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    HPLC法測(cè)定印度蛇根木提取物中利血平含量

    2008-04-29 00:00:00蔣明廉
    上海醫(yī)藥 2008年5期

    摘 要 目的:建立HPLC法測(cè)定印度蛇根木提取物中利血平含量的方法。方法:采用Hypersil ODS C18色譜柱,流動(dòng)相為乙腈-50 mmol/L磷酸氫二鈉(用磷酸調(diào)pH值為3.0左右)(45∶55)(V/V),流速為0.7 mL/min,檢測(cè)波長(zhǎng)268 nm。結(jié)果:利血平對(duì)照品線性范圍8.0~50.0 μg,r=0.999 9,加樣回收率為97.58%,RSD為0.62%(n=5)。結(jié)論:本方法準(zhǔn)確、可靠,可以用作印度蛇根木提取物中利血平的定量分析方法。

    關(guān)鍵詞 高效液相色譜 印度蛇根木 利血平

    中圖分類號(hào):R97 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:B 文章編號(hào):1006-1533(2008)05-0222-02

    印度蛇根木來源于夾竹桃科植物蛇根木的根,利血平是其有效成分(Reserpine)。利血平主要作為降壓藥的原料,在臨床上已得到驗(yàn)證[1],并且被《中國(guó)藥典》收載[2]。利血平主要功能是降低血壓、減慢心率,對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)具有持久性的安定及抗抑郁作用[3],是目前臨床應(yīng)用較廣泛的一種抗高血壓藥。為了有效控制提取物的質(zhì)量,本研究建立了HPLC法測(cè)定印度蛇根木提取物中利血平的含量方法。

    1 儀器與試藥

    1.1 儀器

    HP1100系列高效液相色譜儀;SB2200型超聲波清洗器(上海必能信超聲有限公司);BP211D型電子天平(德國(guó)賽多利斯公司)。

    1.2 試劑

    提取物粉末:桂林萊茵生物制品有限公司提供;利血平對(duì)照品從中國(guó)藥品生物制品檢定所購(gòu)買;乙腈為色譜純,水為重蒸水,其它試劑均為分析純。

    2 方法與結(jié)果

    2.1 色譜條件

    色譜柱為Hypersil ODS C18 (250mm×40mm,5μm),流動(dòng)相:乙腈-50 mmol/L磷酸氫二鈉溶液(用磷酸調(diào)pH值至3.0)(45∶55)(V/V);流速:0.7 mL/min;柱溫:25 ℃;檢測(cè)波長(zhǎng):268 nm;進(jìn)樣量:5 μL。

    2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

    精密稱取利血平對(duì)照品4 mg,用0.1 mol/L磷酸水溶液溶解,定容至50 mL,取1.0、2.0、4.0、8.0 mL分別置于10 mL容量瓶中,用磷酸水溶液定容至刻度,分別精密吸取

    5 μL,注入液相色譜儀中,以峰面積積分值為縱坐標(biāo),以利血平濃度為橫坐標(biāo)作標(biāo)準(zhǔn)曲線。其回歸方程如下:Y=265.430 5X-99.490 5 , r=0.999 9,利血平在8.0~50.0 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。利血平對(duì)照品在所采用的色譜條件下,無雜峰干擾,峰形良好。

    2.3 供試品溶液的制備

    精密稱取印度蛇根木提取物粉末適量(相當(dāng)于利血平5 mg),置于50 mL容量瓶中,加0.1 mol/L磷酸水溶液,于超聲波水浴中超聲15 min,取出,放冷至室溫,定容至刻度,搖勻,用0.45 μm濾膜過濾,即為供試品溶液。取5 μL注入高效液相色譜儀。利血平樣品峰形對(duì)稱,無干擾。

    2.4 精密度試驗(yàn)

    精密吸取上述對(duì)照品溶液,重復(fù)進(jìn)樣5次。RSD為1.22%,表明方法具有良好的精密度。

    2.5 重現(xiàn)性試驗(yàn)

    取同一批印度蛇根木提取物樣品分別稱取5份,依法測(cè)定利血平的含量,RSD為1.17%,表明方法具有良好的重現(xiàn)性。

    2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

    將樣品溶液在24 h內(nèi)每隔2~3 h測(cè)定1次,其RSD為0.97%,表明樣品溶液中利血平在24 h內(nèi)測(cè)定保持穩(wěn)定。

    2.7 加樣回收試驗(yàn)

    采用加樣回收法,取已知含量的印度蛇根木提取物適量分別添加利血平對(duì)照品,按“供試品溶液制備”項(xiàng)下的方法操作,測(cè)得回收率為97.58%,RSD為0.62%(n=5)。

    2.8樣品測(cè)定

    取不同批號(hào)的印度蛇根木提取物粉末,按2.3項(xiàng)下方法進(jìn)行含量測(cè)定,結(jié)果見表1。

    3 討論

    關(guān)于HPLC法測(cè)定印度蛇根木提取物中利血平含量的報(bào)道作者尚未見過。本研究采用乙腈-50 mmol/L磷酸氫二鈉溶液(用磷酸調(diào)pH值至3.0)(45∶55)(V/V)為流動(dòng)相,利血平能與其它組分達(dá)到基線分離。

    在提取利血平時(shí),作者對(duì)比了0.1 mol/L磷酸水、水、甲醇、乙醇等溶劑,結(jié)果采用0.1 mol/L磷酸水提取溶媒,其它色譜條件同前,測(cè)得利血平含量最高,雜峰較少。

    另外,本研究考察了不同超聲提取時(shí)間(15、30、45 min)所得利血平含量,結(jié)果基本一致,故選用超聲提取15 min的方法。

    本方法準(zhǔn)確、可靠、可以用作印度蛇根木提取物中利血平的定量分析方法。

    參考文獻(xiàn)

    1 張?zhí)m.高血壓危象救治中利血平的應(yīng)用問題[J].云南醫(yī)藥,1994,15(3)168-170.

    2 國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典(2000年版二部).304.

    3 金光亮,周東豐.慢性利血平抑郁模型大鼠腦內(nèi)游離鈣離子、鈣調(diào)素和環(huán)核苷酸含量的變化[J].中華精神科學(xué),1997,30(2):67-69.

    (收稿日期:2008-01-31)

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