人臍帶血間充質(zhì)干細(xì)胞研究近況及其在脂肪組織工程中的應(yīng)用

肖宏濤 綜述，劉 毅 審校

人臍帶血間充質(zhì)干細(xì)胞(HUCBMSCs)是一種具有全能干細(xì)胞特點(diǎn)的細(xì)胞，是中胚層發(fā)育的早期細(xì)胞，其形態(tài)和生物學(xué)特點(diǎn)與骨髓源性間充質(zhì)干細(xì)胞相似，具有多向分化潛能，可分化為成骨細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞等[1]。與骨髓相比，臍帶血有更充足的來源，對供者無任何不良影響，其間充質(zhì)干細(xì)胞更為原始，分化能力更強(qiáng)。因此臍帶血間充質(zhì)干細(xì)胞有可能替代骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成為組織工程的重要種子細(xì)胞。臍帶血間充質(zhì)干細(xì)胞現(xiàn)已成為繼骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞、脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞后又一受眾多學(xué)者關(guān)注的熱點(diǎn)，本文就臍帶血間充質(zhì)干細(xì)胞的研究近況及其在脂肪組織工程中的應(yīng)用做一綜述。

1臍帶血間充質(zhì)干細(xì)胞的發(fā)現(xiàn)及其生物學(xué)特征

1.1 臍帶血間充質(zhì)干細(xì)胞的發(fā)現(xiàn)：在臍帶血中是否存在間充質(zhì)干細(xì)胞（mesenchymal stem cells，MSCs），研究初期有許多爭議。Erices等[2]于2000年首次報道了從臍帶血中分離培養(yǎng)出間充質(zhì)樣細(xì)胞，但在培養(yǎng)的29份標(biāo)本中只有7份表現(xiàn)為間充質(zhì)樣細(xì)胞(Mesenehymal-like cells，MLC)，其免疫表型和功能特點(diǎn)與骨髓來源的MSCs極為類似，其余22份培養(yǎng)出的均為破骨樣細(xì)胞，同時發(fā)現(xiàn)早產(chǎn)兒臍血中間充質(zhì)干細(xì)胞的含量要較足月兒豐富。

Mareschi等[3]與上述意見不同，他們檢測了35份骨髓和58份足月產(chǎn)臍血標(biāo)本，以Percoll密度梯度離心分離單個核細(xì)胞，臍血的貼壁細(xì)胞很快衰退，表達(dá)CD45、CD14、CD31等造血及內(nèi)皮細(xì)胞的標(biāo)志，他們還檢測了通常由MSCs分泌的兩種細(xì)胞因子IL-6、IL-11和通常由單核-巨噬細(xì)胞分泌的TNFα、TGFβ的mRNA表達(dá)，結(jié)果顯示臍血的貼壁細(xì)胞表達(dá)IL-6、TNFα和TGFβ，不表達(dá)IL-11，進(jìn)一步證明臍血中缺乏MSCs，由此他們得出結(jié)論臍血中貼壁的單個核細(xì)胞表現(xiàn)出造血細(xì)胞的形態(tài)特點(diǎn)而不是MSCs。Yu等[4]培養(yǎng)了中期妊娠(16～28周)的胎兒血和足月分娩的臍帶血，前者可以得到MSCs，而后者只得到異質(zhì)性的貼壁細(xì)胞，表達(dá)CD45，表明屬于造血細(xì)胞。Karen Bieback等[5]則通過實(shí)驗(yàn)證明了足月妊娠產(chǎn)婦臍帶血中MSCs的存在，而且探究了MSCs的分離與臍血采集量、保存時間、單個核細(xì)胞數(shù)以及是否發(fā)生凝血和溶血有關(guān)。Lee等[6]應(yīng)用梯度離心法從臍帶血中分離到間充質(zhì)干細(xì)(MSCs)，并對其性質(zhì)進(jìn)行了初步鑒定，再次證實(shí)臍帶血中存在MSCs。

