不同斑試材料和加樣劑量對斑試皮膚反應(yīng)結(jié)果的影響

[摘要]目的：評估斑試材料、劑量、時間、抗原、濃度等因素對斑貼試驗結(jié)果的影響。方法：采用國際標準(國際標準芬蘭小室，F(xiàn)inn－chamber)、日本POLA、中國中亞牌三種材料，對男、女各22名受試者背部進行斑貼試驗，濃度為十二烷基硫酸鈉(2％、1％、0.5％)、丙二醇(20％、10％)、戊二醇(20％、10％)、原濃度腮紅，對照物為生理鹽水和蒸餾水。結(jié)果：Finn－chamber加樣劑量為0.015ml/0.015g，陽性率為15.76％；日本POLA加樣劑量為0.05ml/0.05g，陽性率為17.69％；中國中亞牌斑試器加樣劑量為0.03ml/0.03g，陽性率為14.11％。日本POLA和中國中亞牌斑試器兩組間陽性率有顯著差別，其余各組間無差別。十二烷基硫酸鈉在24h的反應(yīng)最高，男性陽性反應(yīng)率較女性高。結(jié)論：按不同的加樣劑量檢測，國際標準Finn－chamber斑試器加樣劑量小、敏感性高，斑貼后的觀察時間、抗原濃度以及受試者性別等因素對斑試皮膚反應(yīng)陽性結(jié)果也有影響。

[關(guān)鍵詞]斑貼試驗；斑試材料；十二烷基硫酸鈉

[中圖分類號]R758.23 [文獻標識碼]A [文章編號]1008－6455(2007)03－0359－03

斑貼試驗在臨床應(yīng)用廣泛，常用來檢測潛在的刺激物或過敏原。在化妝品領(lǐng)域主要用于終產(chǎn)品在人體的安全性評價。既往的研究顯示包括加樣劑量、接觸面積、觀察時間、抗原濃度、斑試物體積在內(nèi)的多種因素可影響斑貼試驗結(jié)果的準確性和重復(fù)性。但不同材料及不同容積的斑試器對斑試結(jié)果的影響卻少有研究。本試驗觀察了三種不同類型的斑試器、斑貼試驗后不同觀察時間、斑貼抗原濃度以及受試者性別等因素對斑貼試驗結(jié)果的影響，對可能影響斑試結(jié)果的因素進行了分析，現(xiàn)將結(jié)果報道如下。

1 材料和方法

1．1 斑試器：本試驗選用了三種斑試器：①國際標準Finn－chamber(國際標準芬蘭小室)：日本大正富山醫(yī)藥品株式會社生產(chǎn)，為鋁質(zhì)材料，直徑7mm，加樣劑量0.015ml/0.015g；②日本POLA：日本POLA化成工業(yè)株式會社生產(chǎn)，直徑15mm，加樣劑量0.05ml/0.05g；③中國中亞牌斑貼試驗?zāi)z帶(A型)：上海醫(yī)療器械(集團)有限公司衛(wèi)生材料廠生產(chǎn)，直徑12mm，加樣劑量0.03ml/0.03g。

1．2 斑試物及濃度：十二烷基硫酸鈉是經(jīng)典的皮膚刺激試驗物，丙二醇和1，2－戊二醇是常用的保濕化妝品原料。本試驗選用了三種不同濃度的十二烷基硫酸鈉(SLS)，分別為2.0％、1％、0.5％，作為斑貼試驗陽性對照；丙二醇的濃度分別為20％、10％，1，2－戊二醇的濃度分別為20％、10％，腮紅；生理鹽水和蒸餾水為斑貼試驗陰性對照。

1．3 受試者：共選擇44名健康受試者，其中女22例，男22例，年齡20～48歲，平均為(27.07±20.80)歲。2個月內(nèi)使用過糖皮質(zhì)激素、非甾體抗炎藥及抗組胺藥物者不納入本研究，另外，哺乳或妊娠期婦女、皮膚疾病、曬斑、瘢痕體質(zhì)或過度文身及遺傳過敏體質(zhì)者均不列入研究。所有受試者在試驗前均簽訂知情同意書。

1．4 操作方法

1．4．1受試部位：選擇受試者的背部(肩胛骨以下，腰部以上)以及腋中線至腋前線作為受試部位，受試樣品加樣劑量分別為Finn－chamber 0.015ml、POLA 0.050ml和中國中亞牌常規(guī)斑試器0.030ml，受試物直接貼敷于皮膚，貼敷時間為24h。斑試物濃度十二烷基硫酸鈉分別為2.0％、1％、0.5％，作為斑貼試驗陽性對照；丙二醇的濃度分別為20％、10％；1，2一戊二醇的濃度分別為20％、10％；腮紅；生理鹽水和蒸餾水為斑貼試驗陰性對照。試劑配置及加樣過程中均有專人復(fù)核。

1．4．2 陽性評估：24h后去除斑試器，受試者靜坐30min，在統(tǒng)一明亮的環(huán)境下，參照文獻按標準臨床評估方法對皮膚反應(yīng)進行評估，去除斑試物當天為1h，第二天為24h，第三天為48h。

