白藜蘆醇對小鼠免疫和抗氧化功能的影響

卓杰先　張　琳　余學好

摘要：目的：觀察白藜蘆醇對小鼠免疫和抗氧化功能的影響。方法：采用小鼠游泳訓練的方法復制疲勞模型。30只健康昆明種小鼠隨機分成3組，對照組、運動組、運動+白藜蘆醇組，每組10只。游泳訓練6周，6周后進行力竭游泳。測定小鼠腹腔巨噬細胞吞噬能力，胸腺和脾臟指數(shù)，小鼠血清超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)含量。結果：白藜蘆醇組與運動組比較，運動小鼠力竭時間明顯延長，腹腔巨噬細胞的吞噬能力明顯增高（玃<0.05），脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)變化明顯增加；小鼠血清超氧化物歧化酶(SOD)活性升高，血清丙二醛(MDA)含量下降。結論：白藜蘆醇可提高機體免疫力和抗氧化功能。

關鍵詞：白藜蘆醇；小鼠；免疫；抗氧化

中圖分類號：G804.7文獻標識碼：A文章編號：1007-3612(2008)09-1230-03

The Effect ofResveratrol on Immune and antioxidative functions of Mice

ZHUO Jie-xian1，ZHANG Lin2，YU Xie-hao3

(1.Department of PE and Health Education; Liuzhou Teachers College; Liuzhou Guangxi ,China 545004;

2.Institute of Physical Education,South China Normal University, Guangzhou, Guangdong，510631；

3.Huaihua Coollege;Huai huaHu nang,China 418008)

Abstract:Objective : The effects of resveratrol on immune and antioxidative functions of micewere observed. Methods: Thirty healthy male Kunming mice were selected and randomly divided into 3 groups with 10 micein each group: control group,exercise group;exercise + resveratrol group. The swimming training is 6 weeds,carry on strength to exhaust and swim 6 weeks later. Measure PhysicalPerformance ,the ability to engulf chicken's erythrocyte of little mouse's abdominal cavity's macrophages, calculate the thymus and spleen index,the activity of SOD and the content of MDA. Results:The group of exercise + resveratrol obviously lengthen theduration of exhaustive swimming, increase the ability of engulfing of abdominal cavity's macrophages compared with exercise group,The impact on spleen index, thymic index is obvious improve. The activity of SOD was increased ,but the content of MDA was decreased. Conclusion: Resveratrol could improve the immune and antioxidative functions of mice.

Key words: Resveratrol； mice；mmune；antioxidative function

白藜蘆醇（Resvertrol,Res）化學名稱芪三酚，結構為3，5，4三羥基二苯乙烯(3，5，4-trihydroxystibene)，分子式C14狧12狾3，為多酚類物質，是葡萄屬植物產生的一種植物抗毒素,是天然的抗氧化物和自由基廓清劑。目前至少發(fā)現(xiàn)已經在70多種的植物中發(fā)現(xiàn)了白藜蘆醇。隨著對白藜蘆醇研究的深入，人們發(fā)現(xiàn)它具有多種藥理活性，包括抗氧化活性，保肝、抗炎、抗腫瘤、調節(jié)血脂、抗病原微生物等多種有益于人體的生物學作用^［2-4］。在運動醫(yī)學領域有著廣闊的應用前景^［5,6］，為了觀察白藜蘆醇對運動免疫的調節(jié)作用，本實驗采用小鼠游泳訓練的方法復制疲勞模型，探討白藜蘆醇對運動小鼠免疫功能和抗氧化功能的影響，為科學的體育訓練提供實驗依據(jù)。

1材料與方法

1.1實驗動物與藥品

1.1.1實驗動物采用健康雄性30只5周齡小鼠，體重（24±5 g），由中山大學動物實驗中心提供。飼養(yǎng)條件：所有動物均以國家標準動物飼養(yǎng)常規(guī)飼養(yǎng)，分組飼養(yǎng)每只每天進食約5 g，自然晝夜律變化光照，室溫（28±1）℃。相對濕度40%～60%，定時通風換氣，每天對動物飼養(yǎng)室進行半小時紫外線照射。

1.1.2藥品白藜蘆醇購自Sigma公司，純度達98%。

1.2實驗儀器┆721分光光度計（上海第三儀器廠）、SK-1快速混勻器（上海醫(yī)科大學儀器廠），7DC-500B低速冷凍多管離心機（上海安亭科學科學儀器廠）、MP120-1電子天平（上海醫(yī)科大學儀器廠），SASP實驗動物游泳池，生物顯微鏡。

1.3方法

1.3.1動物分組與游泳訓練方案動物分組：把30只小白鼠稱重編號，再按體重隨機分成3組，每組10只。對照組、運動組、運動+白藜蘆醇組。運動組灌胃生理鹽水，白藜蘆醇組灌胃白藜蘆醇提取物10 mg/kg體重。白藜蘆醇均用0.2%羥甲基纖維鈉配制。在每次游泳前2 h灌胃，灌胃量按小鼠體重決定。

