人毛乳頭細(xì)胞條件培養(yǎng)液治療斑禿的臨床觀(guān)察

鐘白玉 宋志強(qiáng) 楊希川

[摘要]目的：人毛乳頭細(xì)胞條件培養(yǎng)液治療斑禿患者的臨床觀(guān)察。方法：用人毛乳頭細(xì)胞條件培養(yǎng)液治療100例斑禿患者，并分別選擇其中53例和30例作去炎松組和空白組自身對(duì)照。結(jié)果：人毛乳頭細(xì)胞條件培養(yǎng)液組、去炎松組和空白組治愈率分別為75％、51％、10％，有效率分別為97％、72％、30％，人毛乳頭細(xì)胞條件培養(yǎng)液組其治愈率和有效率均明顯高于去炎松組和空白組(P＜0．05)。結(jié)論：人毛乳頭細(xì)胞條件培養(yǎng)液對(duì)斑禿患者有明顯的治療作用。

[關(guān)鍵詞]人毛乳頭細(xì)胞條件培養(yǎng)液：斑禿；治療

[中圖分類(lèi)號(hào)]R758．71 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A [文章編號(hào)]1008—6455(2007)01—0038－04

研究表明，人毛乳頭凝集成團(tuán)的特性對(duì)其功能的發(fā)揮有著重要作用，盡管人們目前對(duì)毛發(fā)生長(zhǎng)周期變化的調(diào)控機(jī)制仍不清楚，但已經(jīng)注意到毛囊從生長(zhǎng)后期轉(zhuǎn)變?yōu)橥诵衅诘倪^(guò)程中，毛乳頭也隨之與毛母質(zhì)脫離、變小，其周?chē)难芤参s、退化。這提示毛發(fā)生長(zhǎng)周期有賴(lài)于毛乳頭分泌釋放的一些可溶性生長(zhǎng)因子，這些因子可能一方面影響毛乳頭本身，另一方面影響其周?chē)g質(zhì)，如血管。在過(guò)去的研究中，我們發(fā)現(xiàn)凝集性生長(zhǎng)的人毛乳頭細(xì)胞高表達(dá)VEGF，條件培養(yǎng)基培養(yǎng)的非凝集生長(zhǎng)人毛乳頭細(xì)胞VEGF的表達(dá)也明顯高于對(duì)照組，這進(jìn)一步證實(shí)了這種推論。我們將人毛乳頭細(xì)胞條件培養(yǎng)液(dermal papilla cell conditioned mediumDPCCM)初步應(yīng)用于臨床，觀(guān)察DPCCM對(duì)斑禿區(qū)毛囊的生物學(xué)效應(yīng)，發(fā)現(xiàn)DPCCM對(duì)斑禿區(qū)毛囊有明顯的促生長(zhǎng)作用。我們進(jìn)一步擴(kuò)大臨床病例，觀(guān)察DPCCM對(duì)斑禿患者的臨床治療效果。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料和方法

1．1試劑和材料

1．1．1 0．6％利多卡因生理鹽水溶液：將100ml生理鹽水在無(wú)菌環(huán)境下用一次性注射器抽出30ml，再用一次性注射器無(wú)菌注入2％鹽酸利多卡因溶液30ml。

1．1．2 DPCCM凍干粉：4℃保存，用前每支無(wú)菌注入3ml 0．6％利多卡因生理鹽水溶液，使用時(shí)皮下多點(diǎn)注射。

1．1．3醋酸曲安奈德注射液(丙酮去炎松)：上海通用藥業(yè)股份有限公司，本品為5ml混懸液，內(nèi)含50mg用效成分，使用前按1：3比例與0．6％利多卡因生理鹽水溶液混勻，使用時(shí)皮下多點(diǎn)注射。

1．2方法：DPCCM在通過(guò)安全性試驗(yàn)且經(jīng)本院倫理委員會(huì)討論同意臨床使用，使用前經(jīng)患者同意并簽署知情同意書(shū)。