隨著研究臍帶血間充質(zhì)干細(xì)胞的學(xué)者越來越多，學(xué)者們的結(jié)論也逐漸趨于一致，臍帶血中的確存在MSCs，但臍帶血間充質(zhì)干細(xì)胞所占的比例遠(yuǎn)較骨髓低得多(0.05～2.8/1.0×10⁶臍帶血單個核細(xì)胞，2～5／1.0×10⁶骨髓單個核細(xì)胞)，臍帶血MSCs連續(xù)傳代培養(yǎng)和冷凍保存后仍具有多向分化潛能，而且保持正常的核型和端粒酶活性。細(xì)胞周期研究表明，85％以上的MSCs處于G0/G1期，用流式細(xì)胞儀分析MSCs的RNA和DNA含量發(fā)現(xiàn)，臍帶血MSCs有5％處于G0 期，而骨髓MSC有20％處于G0期。

1.2 臍帶血間充質(zhì)干細(xì)胞的生物學(xué)特性：近年來，對臍帶血MSCs的研究已取得了重大進(jìn)展，對其生物學(xué)特性也有了更深入的認(rèn)識。一般認(rèn)為在體外培養(yǎng)的臍帶血MSCs的形態(tài)與骨髓MSCs相似，呈長梭形或紡錘形，只是體積稍小一些。有人還把臍帶血來源的MSCs和骨髓來源的MSCs作了基因表達(dá)方面的對比，結(jié)論是：兩者的基因表達(dá)除了因來源不同而導(dǎo)致的差別外，基本上是一致的[7]。臍帶血MSCs另一個重要的生物學(xué)特性是其具有很強(qiáng)的增殖能力，Gang 等[8]將來源于人的新鮮臍血單個核細(xì)胞分離培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)傳至第二代時即可見大量均一的成纖維狀貼壁細(xì)胞（即MSCs），大約86％的細(xì)胞處于G0/G1期。另據(jù)有關(guān)學(xué)者[9]統(tǒng)計6.6×10⁵個臍帶血原代MSCs在體外擴(kuò)增10代后可獲得9.9×10⁸個細(xì)胞，擴(kuò)增約1 500倍。這都充分表明了這些臍帶血MSCs細(xì)胞確實(shí)具有很強(qiáng)的增殖潛能。

目前已有眾多學(xué)者對臍帶血MSCs表面抗原特性作了研究，證實(shí)臍帶血MSCs均穩(wěn)定地表達(dá)與MSCs相關(guān)聯(lián)的CD13、CD29 、CD44 、CD90 、CD105 (SH2)及CD73 (SH3 、SH4)抗原（SH2、SH3和SH4為MSCs相關(guān)性抗原），但不表達(dá)與造血及內(nèi)皮細(xì)胞有關(guān)的CD14、CD34、CD45、CD31表面抗原[6，10-13]，這與骨髓來源的MSCs表面抗原完全一致[9，14]。臍帶血MSCs所具有的多向分化潛能也是其重要的生物學(xué)特性之一。Lee等[15]用RT-PCR技術(shù)分析臍帶血間充質(zhì)干細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)其表達(dá)多向分化基因：SDF21，NeuroD，血管內(nèi)皮生長因子受體(VEGF2R1)等。同時許多試驗(yàn)[1，6，8]也驗(yàn)證了臍帶血MSCs在不同的誘導(dǎo)條件下具有向成骨細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞、骨骼肌細(xì)胞等分化的能力。

2人臍帶血的采集方法及臍帶血MSCs的分離、培養(yǎng)、純化及擴(kuò)增

2.1人臍帶血的采集方法：臍帶血的采集方法目前常用的是臍靜脈穿刺法，選擇無各種產(chǎn)科并發(fā)癥的健康足月產(chǎn)婦，胎兒娩出后，在距胎兒5～7cm的臍帶處進(jìn)行雙結(jié)扎，剪斷臍帶，消毒母側(cè)臍帶斷端，用已消毒的注射器或負(fù)壓采血袋（已用肝素抗凝，20U/ml）穿刺臍靜脈抽取50ml左右臍帶血液，4℃冰箱保存，不需要特殊處理，并于12h內(nèi)進(jìn)行分離。采集過程中必須嚴(yán)格無菌操作，避免按壓子宮或擠壓胎盤、臍帶，并且注意將抗凝液充分混勻[16]。取血時間也要控制在胎兒娩出后5min之內(nèi)。