游泳訓練方案：運動組和白藜蘆醇組小鼠在實驗動物游泳池中進行游泳訓練，水流動速度3.5轉/min，水深40～50 cm，每天游泳訓練2次，水溫32±2℃，游泳時間從20 min開始，每隔一天遞增5 min，直至第6周每次游泳時間增為90 min。游泳訓練共6周，每周訓練5 d，每天游泳2次，時間為早上9：00和下午16：00開始。 第6周的最后1 d,3組大鼠均進行體重及最大游泳時間的測定，以大鼠沉到水底6 s內不再游出水而為止。

1.4指標測定

1.4.1腹腔巨噬細胞吞噬功能的測定雞紅細胞制備：從雞翅膀下抽取靜脈血4 mL，肝素抗凝，2 000 r/min離心8 min去血漿。再用0.90%Nacl溶液洗滌，再次離心，棄去上清液，留下紅細胞，重復洗滌3次。

Hanks液的制備：甲液：1） Nacl：40 g，MgSO4.7狧2O：0.5 g，Mgcl2.6狧2O: 0.5 g雙蒸水定容至225 mL。

2） Cacl2 0.7 g 雙蒸水定容到25 mL。

3） 將（1）（2）混合加氯仿0.5 mL。

乙液：NaHPO4．12H2O 0.76 g，KH2PO40.3 g，酚紅0.1 g，葡萄糖0.5 g雙蒸水定容至250 mL加錄仿0.5 mL。

應用液：貯存液甲液：乙液：雙蒸水=1：1：18，85℃～90℃無菌20 min 4℃保存1個月，使用前用3.5%的NaHCO3緩沖，PH至7. 2 。

小鼠腹腔注射5%可溶性淀粉1.5 mL/只，3 d后，于取材前3 h腹腔注射5%雞紅細胞懸液1.5 mL/只，取材時腹腔再注射Hanks液1.5 mL/只，然后輕柔腹部數(shù)次，5 min后取腹腔內液于試管內，置于37℃水浴箱內孵育30 min。然后從每個試管里取1滴于載玻片上，推平成膜狀，晾干，wrights染色6 min，再用自來水漂洗，晾干后生物顯微鏡（×1000）觀察。每一張玻片觀察100個巨噬細胞，計算吞噬雞紅細胞的巨噬細胞數(shù)和被吞噬的雞紅細胞個數(shù)，以吞噬百分率表示。吞噬百分率：吞噬雞紅細胞的巨噬細胞數(shù)/100個巨噬細胞×100%。

1.4.2胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)小鼠處死前稱體重，處死后取其脾臟和胸腺并分別稱重，計算脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù)^［7］。

脾臟指數(shù)=脾臟重量/體重（mg/g） 胸腺指數(shù)=胸腺重量/體重（mg/g）

1.4.3超氧化物歧化酶(SOD）丙二醛(MDA}的測定嚴格按照南京建成生物工程研究所提供的試劑盒說明操作。

1.5統(tǒng)計學處理實驗結果用SPSS 11.5進行統(tǒng)計分析，計量以玈表示，采用秩和t檢驗進行顯著性分析。

2結果

2.1各組小鼠脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)、腹腔巨噬細胞吞噬率檢測結果（表1）脾臟指數(shù)白藜蘆醇組與運動組比較顯著增加（玃<0.05），與對照組比較無顯著性差異（P＞0.05）；胸腺指數(shù)白藜蘆醇組與運動組比較顯著增加（P<0.05），與對照組比較無顯著性差異（P＞0.05）；腹腔巨噬細胞吞噬率白藜蘆醇組與運動組比較有顯著差異（P<0.05），與對照組比較無明顯差異（P＞0.05）。

2.2超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛( MDA)、力竭游泳時間檢測結果（表2）白藜蘆醇組血清超氧化物歧化酶(SOD)活性與運動組比較顯著增加（玃<0.05），與對照組比較無顯著性差異（P＞0.05）；丙二醛( MDA)含量白藜蘆醇組與運動組比較顯著減少（玃<0.05），與對照組比較無顯著性差異（P＞0.05）；力竭游泳時間白藜蘆醇組與運動組、對照組比較都有顯著差異（P<0.05）。說明白藜蘆醇能顯著提高小鼠抗氧化能力和運動耐力。

