實驗材料

1.1實驗動物：實驗動物為Wistar雌性未孕老齡大鼠(14～16月齡)，體重280±30g，共50只。由上海斯萊克實驗動物中心提供。

1.2 實驗藥物

1.2.1 實驗組用藥：十精丸：由枸杞、熟地、桂心、菊花、山茱萸、菟絲子、肉蓯蓉、蜀椒、柏子仁、白茯苓十位中藥組成。

1.2.2 對照組用藥：七寶美髯丸，購自北京益仁堂天然藥物有限公司，生產(chǎn)批號：6300033.04，生產(chǎn)日期：2006.7.23。尼爾雌醇，購自寶泰醫(yī)藥公司，生產(chǎn)批號：20060401，生產(chǎn)廠家：北京四環(huán)制藥有限公司。

1.3 實驗試劑與儀器：超氧化物歧化酶(SOD)檢測試劑盒、丙二醛（MDA）試劑盒、皮膚羥脯氨酸（Hyp）試劑盒均由南京建成生物工程研究所提供。實驗用儀器由學院科研實驗中心提供。

2實驗方法

2.1自然衰老模型建立及分組：選擇wistar自然老齡雌性大鼠（14～16月齡），適應性飼養(yǎng)1周后，隨機分成5組，每組10只，即分為空白對照組、十精丸低劑量組、十精丸高劑量組、中藥對照組（七寶美髯丸）、西藥對照組（雌激素尼爾雌醇替代療法）。

2.2 藥物制備及實驗用藥：按十精丸藥物組成及藥量(十味各等份，共200g)，精選藥材，去除雜質(zhì)，制備水煎液。中藥低劑量組濃度相當于每毫升含生藥2.0g。中藥高劑量組濃度相當于每毫升含生藥4.0g。各組按人鼠劑量換算給藥，周期一個半月。

2.3 標本制備及指標檢測：待給藥療程結束后，于最后一次給藥24h內(nèi)，將大鼠乙醚吸入麻醉后，眼球取血，分離血清；皮膚組織勻漿，按試劑盒說明書操作檢測；在各組大鼠相同部位（背部正中），無菌剪取相同面積皮膚（1cm×1cm），去除脂肪，甲醛固定，石蠟包埋，HE染色，光鏡觀察。

2.4 統(tǒng)計學處理：計量資料以x±s表示，數(shù)據(jù)處理全部采用t檢驗，P<0.05差異顯著。其中十精丸高劑量組8號死亡；西藥對照組2號患病；中藥對照組5號死亡，6號、9號患??；空白對照組1號、10號死亡，均剔除，不在統(tǒng)計結果之內(nèi)。

3結果

3.1 皮膚SOD活力、Hyp含量，血清MDA含量測定結果，見表1。

表1中顯示十精丸高低劑量組皮膚SOD活力、Hyp含量高于老齡空白對照組，而血清MDA含量低于老齡空白對照組；尤以高劑量組與老齡空白組比較，差異極顯著(P<0.01)；陽性對照組皮膚SOD、Hyp明顯高于老齡對照組，血清MDA低與老齡空白對照組，差異顯著(P<0.05)；十精丸高低劑量組同老齡對照組相比，皮膚SOD、Hyp明顯提高，血清MDA明顯降低，有極顯著差異(P<0.01)。十精丸高劑量組與中藥對照組相比差異不顯著（P＞0.05）。結果提示十精丸有增強老齡大鼠皮膚SOD活力，并能不同程度地增加大鼠皮膚組織中Hyp含量，從而促進皮膚膠原蛋白合成；降低老齡大鼠血清MDA含量，能保護細胞受損，抗氧化。提示十精丸具有抗氧化，清除自由基，增強皮膚彈性，延緩皮膚衰老的作用。

3.2 形態(tài)學觀察結果：觀察HE染色后的各組大鼠皮膚形態(tài)學差異。十精丸高劑量組大鼠皮膚表皮角化層變薄，基底層色素沉著不明顯，真皮層變厚，膠原纖維致密豐富，腺管擴張，分泌旺盛（圖1）。中藥對照（七寶美髯丸）組大鼠皮膚表皮角化層較厚，基底層色素沉著明顯，真皮膠原纖維稍多，汗腺、皮脂腺變化不明顯（圖2）?？瞻祝ɡ淆g）對照組大鼠皮膚表皮角化層厚，基底層色素沉著明顯，真皮層膠原纖維稀疏，有玻璃樣變，腺管無改變（圖3）。