2.2 臍帶血間充質(zhì)干細(xì)胞的分離：在分離臍帶血MSCs方面目前尚無統(tǒng)一的方法，根據(jù)不同的實(shí)驗(yàn)條件可選用不同的方法。①密度梯度離心法：鑒于MSCs與其他細(xì)胞密度的差異，采用Pereoll或者Ficoll分離液來實(shí)現(xiàn)細(xì)胞間的分離。其中使用Pereol1分離液獲得的MSCs大小均勻，純度較應(yīng)用Ficol1分離液獲得的細(xì)胞純度高，此方法簡單有效，成本低廉；②貼壁篩選法：依據(jù)MSCs易貼附在塑料培養(yǎng)物上生長的特性將其與非貼壁細(xì)胞分離；③流式細(xì)胞儀分離法：根據(jù)間充質(zhì)干細(xì)胞大小不同或細(xì)胞表面的一些特殊標(biāo)志，采用流式細(xì)胞儀對其進(jìn)行分選，該方法可獲得較為純化的間充質(zhì)干細(xì)胞，但是分離過程對細(xì)胞活性影響較大，且實(shí)驗(yàn)條件要求較高，所需的標(biāo)本量大，因此沒有廣泛的使用；④免疫磁珠分離法：原理是使用表面覆有特異性抗體的磁珠與間充質(zhì)干細(xì)胞結(jié)合，再利用永久磁鐵將間充質(zhì)干細(xì)胞吸引分離出來。免疫磁珠分離法可以分離出純度較高的細(xì)胞，但價格昂貴，難以推廣；⑤單細(xì)胞克隆的方法[17]分離MSCs，實(shí)驗(yàn)條件要求高，所需標(biāo)本量較大，不便于獲得大量MSCs。此外，遲作華等[18]還采用了羥乙基淀粉沉淀法分離MSCs，此法優(yōu)點(diǎn)是能減少體外處理步驟，減少處理過程中對細(xì)胞的損傷等，當(dāng)前應(yīng)用該方法的人還不多。目前最常用的方法是密度梯度離心法和貼壁篩選法聯(lián)合應(yīng)用[1]：先用密度梯度離心法從臍帶血中分離出單個核細(xì)胞，再依據(jù)MSCs易貼附在塑料培養(yǎng)物上生長的特性，用貼壁篩選法將其從造血系統(tǒng)細(xì)胞中分離出來，從而獲得純度較高的MSCs。此法操作相對簡單，可以避免僅使用密度梯度離心法分離出的細(xì)胞成分復(fù)雜的缺點(diǎn)，同時又可避免單用貼壁篩選法時標(biāo)本中大量的紅細(xì)胞占據(jù)MSCs所需貼壁空間的不足，是一種很實(shí)用的方法。