3討論

Nieman曾提出，日常進行30 min左右的中等強度運動有利于健康，而超過90 min的大負荷訓練將使免疫功能出現(xiàn)不利的變化，關于運動對免疫系統(tǒng)及其功能的影響大致可歸納兩個方面，中等強度適量的運動能激活免疫系統(tǒng)，并提高免疫功能，而劇烈過量的運動則抑制免疫功能。Pedersen把這一免疫功能的抑制期稱“open window”期，在這一特殊時期各種致病因子很容易進入機體內，引起機體感染^［8,9］。預防免疫機能下降是運動性疲勞研究中需著重解決的問題之一。本實驗使小鼠進行疲勞性訓練，觀察疲勞小鼠免疫功能的變化及白藜蘆醇的作用。

3.1白藜蘆醇對運動小鼠免疫器官的影響胸腺和脾臟屬于機體兔疫器官，在T細胞發(fā)育、成熟和T. B細胞發(fā)揮免疫監(jiān)控過程中發(fā)揮重要作用。研究表明過量運動會損傷機體免疫器官，導致脾臟和胸腺重量降低，并發(fā)生結構的變化，使器官的免疫反應降低。研究表明，白藜蘆醇具有很明顯的增強小鼠體液和細胞免疫功能的作用，抑制炎癥發(fā)生^［10］，可通過IL-6，NK細胞，CD4/CD8，CD4(+)，CD25(+)從而發(fā)揮免疫調節(jié)和抗腫瘤作用^［11,12］。本研究亦顯示，白藜蘆醇組與對照組比較，其胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)無顯著性差異（玃＞0.05），白藜蘆醇組與運動組對比，運動組胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)均小于白藜蘆醇組，具有顯著性差異（P<0.05），提示白藜蘆醇具有延緩疲勞小鼠胸腺、脾臟結構萎縮和功能退化及提高機體免疫機能等作用。

3．2白藜蘆醇對小鼠腹腔巨噬細胞吞噬率的影響┆巨噬細胞是由外周血單核細胞占血細胞總數(shù)的1%～3%，在血液中僅存留幾個小時至10個小時，然后穿過血管細胞移動至全身組織器官發(fā)育而成。巨噬細胞可吞噬、殺傷和消化微生物等抗原生物質，是機體非特異性免疫的重要組成部分，同時在特異免疫應答的各個階段也起重要作用。

本實驗通過測定白藜蘆醇對小鼠腹腔巨噬細胞吞噬率的影響，結果表明，白藜蘆醇對巨噬細胞功能具有免疫調節(jié)作用。白藜蘆醇能夠提高免疫受抑小鼠的細胞、體液免疫應答水平，調節(jié)細胞因子分泌，從多方面有效地增強免疫功能^［13,14］。由表1可知，白藜蘆醇組與運動組比較，腹腔巨噬細胞的吞噬能力明顯增高，差異顯著（玃<0.05），與白藜蘆醇對免疫模型運動小鼠的免疫功能有增強的作用，在非特異性免疫功能方面發(fā)揮免疫調節(jié)作用^［15］的報道相符合。提示，白藜蘆醇可以提高巨噬細胞的活力，增強其吞噬功能，從而增強其免疫能力。

3.3白藜蘆醇對抗氧化能力和運動耐力的影響研究證明，長時間運動后體內氧自由基產生增多，抗氧化能力減弱是導致運動性疲勞和影響恢復的原因之一。SOD是體內清除自由基的關鍵酶，檢測SOD活性高低，可間接反映機體清除自由基能力，MDA是自由基攻擊生物體的降解產物，MDA生成的多少可間接反映組織的損傷程度。Cenesiz S,et al^［16］研究發(fā)現(xiàn)，白藜蘆醇可明顯升高膽道阻塞大鼠抗氧化酶SOD, CAT和 GSH-PX活性。Wang GY,et al^［17］發(fā)現(xiàn)，白藜蘆醇可緩解阿霉素引起的心肌損傷，劑量依賴性地明顯升高SOD活性，下調MDA和NO 含量。本實驗結果表明：白黎蘆醇可提高運動小鼠血清SOD含量，降低MDA水平，因此能加快自由基的清除，具有較強的抗氧化能力，說明白黎蘆醇能夠抵抗由自由基及其代謝產物引起的脂質過氧化而導致的過氧化損傷。在觀察小鼠力竭性游泳運動能力的實驗中發(fā)現(xiàn)，白藜蘆醇組的力竭性游泳時間明顯長于運動組和對照組，說明白藜蘆醇能有效提高小鼠力竭性運動能力，并隨著時間的延長，抗疲勞作用會更明顯。

4總結

1) 白藜蘆醇有助于提高運動小鼠的脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)，提高腹腔巨噬細胞的吞噬能力。因此，白藜蘆醇對運動小鼠的免疫調節(jié)功能具有良好的影響。2) 白黎蘆醇可提高運動小鼠血清SOD含量，降低MDA水平，因此能加快自由基的清除，具有較強的抗氧化能力。3) 白藜蘆醇能明顯延長小鼠力竭性游泳時間，因而具有明顯的抗疲勞作用。

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