一株高效降解玉米蛋白粉枯草芽孢桿菌的篩選及其發(fā)酵特性研究

■王雨婷 繆禮鴻周鳳鳴 劉蒲臨

(武漢輕工大學(xué)生物與制藥工程學(xué)院，湖北武漢 430023)

玉米蛋白粉是玉米濕法加工淀粉廠主要的副產(chǎn)物之一，由玉米籽粒經(jīng)過0.1%～0.2%的亞硫酸鈉浸泡、破碎、洗滌后濕磨制得的粗淀粉乳再經(jīng)分離壓濾干燥而成[1]。玉米蛋白粉蛋白質(zhì)含量60%以上，其余約為20%的淀粉和少量酯類、玉米黃素、葉黃素等[2]。由于玉米蛋白粉中的蛋白質(zhì)主要為不溶性的醇溶蛋白[3]，而且食味性差，嚴(yán)重影響其在食品和飼料工業(yè)中的應(yīng)用[4-5]。將玉米蛋白經(jīng)酶或微生物發(fā)酵水解得到的小分子高活性玉米肽具有易于消化吸收、抗氧化、延緩衰老等功能[6-7]。微生物發(fā)酵法制備活性肽具有減少苦味產(chǎn)生等優(yōu)點，是一種具有發(fā)展?jié)摿Φ奶幚矸椒╗8]。國內(nèi)已有研究者采用芽孢桿菌[9-10]和真菌[11]對玉米蛋白粉進(jìn)行發(fā)酵和工藝優(yōu)化方面的研究。

鑒于芽孢桿菌具有生長快速、耐受性好、產(chǎn)蛋白酶等活性高、安全性好等優(yōu)點[12]，本試驗以玉米蛋白粉為主要原料，進(jìn)行降解玉米蛋白粉高效益生芽孢桿菌菌株的篩選、菌株耐亞硫酸鈉特性的比較和玉米蛋白粉液態(tài)發(fā)酵制備玉米肽工藝優(yōu)化研究，為提高玉米蛋白粉的資源開發(fā)[13]和利用提供參考。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

1.1.1 樣品及菌種來源

玉米蛋白粉：市購；酸性蛋白酶制劑：湖南新鴻雁鷹生物工程有限公司；中性蛋白酶和堿性蛋白酶制劑：南寧龐博生物工程有限公司；地衣芽孢桿菌S14、枯草芽孢桿菌S37和大腸桿菌E601：均為本實驗室冷凍保藏菌株。

1.1.2 主要試劑

酵母粉、蛋白胨：安琪酵母股份有限公司。

測定蛋白酶活的試劑：無水碳酸鈉溶液、三氯乙酸溶液、磷酸緩沖液、酪蛋白、100 μg/ml酪氨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液、福林酚試劑。

測定可溶性蛋白的試劑：NaOH溶液、硼酸溶液、0.1 mol/l鹽酸溶液、甲基紅-溴甲酚綠指示劑。以上試劑均為國產(chǎn)分析純。

1.1.3 培養(yǎng)基

玉米蛋白粉平板篩選培養(yǎng)基：KH2PO43.0 g/l、玉米蛋白粉 7.5 g/250 ml、K2HPO42.0 g/l、NH4Cl 0.1 g/l、MgSO4·7H2O 0.2 g/l、NaCl 5.0 g/l、蛋白胨1.5 g/l、牛肉膏0.6 g/l、瓊脂20 g/l、蒸餾水1.0 L，pH值7.0～7.5。

牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基：牛肉膏5.0 g/l、蛋白胨10.0 g/l、NaCl 5.0 g/l、蒸餾水1.0 L，pH值7.0～7.5。固體培養(yǎng)基加入20 g/l瓊脂。

LB培養(yǎng)基：胰蛋白胨5.0 g/l、蛋白胨10.0 g/l、Na?Cl 10.0 g/l、瓊脂 20 g/l、蒸餾水 1.0 L，pH值7.0。

亞硫酸鈉生長培養(yǎng)基：牛肉膏 3.0 g/l、酵母浸粉2.0 g/l、蛋白胨 10.0 g/l、NaCl 5.0 g/l、無水亞硫酸鈉2.0 g/l、蒸餾水 1.0 L，pH值7.0～7.5。

玉米蛋白粉基礎(chǔ)發(fā)酵培養(yǎng)基：玉米蛋白粉80 g/l、KH2PO41.65 g/l、K2HPO40.5 g/l、CaCl20.1 g/l、NaCl 0.5 g/l、蛋白胨 2.0 g/l、蒸餾水 1.0 L，pH值8.0。

玉米蛋白粉優(yōu)化發(fā)酵培養(yǎng)基：玉米蛋白粉40 g/l、KH2PO41.65 g/l、K2HPO40.5 g/l、CaCl20.1 g/l、NaCl 0.5 g/l、蛋白胨 2.0 g/l、蒸餾水 1.0 L，pH值7.5。

以上培養(yǎng)基根據(jù)pH值不同皆用6 mol/l NaOH溶液調(diào)配，滅菌條件為121℃、20 min。

1.2 儀器與設(shè)備

DNP-9082恒溫培養(yǎng)箱（上海精宏實驗設(shè)備有限公司）；ZQLY-300F振蕩培養(yǎng)箱（上海知楚儀器）；WH-3微型旋渦混合儀（上海滬西分析儀器廠有限公司）；HH-6恒溫水浴鍋（國華電器有限公司）；UV-5900PC紫外可見分光光度計（上海元析儀器有限公司）；SH220石墨消解儀（海能儀器）；SD-1500噴霧干燥機(jī)（迪沃設(shè)備）。