2.3 臍帶血間充質(zhì)干細(xì)胞的培養(yǎng)、純化及擴(kuò)增：應(yīng)用間充質(zhì)干細(xì)胞專用培養(yǎng)基（MesencultTM）或DMEM培養(yǎng)基（調(diào)PH至偏酸性），加10%～20%的胎牛血清（FBS），置于37℃、5%CO₂孵箱內(nèi)培養(yǎng)，在接種4～7天后出現(xiàn)貼壁的間充質(zhì)樣細(xì)胞，開始為圓形或不規(guī)則形，逐漸伸出突起，最初散在分布，與大量的破骨樣細(xì)胞混雜存在。破骨樣細(xì)胞胞體較大，呈圓形，內(nèi)含多個核。MSCs多為成纖維樣的長梭形細(xì)胞，少部分呈多角形，單個核，有較長的突起，折光性強(qiáng)。隨著在條件培養(yǎng)基的環(huán)境下培養(yǎng)，破骨樣細(xì)胞逐漸減少，兩周后MSCs在局部形成包含有幾十個到幾百個細(xì)胞的克隆，由于細(xì)胞的迅速增殖，3周后細(xì)胞生長可達(dá)80%～90%融合，每個克隆約包含幾百至幾千個細(xì)胞，此時的MSCs呈較均一的長梭形。一般傳代至第3代時即可獲得純度較高且形態(tài)均一的長梭形間充質(zhì)干細(xì)胞。除上述常用的培養(yǎng)基外，還有含20%胎牛血清（FBS）+堿性成纖維生長因子(bFGF)+L-谷氨酰胺的IMDM培養(yǎng)基[6]及培養(yǎng)臍帶血MSCs的無血清培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基的最大優(yōu)點(diǎn)是可避免含血清培養(yǎng)的細(xì)胞可能存在動物攜帶的已知或未知病原體傳染人類的隱患[19]。

由于到目前為止還沒有十分完善的培養(yǎng)擴(kuò)增臍帶血MSCs的方案，于是許多學(xué)者便紛紛著手于培養(yǎng)條件優(yōu)化方面的研究。Shetty等[20]將含人臍帶血血清的DMEM/F12培養(yǎng)基與含胎牛血清的DMEM/F12培養(yǎng)基進(jìn)行了對比，證實(shí)不同來源的MSCs在含人臍帶血血清的DMEM/F12培養(yǎng)基中培養(yǎng)有更大的增殖能力，在培養(yǎng)MSCs方面更高效。劉素芳[21]采用四種不同的培養(yǎng)基作了對照，分別是低糖DMEM (Dulbecco改良的Eagle培養(yǎng)基)組、高糖DMEM組、低糖DMEM+干細(xì)胞因子組、MesencultTM培養(yǎng)基（一種特殊成分的液體培養(yǎng)基，與其添加物配合使用可促進(jìn)間充質(zhì)干細(xì)胞分化為脂肪細(xì)胞）組，結(jié)果發(fā)現(xiàn)低糖DMEM +干細(xì)胞因子組和MesencultTM培養(yǎng)基組細(xì)胞生長旺盛，提示這兩種方法較好。但是由于干細(xì)胞因子用量較大，價格較貴，所以低糖DMEM +干細(xì)胞因子聯(lián)合應(yīng)用干細(xì)胞因子的方法并不十分適用。MesencultTM培養(yǎng)基為酸性培養(yǎng)基，能促進(jìn)臍帶血MSCs增殖，保持其未分化狀態(tài)，其酸性環(huán)境也有助于消除造血干細(xì)胞和破骨樣細(xì)胞[22]，因此，MesencultTM培養(yǎng)基是一種適合臍帶血間充質(zhì)細(xì)胞生長的培養(yǎng)基。

總之，不同的培養(yǎng)基、不同批次的血清、不同的PH值、不同的種植密度都可能影響MSCs的生長。與骨髓MSC相比，目前臍血來源的MSCs仍存在數(shù)量少、頻度低等問題。據(jù)統(tǒng)計[9]約1/4的臍血樣單個核細(xì)胞培養(yǎng)后出現(xiàn)MSCs，3/4的臍血樣單個核細(xì)胞培養(yǎng)后出現(xiàn)破骨樣細(xì)胞，因此，在體外培養(yǎng)過程中，如何消除破骨樣細(xì)胞的存在，如何更好地對其進(jìn)行純化擴(kuò)增，以獲得穩(wěn)定、均一的MSCs仍是今后需努力探索的方向。