1．5 統(tǒng)計學(xué)處理：不同斑試材料、男女陽性率、斑試物濃度以及不同觀察時間之間比較均采用X²檢驗。

2 結(jié)果

2．1 三種斑試器結(jié)果比較(見表1)：以“-、±”為陰性反應(yīng)，“+～+++”為陽性反應(yīng)。Finn－chamber加樣劑量為0.015ml/0.0t5g，陽性率為15.76％；POLA加樣劑量為0.05ml/0.05g，陽性率為17.69％：中國中亞牌斑試器加樣劑量為0.03ml/0.03g，陽性率為14.11％。三種斑試器比較，F(xiàn)inn－chamber和POLA斑試器無統(tǒng)計學(xué)差異；Finn－chamber和國產(chǎn)斑試器無統(tǒng)計學(xué)差異；POLA和國產(chǎn)斑試器問有統(tǒng)計學(xué)差異。此外，POLA斑試器脫失3孔，國產(chǎn)斑試器脫失30孔，F(xiàn)inn－chamber斑試器未見脫失。

2．2 男、女皮膚陽性反應(yīng)比較(見表2)：男性陽性反應(yīng)率為17.41％，女性陽性反應(yīng)率為14.34％。經(jīng)統(tǒng)計學(xué)比較兩者有顯著性差異(P＜0.05)。

2．3 斑試物濃度、觀察時間與皮膚陽性反應(yīng)間的比較(見圖1～2)：以蒸餾水為陰性對照，對不同濃度樣品及不同觀察時間的陽性反應(yīng)孔數(shù)檢驗，結(jié)果顯示十二烷基硫酸鈉的濃度與皮膚陽性反應(yīng)率呈正相關(guān)，不同濃度梯度問的結(jié)果有統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.05)。SLS組，觀察24h組陽性率最高，與48h組相比有統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.05)；而其他兩組斑試物，1h組陽性率最高，與24h及48h組相比有統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.05)。

3 討論

斑貼試驗在臨床上廣泛用于檢測潛在的刺激物或過敏原，多種實驗因素可影響斑貼試驗結(jié)果的準確性和可重復(fù)性，如不同斑試物體積或劑量、不同斑試器類型、不同性別以及斑貼試驗后不同時間對試驗結(jié)果均有影響。文獻報道體積和劑量對斑試皮膚反應(yīng)結(jié)果有一定影響，隨試驗物劑量增加，皮膚反應(yīng)程度有增加趨勢。由于POLA和國產(chǎn)斑試器材料相同或相似，僅容量不同，此結(jié)果表明增加斑試物的劑量可使斑貼試驗結(jié)果陽性率提高；比較Finn－chamber和國產(chǎn)斑試器材料， 雖然Finn－chamber斑試器加樣劑量僅有15μl，但其陽性率仍高于加樣劑量為2倍的國產(chǎn)斑試器，提示Finn－chamber斑試器的鋁制材料比塑料材料有更高的斑貼試驗陽性檢出率。

SLS是強刺激性化學(xué)物質(zhì)，它對皮膚的刺激性和其濃度正相關(guān)，因此SLS常被用做斑貼試驗體系的陽性對照物質(zhì)。本實驗選用了三種不同濃度的SLS在同一受試者身上進行斑貼，結(jié)果表明SLS的斑貼試驗陽性率隨濃度下降逐漸降低，各濃度之間有顯著性差異(P＜0.05)。SLS之所以在24h的反應(yīng)最高，原因是由于濃度不同，SLS出現(xiàn)皮膚屏障破壞最大反應(yīng)的時間也是不同的，低濃度及短時間的SLS可以引起皮膚屏障功能的破壞，但它只影響角質(zhì)層脂質(zhì)及蛋白變化，不引起炎癥反應(yīng)；但高濃度和長時間SLS刺激不會繼續(xù)增加對屏障功能的破壞，而是引起炎癥反應(yīng)，且炎癥反應(yīng)至少在6h之后才會出現(xiàn)，這一結(jié)果表明本實驗體系的穩(wěn)定性和可靠性，所得結(jié)果是客觀準確的。

不同性別對斑貼試驗結(jié)果的影響少有報道。男、女皮膚在生理特點甚至組織結(jié)構(gòu)上有所不同，比如受內(nèi)分泌影響，男性皮膚皮脂腺較豐富，功能活躍，男性皮膚多毛，通過毛囊的吸收也可能比女性多一些。從質(zhì)地上看男性皮膚不如女性皮膚細膩，這可能和角質(zhì)層生理狀態(tài)以及含水量有關(guān)。本文發(fā)現(xiàn)針對同樣的化學(xué)物質(zhì)，在同一試驗體系內(nèi)男性皮膚比女性皮膚敏感性高。

在化妝品領(lǐng)域內(nèi)斑貼試驗技術(shù)被越來越多地應(yīng)用于終產(chǎn)品在人體的安全性評價，即預(yù)測產(chǎn)品是否可能引起人類皮膚的刺激性或變態(tài)反應(yīng)。在進行這一類臨床評價時應(yīng)盡量排除上述諸多因素對實驗結(jié)果的影響。