1．2．1 DPCCM治療組：選擇100例年齡在10～68歲的斑禿患者，用3ml 0．6％利多卡因生理鹽水溶液溶解DPCCM，常規(guī)消毒患部皮膚后皮下多點(diǎn)注射，每周1次，共4次，治療完成后觀(guān)察2月。

1．2．2去炎松治療組：選擇DPCCM治療組中多發(fā)性斑禿患者53例，選擇與DPCCM治療患部距離在2cm以上的患部作為去炎松治療部位：用3ml 0．6％利多卡因生理鹽水溶液溶解1ml去炎松懸液，常規(guī)消毒患部皮膚后皮下多點(diǎn)注射，每周1次，共4次，治療完成后觀(guān)察2月。

1．2．3空白對(duì)照組：選擇DPCCM治療組中多發(fā)性斑禿患者30例，選擇與DPCCM距離在5cm以上的患部作為空白自身對(duì)照患部，用3ml 0．6％利多卡因牛理鹽水溶液，常規(guī)消毒患部皮膚后皮下多點(diǎn)注射，每周1次，共4次，治療完成后觀(guān)察2月。

1．3統(tǒng)計(jì)方法：SPSS10．0分析軟件：各組間治愈率和總有效率的比較用x²檢驗(yàn)，P值定為0．05，小于0．05為相差顯著。

2 結(jié)果

在DPCCM治療組：在100例斑禿患者中治愈75例，治愈率75％，高于去炎松治療組(x²=9．021；P＜0．05)和空白對(duì)照組(x²=40．625；P＜0．05)(圖1)；總有效97例，總有效率97％，高于去炎松治療組(x²＝21．363：P＜0．05)和空白對(duì)照組(x²=68．817；P＜0．05)，在治療的過(guò)程中，DPCCM治療的斑禿區(qū)新生毛發(fā)的生長(zhǎng)先是呈島狀(圖2)，新生的頭發(fā)生長(zhǎng)速度快、光澤度好(圖3)；而去炎松治療組的新生頭發(fā)則是呈現(xiàn)平原狀生長(zhǎng)，頭發(fā)生長(zhǎng)速度慢(圖4)，新生的頭發(fā)干燥無(wú)光澤。這可能是兩種藥物的作用的靶點(diǎn)不一樣所致，也有可能是毛發(fā)的生長(zhǎng)與一定濃度的毛乳頭生長(zhǎng)相關(guān)蛋白相關(guān)，或是與毛乳頭細(xì)胞的活力平行。在去炎松治療組：在治療的53例中治愈27例，治愈率51％，高于空白對(duì)照組(x²=13．914；P＜0．05)；總有效38例，總有效率72％，高于空白對(duì)照組(x²=13．561；P＜0．05)。空白對(duì)照組：毛發(fā)生K狀況較DPCCM治療組和去炎松組均要差(圖5)，在治療的30例中治愈3例，治愈率為10％，總有效9例，總有效率為30％。