3臍帶血間充質(zhì)干細(xì)胞的識別

由于尚無特異性標(biāo)記物，目前臍帶血MSCs的識別方法都是通過形態(tài)學(xué)及在培養(yǎng)過程中出現(xiàn)的分子表型，如：表達(dá)CD13、CD29、CD44、CD90、CD105、CD73，而不表達(dá)與造血及內(nèi)皮細(xì)胞有關(guān)的表面抗原CD14、CD34、CD45、CD31，然后逆推得知是否為MSCs，還有體外培養(yǎng)時，給予不同的誘導(dǎo)條件，分離細(xì)胞出現(xiàn)分化表型，可分化為成骨細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞等，從而逆推其為MSCs[1]。還沒有直接的方法可鑒定得到的臍帶血MSCs。

4臍帶血MSCs成脂分化及調(diào)控脂肪細(xì)胞分化的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑（通路）

4.1 臍帶血MSCs成脂分化：脂肪細(xì)胞系是由起源于中胚層的多能干細(xì)胞逐步分化、發(fā)育而成，其過程大致為：多能干細(xì)胞（Multipotential stem cell）-脂肪母細(xì)胞(Adipoblast)-前脂肪細(xì)胞(Preadipocyte)-不成熟脂肪細(xì)胞(Immature adipose cel1)-成熟脂肪細(xì)胞(Adipocyte)[23]。臍帶血MSCs向脂肪細(xì)胞分化同樣要經(jīng)歷這一過程。目前在體外誘導(dǎo)臍帶血MSCs成脂分化的方案基本統(tǒng)一：先將體外擴(kuò)增培養(yǎng)的臍帶血MSCs置于孔板或培養(yǎng)皿中，當(dāng)細(xì)胞貼壁生長達(dá)到80%融合時，加入脂肪誘導(dǎo)劑（地塞米松1μmol/L、10mg/mL胰島素、0.5 mmol/L1-甲基-3-異丁基-黃嘌呤、100μmol/L吲哚美辛）后，置于37℃、5%CO₂孵箱內(nèi)培養(yǎng)。一般誘導(dǎo)7天后，胞質(zhì)內(nèi)開始出現(xiàn)小脂滴，14天后胞質(zhì)內(nèi)形成高折光性脂滴脂肪細(xì)胞，誘導(dǎo)培養(yǎng)21天，脂滴逐漸增大可充滿整個細(xì)胞，油紅O染色示胞核成藍(lán)色，脂滴呈桔紅色，脂肪細(xì)胞平均占（88.0±4.6）%[9]。臍帶血MSCs在向脂肪細(xì)胞誘導(dǎo)分化的這一過程中，首先是MSCs在體外實(shí)驗(yàn)性誘導(dǎo)劑（如上述誘導(dǎo)劑）、生物活性因子、寒冷、激素等因素刺激下逐漸分化為單能干細(xì)胞，即脂肪母細(xì)胞，它保持著干細(xì)胞增殖活躍的特性，然后再進(jìn)一步分化為前脂肪細(xì)胞，前脂肪細(xì)胞在經(jīng)歷細(xì)胞融合、接觸抑制和克隆擴(kuò)增等步驟后繼續(xù)啟動向成熟脂肪細(xì)胞分化的過程，并在胰島素、地塞米松、l-甲基-3-異丁基黃嘌呤等誘導(dǎo)劑協(xié)同作用下最終分化為成熟的脂肪細(xì)胞。

4.2調(diào)控脂肪細(xì)胞分化的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑（通路）：多細(xì)胞生物的大多數(shù)細(xì)胞不與外界直接接觸，對外界的刺激需要細(xì)胞間復(fù)雜的信號傳遞系統(tǒng)來傳遞，細(xì)胞信號傳導(dǎo)途徑（通路）是信號傳遞系統(tǒng)重要組成部分。信號傳遞系統(tǒng)通過信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑（通路）對細(xì)胞進(jìn)行著多方面的調(diào)控，其中包括對細(xì)胞分化的調(diào)控：使基因有選擇地表達(dá)，使細(xì)胞不可逆地分化為特定功能的成熟細(xì)胞。

