維生素Ｄ受體基因多態(tài)性與白癜風(fēng)的相關(guān)性研究

[摘要]目的：探討維生素D受體基因多態(tài)性與白癜風(fēng)的相關(guān)性。方法：采用聚合酶鏈反應(yīng)和限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性方法，對(duì)749例白癜風(fēng)患者和763例健康人的維生素D受體基因型進(jìn)行分析。結(jié)果：白癜風(fēng)患者維生素D受體BsmI、ApaI、TaqI位點(diǎn)基因型的分布與正常對(duì)照組相比有顯著性差異，bb、aa、tt基因型在白癜風(fēng)患者中頻率較高，F(xiàn)okI位點(diǎn)基因型的分布與對(duì)照組無(wú)明顯差異。單倍體型分析表明FokI位點(diǎn)和BsmI位點(diǎn)，BsmI位點(diǎn)和ApaI位點(diǎn)，BsmI和TaqI位點(diǎn)，ApaI位點(diǎn)和TaqI位點(diǎn)之間存在較強(qiáng)的連鎖不平衡，白癜風(fēng)患者中fbAT、FbAT和FbaT單倍體型的頻率顯著高于對(duì)照組。結(jié)論：維生素D受體基因多態(tài)性與白癜風(fēng)有明顯的相關(guān)性。攜帶維生素D受體基因純合子bb、aa或tt基因型可能會(huì)增加對(duì)白癜風(fēng)的易感性。

[關(guān)鍵詞]白癜風(fēng)；維生素D受體；多態(tài)性

[中圖分類(lèi)號(hào)]R758.41 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A [文章編號(hào)]1008－6455(2007)03－0302－03

白癜風(fēng)是一種以色素脫失為特征的皮膚病，本病影響容貌，治療困難。既往研究表明本病是一種多基因遺傳病，屬于自身免疫病的范疇，由免疫功能異常所導(dǎo)致的黑素細(xì)胞的破壞是本病發(fā)生的主要機(jī)制。維生素D受體(vitamin D Receptor，VDR)是細(xì)胞核激素受體，屬于類(lèi)固醇激素/甲狀腺受體超家族的成員，維生素D及其衍生物通過(guò)VDR發(fā)揮重要的生物學(xué)功能。以往研究證實(shí)VDR不僅參與骨骼的生長(zhǎng)發(fā)育，而且與T細(xì)胞的功能調(diào)節(jié)以及黑素細(xì)胞的生物學(xué)功能明顯相關(guān)，在白癜風(fēng)患者VDR表達(dá)水平降低，這些結(jié)果都表明VDR與白癜風(fēng)有密切的關(guān)系。VDR基因存在單核苷酸多態(tài)性，這些單核苷酸多態(tài)性與多種疾病的易感性有重要的關(guān)系，但是在白癜風(fēng)患者人群VDR基因多態(tài)性的意義尚不明確。本研究采用聚合酶鏈反應(yīng)和限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性方法研究了中國(guó)漢族人群VDR基因多態(tài)性與白癜風(fēng)的相關(guān)性。

1 研究對(duì)象和方法

1．1 研究對(duì)象：白癜風(fēng)患者組，隨機(jī)選取本院門(mén)診白癜風(fēng)患者749例，男性414例，女性335例，均為漢族，年齡2～95歲(平均24.9±13.9歲)。正常對(duì)照組來(lái)自同地區(qū)763例無(wú)血緣關(guān)系的健康人員，男性413例，女性350例，均為漢族，年齡1～75歲(平均26.2±13.7歲)。

1．2 實(shí)驗(yàn)方法

1．2．1 基因組DNA提取：取外周抗凝血1ml，用基因組提取試劑盒(天根生公司)提取基因組DNA。

1．2．2 PCR擴(kuò)增及酶切：取基因組DNA約50ng進(jìn)行PeR反應(yīng)，反應(yīng)體積為20μl。取PCR反應(yīng)產(chǎn)物3μl進(jìn)行酶切，酶切總體積為10μl。具體PCR及酶切反應(yīng)條件見(jiàn)表1。

1．2．3 VDR多態(tài)性分析：分別用限制性?xún)?nèi)切酶FokI、BsmI、ApaI、TaqI(NEB公司)對(duì)不同的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行酶切，3％的瓊脂糖凝膠電泳分離酶切產(chǎn)物，EB染色及紫外線(xiàn)投射儀下觀(guān)察結(jié)果。分別以4種限制性?xún)?nèi)切酶第一個(gè)字母的大寫(xiě)F、B、A、T表示缺乏相應(yīng)的多態(tài)性位點(diǎn)，以小寫(xiě)字母f、b、a、t表示存在相應(yīng)的多態(tài)性位點(diǎn)，f、b、a、t突變位點(diǎn)經(jīng)酶切后分別釋放如下大小的片斷。f:196bp和69 bp，b:177bp和182 bp，a:280bp和210bp，t:290bp和200 bp。