3 討論

毛囊在哺乳動(dòng)物的整個(gè)生命過(guò)程中具有周期性生長(zhǎng)特性，經(jīng)歷著生長(zhǎng)期、退行期和休止期的周期性變化，毛囊生長(zhǎng)周期是生物個(gè)體固有的特性。通過(guò)對(duì)毛囊生長(zhǎng)的研究發(fā)現(xiàn)：在毛囊生長(zhǎng)的調(diào)控過(guò)程中，其中心環(huán)節(jié)是上皮－間質(zhì)的相互作用。毛乳頭是毛囊的主要間充質(zhì)成分，由一群非常獨(dú)特的成纖維細(xì)胞所組成，這些細(xì)胞產(chǎn)生毛囊生長(zhǎng)發(fā)育所需的獨(dú)特的細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular matrix ECM)，毛乳頭細(xì)胞ECM的變化與毛囊的生長(zhǎng)周期密切相關(guān)。因此可以推測(cè)：毛乳頭構(gòu)成了毛囊生長(zhǎng)的微環(huán)境，毛乳頭細(xì)胞通過(guò)旁分泌或自分泌的機(jī)制發(fā)送或接收信號(hào)，從而調(diào)節(jié)毛囊的發(fā)育和周期性生長(zhǎng)。毛乳頭細(xì)胞對(duì)毛囊發(fā)育和周期性生長(zhǎng)調(diào)控的影響依賴(lài)于與毛母質(zhì)細(xì)胞間的持續(xù)和緊密的連接(通過(guò)天然的ECM)。將毛囊生長(zhǎng)期的毛乳頭植入到無(wú)毛皮膚，能在體內(nèi)誘導(dǎo)毛囊的形成，對(duì)于誘導(dǎo)效率而言，毛乳頭與相應(yīng)表皮細(xì)胞間的連續(xù)和緊密連接是必要的；事實(shí)上，在實(shí)驗(yàn)條件下，毛乳頭如果與生長(zhǎng)中的毛囊分離，毛囊的生長(zhǎng)即停止：毛乳頭細(xì)胞在成熟毛囊生長(zhǎng)調(diào)控中的重要性，在無(wú)毛鼠中也得到了充分的體現(xiàn)，無(wú)毛鼠出生時(shí)毛發(fā)生長(zhǎng)正常，但換毛后毛發(fā)不再生長(zhǎng)，其原因在于毛乳頭的不完整性產(chǎn)生了轉(zhuǎn)錄因子的缺陷，從而不可逆地改變毛囊周期性生長(zhǎng)的能力，最終導(dǎo)致毛囊形態(tài)的損害。

斑禿是在不可預(yù)見(jiàn)的情況下，在不固定區(qū)域非創(chuàng)傷性毛發(fā)禿失。其發(fā)生范圍可為全身毛發(fā)所覆蓋的任意一塊皮膚。斑禿曾被認(rèn)為是T細(xì)胞介導(dǎo)的針對(duì)毛囊的器官特異性自身免疫，遺傳因素和環(huán)境因素可能是其誘因之一，但其真正誘因目前還不十分清楚。毛乳頭功能障礙可能是斑禿的主要原因，對(duì)斑禿的病理觀(guān)察可發(fā)現(xiàn)脫發(fā)區(qū)頭皮毛乳頭結(jié)構(gòu)松散，毛乳頭細(xì)胞有損傷跡象，提示斑禿中毛乳頭細(xì)胞不能合成和分泌一些調(diào)節(jié)因子，從而引起毛囊退化。從斑禿病人毛囊的毛乳頭細(xì)胞培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)斑禿區(qū)毛乳頭細(xì)胞培養(yǎng)生長(zhǎng)較正常緩慢，且不能像正常細(xì)胞刺激角質(zhì)形成細(xì)胞的生長(zhǎng)，這是否是由于刺激因子分泌減少或抑制性因子分泌增多所致尚不清楚，我們初步研究表明DPCCM是可明顯改善功能低下的毛乳頭細(xì)胞的活。Randall等比較了早禿患者脫發(fā)區(qū)和非脫發(fā)區(qū)毛乳頭細(xì)胞的生長(zhǎng)和培養(yǎng)情況，發(fā)現(xiàn)脫發(fā)區(qū)毛乳頭體積較小，毛乳頭細(xì)胞生K緩慢，而細(xì)胞形態(tài)和凝集特性無(wú)明顯變化，而交界處毛乳頭體積正常或稍小，但生長(zhǎng)速度與脫發(fā)區(qū)毛乳頭細(xì)胞相似。我們將凝集性生長(zhǎng)毛乳頭細(xì)胞的培養(yǎng)上清制備成DPCCM凍干粉，用于臨床觀(guān)察，來(lái)反映毛乳頭生長(zhǎng)相關(guān)蛋白對(duì)休止期毛囊的作用。在DPCCM治療的100例斑禿患者中，除3例無(wú)效外其余均有一定療效，這與去炎松治療組比較取得了良好的療效。DPCCM治療組中有61例為復(fù)發(fā)性斑禿患者且多次臨床治療無(wú)效，這61例患者在DPCCM治療后除2例無(wú)效外其余均有一定療效，說(shuō)明DPCCM在治療復(fù)發(fā)性斑禿上明顯優(yōu)于患者以前治療所使用過(guò)的方法。在DPCCM治療的100例斑禿患者中，我們選擇53例多發(fā)性斑禿患者，在同一患者頭部不同的斑禿患部分別應(yīng)用DPCCM和去炎松，發(fā)現(xiàn)DPCCM在治療斑禿時(shí)，其促進(jìn)頭發(fā)生長(zhǎng)的速度快于去炎松治療組，而且新生毛發(fā)在光澤度上也明顯優(yōu)于去炎松治療組。