脂肪細(xì)胞的分化主要是通過四條信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑（通路）來調(diào)控： ①胰島素樣生長因-1 (IGF-1)激活的酪氨酸激酶途徑；②糖皮質(zhì)激素/前列環(huán)素(PGI2)途徑；③cAMP-蛋白激酶A(PKA)途徑；④脂肪酸激活受體(FAAR)途徑。由于各種細(xì)胞系所處的發(fā)育階段不同， 故轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的激活方式也有所不同[24]。研究表明， 前脂肪細(xì)胞有眾多的IGF受體(IGF-1R)，但胰島素受體很少。生長激素和高濃度的胰島素通過IGF-1R誘導(dǎo)前脂肪細(xì)胞分化，此作用能被生理濃度的IGF-1所代替，IGF-1誘導(dǎo)脂肪細(xì)胞分化的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑可能主要通過:IGF-1R→胰島素受體底物1(IRS-1)磷酸化→SHc接頭蛋白→生長因子結(jié)合蛋白(Grb2)→鳥苷二磷酸釋放因子(SOS)→Ras 蛋白→Raf-1蛋白激酶→脂肪細(xì)胞特異基因的轉(zhuǎn)錄[25]。除上述的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑（通路）外，促分裂原活化的蛋白激酶(MAPK)通路也是調(diào)控脂肪細(xì)胞分化的一條重要信號傳導(dǎo)通路，它對脂肪細(xì)胞分化的調(diào)控復(fù)雜多樣，且貫穿整個分化過程[26]。

5臍帶血MSCs在脂肪組織工程中的應(yīng)用前景

組織工程是工程學(xué)和生物科學(xué)相結(jié)合的新興學(xué)科，主要研究組織和器官的組織相容性替代物來維持和改善組織及器官的形態(tài)和功能，它在整形外科有廣泛的應(yīng)用前景。其基本原理是將體外擴(kuò)增具有特定生物學(xué)功能的種子細(xì)胞與可降解生物材料結(jié)合形成細(xì)胞-材料復(fù)合物，體外培養(yǎng)一定時間后植入體內(nèi)，種子細(xì)胞在體內(nèi)或體外不斷增殖并分泌細(xì)胞外基質(zhì)，生物材料被逐漸降解吸收，最終形成所需要的具有一定形態(tài)和功能的組織或器官，以修復(fù)病損和重建功能。其主要由種子細(xì)胞、生物材料、組織構(gòu)建及臨床應(yīng)用四個研究方面構(gòu)成。

組織工程的種子細(xì)胞來源有多種，包括胚胎干細(xì)胞、自體細(xì)胞、成體干細(xì)胞等。尋求具有容易獲得、容易體外培養(yǎng)增殖、長期傳代不改變生物學(xué)特征、抗原性小、組織修復(fù)能力強(qiáng)等特性的理想的種子細(xì)胞是組織工程研究的核心問題之一，臍帶血MSCs具備上述條件，原因?yàn)椋撼审w干細(xì)胞中的臍帶血MSCs不涉及自體細(xì)胞疾病狀態(tài)下或老年患者的細(xì)胞往往增殖能力下降及胚胎干細(xì)胞的倫理學(xué)問題，同時還有強(qiáng)大的自我更新能力及多向分化潛能。且臍帶血MSCs與骨髓MSCs相比還有以下優(yōu)勢：干/祖細(xì)胞較骨髓中更原始，增殖分化能力更強(qiáng)；淋巴細(xì)胞的免疫功能不夠成熟，移植物抗宿主病(GVHD)發(fā)生率較低；不會有腫瘤細(xì)胞等[14]。此外，和骨髓相比，臍帶血還有來源豐富，采集簡便等優(yōu)點(diǎn)。因此，臍帶血MSCs現(xiàn)已成為備受中外學(xué)者重視的種子細(xì)胞。

