紫外分光光度法檢測注射用碟脈酮總黃酮方法的建立

摘要：目的：建立一種準(zhǔn)確快捷檢測注射用注射用碟脈酮總黃酮含量的方法。方法：以蘆丁為標(biāo)準(zhǔn)品，采用紫外分光光度法在波長510nm處測定注射用碟脈酮的總黃酮。結(jié)果：蘆丁在0.2082mg~1.2494mg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，總黃酮平均回收率為99.16%，RSD為1.23%。注射用碟脈酮總黃酮含量總黃酮含量均不低于80%。結(jié)論：該方法穩(wěn)定、準(zhǔn)確，是一種理想的注射用碟脈酮總黃酮含量測定方法。

關(guān)鍵詞：紫外分光光度法；注射用碟脈酮；總黃酮

本品為菊科苦荬菜屬植物抱莖苦荬菜（Ixeris sonchifolia (Bunge. ) Hance）的全草經(jīng)加工制得的提取物。具有活血止痛，清熱祛瘀。用于瘀血閉阻的胸痹，證見：胸悶，心痛，口苦，舌暗紅或存瘀斑等。適用于冠心病，心絞痛見上述病狀者。亦可用于腦梗塞者。

注射用碟脈酮的主要成分為黃酮類成分，所以建立總黃酮的含量測定方法，旨在為注射用碟脈酮總黃酮的定量提供檢測方法。

1材料與方法

1.1材料與儀器

蘆丁對照品中國藥品生物制品檢定所提供批號：0080－9705；

注射用碟脈酮哈藥集團(tuán)在藥二廠研發(fā)中心提供（批號：021201、021202、021203）

硝酸鋁，亞硝酸鈉，氫氧化鈉均為市售

METTLER AE240電子天平

TU-1901型 紫外可見分光光度計(jì)（北京普析通用儀器有限責(zé)任公司）

Lambda 3B 紫外-可見分光光度計(jì)（美國PERKINELMER公司）

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制精密稱取在120℃ 干燥至恒重的蘆丁對照品25mg，置50ml量瓶中，加乙醇適量，超聲處理使溶解，放冷，用乙醇稀釋至刻度，搖勻。精密量取20ml，置50ml量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，備用（每1ml含無水蘆丁 0.20mg）。

1.2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立

最大吸收波長的確定：

用紫外分光光度計(jì)在300~600nm下掃描，供試品及對照品均在510nm處有最大吸收波長，這與文獻(xiàn)[1][2]報(bào)道一致，所以確定510nm為最大吸收波長。

標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密量取對照品溶液1ml、2ml、3ml、4ml、5ml、6ml，分別置25ml量瓶中，各加水至6ml，加5％亞硝酸鈉溶液1ml，搖勻，放置6分鐘，加10％硝酸鋁溶液1ml，搖勻，放置6分鐘，加氫氧化鈉試液10ml，再加水至刻度，搖勻，放置15分鐘，以相應(yīng)的溶液為空白，立即照分光光度法（中國藥典2005年版一部附錄Ⅴ A ）[3]，在510nm的波長處測定吸收度，以吸收度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.2.3供試品測定

供試品溶液提取制備方法

由于本品能溶水及稀醇，取本品直接用水溶解即得。

供試品溶液測定方法

取本品粉末約30mg （同時(shí)另取本品測定水分）（中國藥典2005年版一部附錄Ⅳ H 第一法），精密稱定，加水溶解，轉(zhuǎn)移至100ml量瓶中，加水至刻度，搖勻，作為供試品溶液。精密量取3ml，照標(biāo)準(zhǔn)曲線制備項(xiàng)下的方法，自\"置 25ml 量瓶中，加水至 6ml ……\"起依法測定吸收度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中蘆丁的重量，計(jì)算，即得。

2結(jié)果與分析

2.1 最佳檢測波長的選擇及標(biāo)準(zhǔn)曲線線性關(guān)系考察

紫外掃描結(jié)果表明 蘆丁在510nm處的吸收值最大，即510nm為蘆丁的特征吸收峰值，故檢測波長確定為510nm。經(jīng)線性回歸表明，蘆丁在.2082mg~1.2494mg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。回歸方程為：Y=11.3277X―0.0081，相關(guān)系數(shù)為：r=0.9999。

2.2穩(wěn)定性試驗(yàn)：

取本品粉末約30mg，精密稱定，照供試品溶液制備方法制備供試品溶液。精密吸取供試品溶液3ml，依法處理后，測定，之后每隔10min測定一次。計(jì)算相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.42%，表明供試品溶液顯色后，在1小時(shí)內(nèi)吸收度略有下降，但RSD為0.42%，所以穩(wěn)定性良好。

2.3 精密度試驗(yàn)：

取本品粉末約30mg，精密稱定，照供試品溶液制備方法制備供試品溶液。精密吸取供試品溶液3ml，依法進(jìn)行測定6次。其相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.66%，表明該方法精密度良好。

2.4 重復(fù)性試驗(yàn)：

取同一批注射用碟脈酮粉末，精密稱定6份，每份與約30mg，照成品供試品溶液制備方法制備6份供試品溶液。分別精密吸取6份供試品溶液3ml，依法測定。計(jì)算平均含量為86.17%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.12%，由此可見，該方法重復(fù)性較好。

2.5 回收率試驗(yàn)：

取已知含量的碟脈酮粉末（含量為86.17%，水分2.03%），精密稱定6份，每份約15mg，分別置于100ml容量瓶中，同時(shí)各精密吸取自制的濃度為16.15mg/ml的總黃酮苷對照品溶液(已用蘆丁標(biāo)定)1.5ml，分別加入上述6個(gè)容量瓶中，照供試品溶液制備方法制備6個(gè)供試品溶液。依法進(jìn)行測定。測定結(jié)果見表1。

由此可見，該方法加樣回收率較好。

2.6樣品測定：

取三批注射用碟脈酮粉末，分別進(jìn)行測定。結(jié)果見表2。

通過3批注射用碟脈酮的含量測定，結(jié)果表明的總黃酮含量均不低于80%，因此規(guī)定注射用碟脈酮的總黃酮含量不得低于80%。

3小結(jié)

本實(shí)驗(yàn)以蘆丁為標(biāo)準(zhǔn)品，作了系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明：注射用碟脈酮的總黃酮含量不得低于80%，回歸方程為：Y=11.3277X―0.0081，相關(guān)系數(shù)為：r=0.9999。達(dá)到了穩(wěn)定、準(zhǔn)確測量注射用碟脈酮的總黃酮含量的要求，是一種理想的含量測定方法。

參考文獻(xiàn)

[1]張雪，紫外分光光度法檢測山楂總黃酮方法的建立 ，食品工業(yè)科技 ，2007年第07期。

[2]曹根生，脈安沖劑總黃酮的含量測定方法的初步研究[J]，中成藥研究，1981，6（12）

[3]中國藥典，2005年版一部，附錄Ⅴ A