1．3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：分別統(tǒng)計(jì)病例組和對(duì)照組基因型和等位基因的分布頻率。數(shù)據(jù)經(jīng)Hardy－Weinberg遺傳平衡檢驗(yàn)后，用SPSS10.0統(tǒng)計(jì)軟件分析。采用卡方檢驗(yàn)，比較白癜風(fēng)患者組和對(duì)照組VDR基因型分布上的差異，并分析VDR基因型與白癜風(fēng)的相關(guān)性。

2 結(jié)果

2．1 Hardy－Weinberg遺傳平衡檢驗(yàn)：對(duì)白癜風(fēng)組及對(duì)照組VDR基因型分布進(jìn)行檢驗(yàn)。結(jié)果白癜風(fēng)組及對(duì)照組均符合Hardy－Weinberg遺傳平衡(表2)。

2．2 VDR基因型分布：白癜風(fēng)患者VDR BsmI、ApaI、TaqI位點(diǎn)基因型的分布情況與正常對(duì)照組有顯著性差異bb、aa、tt、基因型在白癜風(fēng)患者中頻率較高，F(xiàn)okI位點(diǎn)基因型的分布與正常對(duì)照組無(wú)顯著性差異(表3)。

2．3 單倍體分析：結(jié)果顯示FokI位點(diǎn)和BsmI位點(diǎn)之間，kpaI位點(diǎn)、TaqaI位點(diǎn)和BsmI位點(diǎn)兩兩之間均存在較強(qiáng)的連鎖不平衡(表4)，白癜風(fēng)患者中fbAT、FbAT和FbaT單倍體型的頻率顯著高于對(duì)照組，提示7DR基因型為fbAT、FbAT和FbaT的個(gè)體患白癜風(fēng)的危險(xiǎn)性較大(表5)。

3 討論

維生素D受體是甲狀腺激素受體超家族成員，是介導(dǎo)維生素D類(lèi)活性物質(zhì)1，25－(OH)2D3發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)的核內(nèi)大分子，1，25－(OH)2D3不僅參與正常的骨質(zhì)代謝功能，而且還具有其他多方面的作用。臨床研究不僅觀(guān)察到白癜風(fēng)患者存在VDR的低表達(dá)，而且發(fā)現(xiàn)維生素D衍生物對(duì)白癜風(fēng)具有治療作用。維生素D在白癜風(fēng)中的作用主要有兩方面：其一是對(duì)免疫系統(tǒng)的調(diào)節(jié)功能，其二是對(duì)黑素細(xì)胞生物學(xué)功能的影響。

VDR基因存在多個(gè)單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)，這些單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)不同程度地影響維生素D的生物學(xué)功能的發(fā)揮。研究表明VDR基因多態(tài)性與多種自身免疫性疾病以及腫瘤有密切的關(guān)系。李春英。等發(fā)現(xiàn)VDR基因多態(tài)性與黑素瘤有明顯相關(guān)性，Bitlea等在一小樣本研究中也表明VDR基因多態(tài)性與白癜風(fēng)相關(guān)，基于這些研究結(jié)果以及VDR的生物學(xué)特性，我們認(rèn)為VDR基因多態(tài)性可能與白癜風(fēng)有著密切的關(guān)系。

我們的研究結(jié)果表明白癜風(fēng)患者和正常對(duì)照組的BsmI、ApaI、TaqI位點(diǎn)基因型分布有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，bb、aa、tt基因型在白癜風(fēng)患者中出現(xiàn)的頻率要高于對(duì)照組，攜帶維生素D受體基因純合子bb、aa或tt基因型可能會(huì)增加對(duì)白癜風(fēng)的易感性。進(jìn)一步進(jìn)行單倍體分析表明白癜風(fēng)患者中fbAT、FbAT和FbaT單倍體型的頻率顯著高于對(duì)照組，提示VDR基因型為fbAT、FbAT和FbaT的個(gè)體患白癜風(fēng)的危險(xiǎn)性較大。

本研究表明，VDR基因多態(tài)性與白癜風(fēng)有非常密切的關(guān)系，攜帶bb、aa或tt基因型的個(gè)體患白癜風(fēng)的風(fēng)險(xiǎn)更高。由于VDR多態(tài)性具有非常明顯的種族差異，因此在其他種族人群進(jìn)行進(jìn)一步研究具有重要意義。