自體脂肪移植已有上百年的歷史，因其來源豐富，取材容易，操作簡單，填充后外形好，無排斥反應(yīng)等優(yōu)點(diǎn)，備受整形美容外科的重視，但由于移植后脂肪細(xì)胞的成活率較低而達(dá)不到理想的療效，脂肪組織工程的應(yīng)用有望擺脫這一困境。臍帶血MSCs通過成脂誘導(dǎo)可分化為前脂肪細(xì)胞，且目前已有前脂肪細(xì)胞接種在PLGA支架、蠶絲支架[27]、HYAFF11（透明質(zhì)酸衍生酯）海綿支架[28]、膠原海綿、降解性毛氈、水凝膠、氟羥甲睪酮單絲膨化的聚四氟乙烯復(fù)合材料的報道，這些支架為前脂肪細(xì)胞在立體環(huán)境中培養(yǎng)保證其正常的形態(tài)和功能提供了條件。前脂肪細(xì)胞可與具有良好生物相容性和可降解性的三維支架體外復(fù)合培養(yǎng)，在恰當(dāng)?shù)臅r機(jī)將這種組織化細(xì)胞-支架復(fù)合物移植到軟組織缺損部位，隨著支架的降解和前脂肪細(xì)胞的不斷分化，這種組織化細(xì)胞-支架復(fù)合物將成為新的具有功能的活體脂肪組織。這種策略形成的脂肪可作為軟組織缺損部位的填充材料，有望對小乳癥、顏面萎縮、凹陷畸形等整形美容外科常見疾病提供滿意的治療。

臍帶血MSCs為組織工程研究提供了良好的種子細(xì)胞，通過深入研究它的分化機(jī)制、建立體外三維立體培養(yǎng)條件及開發(fā)體內(nèi)應(yīng)用的新型生物材料，相信在不久的將來一定能構(gòu)建出適合于臨床的組織工程脂肪。隨著研究不斷深入，臍帶血MSCs在脂肪組織工程中的應(yīng)用必將產(chǎn)生巨大的經(jīng)濟(jì)及社會效益。

[參考文獻(xiàn)]

[1]Kang XQ，Zang WJ，Bao LJ，et al.Differentiating characterization of human umbilical cord blood-derived mesenchymal stem cells in vitro[J].Cell Biol Inter，2006，30：569-575.

[2]Rices A，Conget P，Minguell JJ.Mesenchymal progenitor or cells in human umbilical cord blood[J].Br J Haematol，2000，109(1)：235-242.

[3]Mareschi K，Biasin E，Piacibellow W，et a1.Isolation of human mesenchymal stem cells;Bone marrow versus umbilical cord blood[J].Haematologiea，2001，86:1099-1100.

[4]Yu MJ，Xiao ZF，Shen L，et a1.Mid-trimester fetal blood-derived adherent cells share characteristics similar to mesencymal stem cells but ful1-term umbilical cord blood does not[J].Br J Haemato1，2004，124:666-675.

[5] Karen Bieback， Susanne Kern， Harald Klter， et a1. Critical parameters for the isolation of mesenchymal stem cells from umbilical cord blood[J].Stem Cells，2004，22(4):625-634.

[6]Lee OK， Kuo TK， Chen WM， et al. Isolation of multipotentmesenchymal stem cells from umbilical cord blood [J].Blood，2004，103(5):1669-1675.

[7]Rodrigo A，Panepucci，Jorge LC，et al.Comparison of gene expression of umbilical cord vein and bone marrow-derived mesenchymal stem cells[J].Stem Cells，2004，22:1263-1278.

[8]Gang EJ，Hong SH，Jeong JA，et a1.In vitro mesengenic potential of human umbilical cord blood-derived mesenchymal stem cell[J].Biochemical and Biophysical Research Communications， 2004，321(1):102-108.

[9]裴雪濤.干細(xì)胞實(shí)驗(yàn)指南[M].北京：科技出版社，2006：86-95.

[10]Lu FZ，F(xiàn)ujino M，Kitazawa Y，et a1.Characterization and gene transfer in mesenchymal stem cells derived from human umbilical-cord blood[J].J Lab Clin Med， 2005，146(5):271-278.