毛乳頭細(xì)胞通過(guò)旁分泌或自分泌所產(chǎn)生的各種信號(hào)蛋白在毛囊發(fā)育和周期性生長(zhǎng)調(diào)控中的作用是毛囊研究的一個(gè)重要方面。近年來(lái)發(fā)現(xiàn)了多種在毛囊發(fā)育和毛囊周期性生長(zhǎng)中起作用的調(diào)節(jié)因子1，如成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(FGFs)、骨形成蛋白(BMPs)等，這些因子大多來(lái)源于毛囊上皮細(xì)胞，它們構(gòu)成了毛囊發(fā)育和成年毛囊周期性生長(zhǎng)過(guò)程中的復(fù)雜網(wǎng)絡(luò)，尚不能確定其中具有關(guān)鍵性作用的因子。但是對(duì)毛乳頭細(xì)胞自身特異性基因表達(dá)在毛囊發(fā)育和成年毛囊周期性生長(zhǎng)中所起作用的研究少有報(bào)道。因此有學(xué)者提出，毛乳頭細(xì)胞在毛囊發(fā)育及其在成年毛囊周期性生長(zhǎng)調(diào)控中發(fā)揮作用的分子機(jī)制將足以后毛囊研究的重要內(nèi)容。我們將DPCCM制備成生物制劑用于治療斑禿患者，發(fā)現(xiàn)DPCCM能用效改善斑禿區(qū)毛乳頭的分泌功能，改變毛發(fā)的生長(zhǎng)狀態(tài)，使休止期的毛發(fā)進(jìn)入生長(zhǎng)期，這說(shuō)明DPCCM可以促進(jìn)斑禿區(qū)毛發(fā)的生長(zhǎng)，達(dá)到治療斑禿的作用。DPCCM能否促進(jìn)其它脫發(fā)性疾病(如雄激素性禿發(fā))脫發(fā)區(qū)毛發(fā)的生長(zhǎng)，這還需在以后的研究中得以驗(yàn)證。

志謝：本研究得到第二軍醫(yī)大學(xué)衛(wèi)生毒理學(xué)教研室，第三軍醫(yī)大學(xué)臨床免疫學(xué)教研室，第三軍醫(yī)大學(xué)西南醫(yī)院中心實(shí)驗(yàn)室，第三軍醫(yī)大學(xué)西南醫(yī)院檢驗(yàn)科的大力支持；本研究同時(shí)也得到第三軍醫(yī)大學(xué)西南醫(yī)院皮膚科全體醫(yī)技護(hù)人員的鼎力幫助，在此對(duì)他(她)們的關(guān)心和協(xié)助表示衷心的感謝!

編輯／張惠娟

注：本文中所涉及到的圖表、注解、公式等內(nèi)容請(qǐng)以PDF格式閱讀原文。