4討論

4.1對SOD、MDA的影響：眾所周知，機體的衰老源于細胞的衰老，細胞衰老的自由基學說是當前抗衰老研究中的公認的學說之一[1]。自由基學說認為，衰老是由自由基(如O-2、HO-等)引起組織損傷的結果，自由基是在體內(nèi)氧化代謝過程中不斷產(chǎn)生的，可通過過氧化作用攻擊細胞膜、RNA和蛋白質(zhì)等成分，導致細胞功能嚴重受損，機體因而逐漸衰老。自由基超氧化物歧化酶(SOD)是機體唯一能特異性清除超氧自由基的酶，能清除和防止活性氧的生成和蓄積，保護細胞膜免受毒害，從而防衰抗氧化作用；隨著年齡的增長，氧自由基產(chǎn)生增加，同時，如果體內(nèi)SOD活性降低，就會導致氧自由基堆積，導致機體的快速衰老；因而SOD活力的高低與衰老有著密切的聯(lián)系[2]。機體衰老的外在反映首先表現(xiàn)在皮膚的老化，如出現(xiàn)皺紋、色素沉著等。因此對血清和皮膚SOD活力的測定，可以間接的反映機體清除氧自由基的能力。而過氧化脂質(zhì)的分解產(chǎn)物丙二醛(MDA)是極其活潑的交聯(lián)劑，能與蛋白質(zhì)、核酸等交聯(lián)，從而使其變性、失活。老年人皮膚變薄起皺，組織彈性降低就是膠原蛋白和彈性蛋白交聯(lián)變性的結果，這些交聯(lián)物具有異常的鍵，經(jīng)溶酶體吞噬后不能被消化，蓄積于細胞內(nèi)成為脂褐素，即老年色素。細胞內(nèi)脂褐素的大量沉積可引起細胞代謝失常，從而造成細胞的萎縮和死亡[2]。因而MDA的高低又間接反應了機體細胞受自由基攻擊的嚴重程度。因而SOD和MDA的高低能間接表明機體抗氧化的能力。十精丸源自《普濟方》，由枸杞、熟地、桂心（肉桂）、菊花、山茱萸、菟絲子、肉蓯蓉、蜀椒、柏子仁、白茯苓（茯苓）十味中藥組成?，F(xiàn)代研究表明，枸杞[3]、熟地[4]、菟絲子[5]、肉蓯蓉[6]、菊花[7]、肉桂[8]、茯苓[9]這7味中藥都具有清除自由基、抗氧化的功能。柏子仁也具有多種生理活性，有益智寧神、養(yǎng)心潤躁的功效[10]。十精丸方正是集各藥于一劑。本文實驗結果表明：十精丸可以明顯提高老齡大鼠血清和皮膚SOD活力， 亦可降低MDA含量，說明十精丸能增強SOD活力，降低體內(nèi)過氧化物的含量，能清除體內(nèi)自由基，保護細胞免受損傷，實現(xiàn)預防皮膚老化，延緩皮膚衰老。

4.2對皮膚組織中Hyp的影響：羥脯氨酸（Hyp）是真皮內(nèi)含量豐富且穩(wěn)定的氨基酸，可間接反映出真皮內(nèi)膠原纖維的變化。膠原纖維是皮膚真皮中的重要成分，占真皮纖維的90%，它們的含量會隨年齡的增長而明顯下降，從而使皮膚松弛，彈性降低。因此膠原含量的變化可以提示皮膚老化的程度；羥脯氨酸是膠原蛋白中最重要、含量最多、而且最穩(wěn)定的氨基酸，約占膠原氨基酸總量的13%，它的含量可以問接地反映出膠原纖維的含量，從而反映出真皮衰老的程度。鑒于自由基與膠原代謝(或羥脯氨酸含量)有密切關系，因此很多中藥同時兼有清除自由基及修復膠原兩方面的作用[11]。大量研究表明，在延緩皮膚衰老的臨床及實驗研究中，很多單味中藥及中藥復方制劑的抗衰機理的體現(xiàn)是通過檢測實驗組皮膚羥脯氨酸含量的變化來體現(xiàn)的。本實驗檢測了實驗各組大鼠皮膚組織勻漿中羥脯氨酸的含量，結果表明：各治療組羥脯氨酸（Hyp）含量明顯高于老齡空白對照組，說明十精丸能不同程度地增加大鼠皮膚組織中Hyp含量，從而促進皮膚膠原蛋白合成，提示具有增強皮膚彈性，延緩皮膚衰老的作用。

4.3對皮膚組織形態(tài)學的影響：十精丸實驗組能使表皮角化層變薄，基底層色素沉著明顯減輕；真皮層變厚，膠原纖維致密豐富，腺管擴張，分泌旺盛。

總之，由以上研究可以得出：十精丸具有延緩皮膚衰老抗氧化的良好作用。

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[收稿日期]2008-07-25[修回日期]2008-09-29

編輯/張惠娟