[11]Chang YJ，Shih DT，Tseng CP，et a1.Disparate Mesenchyme-Lineage Tendencies in Mesenchymal Stem Cells from Human Bone Marrow and Umbilical Cord Blood[J].Stem Cells，2006，24（3）：679-685.

[12]Chang YJ，Tseng CP，Hsu LF，et a1.Characterization of two populations of mesenchymal progenitor cells in umbilical cord blood[J] Cell Biology International，2006，30（6）：495-499.

[13]Kim SJ，Lee WI，Heo H，et al.Stable gene expression by self-complementary adeno-associated viruses in human MSCs[J].Biochemical and Biophysical Research Communications，2007，360(3): 573-579.

[14]]Wagner W，Wein F，Seckinger A，et a1.Comparative characteristics of mesenchymal stem cells from human bone marrow，adipose tissue，and umbilical cord blood[J]. Exp Hematol，2005，33(11):1402-1416.

[15]Lee MW，Choi J，Yang MS，et al.Mesenchymal stem cells from cryopreserved human umbilical cord blood [J]. Biochemical and Biophysical Research Communications，2004，320(1):273-278.

[16]潘繼紅，何秀玲，鄒文霞.提高臍帶血采集質(zhì)量的策略及意義[J].寧夏醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2005，27(3):246-248.

[17]Oyeddin Bonab MA，Alimoghaddam KA，Goliaei ZA，et a1.Which factors call affect cord blood variables[J]，Transfusion，2004，44(50):690-693.

[18]遲作華，張 洹，何冬梅，等.臍血間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)條件的優(yōu)化[J].中國實(shí)用內(nèi)科雜志，2006，26（5）：372-375.

[19]Liu CH ，Wu ML，Hwang SM.Optimization of serum free medium for cord blood mesenchymal stem cells[J].Biochemical Engineering Journal，2007，33:1-9.

[20]Shetty P，Bharucha K，Tanavde V.Human umbilical cord blood serum can replace fetal bovine serum in the culture of mesenchymal stem cells[J].Cell Biology International，2007，31:293-298.

[21]劉素芳，鄢文海，韓雪飛，等.人臍血間充質(zhì)細(xì)胞體外分離培養(yǎng)方法及培養(yǎng)基特性[J].中國臨床康復(fù)，2005，9(46):34-35.

[22]Bicknese AR，Henderson V，Sinclair-Goodwin HS，et al.Cells derived from human fetal cord blood express markers for neurons ， astrocytes and oligodendrocytes [J].Exp Neurol，2001，170 :199.

[23]Rodriguez AM，Elabd C，Ddteil F，et al．Adipocyte diferentiation of multipotent cells established from human adipose tissue[J].BiochemBiophys Res Conta in，2004，315(2):255-263.

[24]MacDougald OA，Lane D.Transcriptional regulation of gene expression during adipocyte differentiation[J]. Ann Rev Biochem，1995，64:345-373.

[25]Boney CM，Smith RM.Gruppuso PA Modulation of insulin-Like growth factor 1 mitogenic signaling in 3T3-LI preadipocyte differentiation [J].EndocrinoIogy，1998，139:1638-1644.

[26]周 華，蔡國平.MAPK信號通路與脂肪細(xì)胞分化[J].生命的化學(xué)，2006，26（6）：505-507.

[27]謝麗娜，劉秀華.前脂肪細(xì)胞與蠶絲支架體外復(fù)合培養(yǎng)的實(shí)驗(yàn)研究[J].淮海醫(yī)藥，2007，25(1):6-7.

[28]Borzacchiello A，Mayol L，Ramires PA，et al.Structural and rheological characterization of hyaluronic acid-based scaffolds for adipose tissue engineering [J].Biomaterials，2007，28:4399-4408.

[收稿日期]2007-08-29[修回日期]2007-11-07

編輯/李陽利