1.3 實驗方法

1.3.1 降解玉米蛋白粉芽孢桿菌的篩選

從豆粕樣品中各取10 g分別加至裝有90 ml無菌水的三角瓶中。搖勻后放入80℃恒溫水浴鍋中處理20 min，然后搖勻稀釋，分別取10-3、10-4、10-5三個稀釋度涂布到玉米蛋白粉平板篩選培養(yǎng)基上，于30℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72 h，每隔12 h觀察測定菌落周圍透明圈的大小[14]。

1.3.2 堿性蛋白酶活力的測定

福林酚試劑法[15]測定出篩選得到的菌株的堿性蛋白酶活性,比較堿性蛋白酶活性大小。

蛋白酶活的計算公式：

式中：A——由樣品測得凈OD值，查標(biāo)準(zhǔn)曲線得相當(dāng)?shù)睦野彼嵛⒖藬?shù)(μg)；

4——4 ml反應(yīng)液總體積(取出1 ml測定即4倍)；

n——酶液稀釋的倍數(shù)；

10——反應(yīng)時間(min)。

1.3.3 序列分析和菌種鑒定

對篩選到的蛋白酶活性較高的菌株進(jìn)行16S rD?NA測序。細(xì)菌DNA采取試劑盒抽提后，PCR擴(kuò)增16S rDNA，細(xì)菌的16S rDNA引物為27F和1492R。反應(yīng)體系采用50 μl的反應(yīng)體系。測序結(jié)果采用BioaEdit軟件人工校對拼接，拼接后的序列在NCBI核酸序列數(shù)據(jù)庫中進(jìn)行同源序列搜索。根據(jù)同源序列搜索結(jié)果，選取與測試菌株關(guān)系較近的模式菌株的16S rDNA區(qū)序列，用MEGA軟件采取鄰接法構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹。

1.3.4 芽孢桿菌無菌濾液對大腸桿菌的抑制作用

采用牛津杯法[16]，將芽孢桿菌和大腸桿菌種子液培養(yǎng)18 h，離心后取上清液經(jīng)過無菌濾膜過濾，分別調(diào)整到適當(dāng)?shù)臐舛取Ｎ?.1 ml大腸桿菌無菌濾液涂布于LB平板上，用無菌鑷子取滅菌后的牛津杯(外徑8 mm)置于其上，輕壓，使杯底緊貼于培養(yǎng)基上。每個牛津杯加入0.15 ml芽孢桿菌無菌濾液。然后將培養(yǎng)皿置于30℃恒溫培養(yǎng)24 h，測抑菌圈直徑(包括牛津杯直徑)。

1.3.5 亞硫酸鈉對細(xì)菌生長影響的測定方法

用接種環(huán)挑取待測菌株于牛肉膏液體培養(yǎng)基中，在37℃、170 r/min的條件下振蕩培養(yǎng)18 h，將此菌液按5%的接種量分別接種于玉米蛋白粉基礎(chǔ)發(fā)酵培養(yǎng)基和亞硫酸鈉生長培養(yǎng)基中，在37℃、170 r/min條件下振蕩培養(yǎng)48 h，每隔12 h取樣，經(jīng)適當(dāng)稀釋后涂布于牛肉膏平板培養(yǎng)，測細(xì)菌活菌數(shù)。

1.3.6 玉米蛋白粉發(fā)酵工藝優(yōu)化方法及可溶性蛋白含量計算方法

挑取經(jīng)平板活化的X1-1菌株接種于牛肉膏液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)，再將此種子液按一定比例接種于玉米蛋白粉發(fā)酵培養(yǎng)基中，在初始發(fā)酵條件（培養(yǎng)基pH值8.0、接種量5%、搖床轉(zhuǎn)速170 r/min、培養(yǎng)溫度37℃、培養(yǎng)時間48 h）的基礎(chǔ)上，采用單因素試驗對培養(yǎng)基中玉米蛋白粉含量、培養(yǎng)基pH值、接種量、發(fā)酵溫度、搖床轉(zhuǎn)速及發(fā)酵時間等工藝參數(shù)進(jìn)行優(yōu)化。發(fā)酵液經(jīng)離心（4 000 r/min、10 min）后取上清液，采用凱氏定氮法(GB5009.5-2010)測定可溶性蛋白含量。

可溶性蛋白含量的計算公式：

式中：S——可溶性蛋白含量(%)；

V1——樣品滴定消耗鹽酸的量(ml)；

V0——空白滴定消耗鹽酸的量(ml)；

c——鹽酸標(biāo)準(zhǔn)液濃度(mol/l)；

6.25 ×0.014——蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)換系數(shù)；

V——可溶性蛋白的體積(ml)；

m——樣品的質(zhì)量(g)。

1.3.7 噴霧干燥樣品制備及小肽含量計算方法

對玉米蛋白粉發(fā)酵液進(jìn)行噴霧干燥處理，物料進(jìn)風(fēng)溫度為180℃，出風(fēng)溫度控制在75～90℃之間，蠕動泵轉(zhuǎn)速為1 800 ml/h，風(fēng)機(jī)速度為50 Hz[17]。噴霧干燥后，凱氏定氮法(QB/T2653-2004）測定樣品中的粗蛋白、小肽含量[18]。

小肽的計算公式：

式中：V1——酸溶蛋白滴定消耗鹽酸的量(ml)；

V2——粗蛋白滴定消耗鹽酸的量(ml)；

V0——空白滴定消耗鹽酸的量(ml)；

3——酸溶蛋白檢測過程中，樣品稀釋的倍數(shù)。

1.3.8 蛋白肽的電泳分析

制備凝膠，采用分離膠和濃縮膠組成的凝膠板，下層為分離膠，上層為濃縮膠。發(fā)酵樣品經(jīng)無菌水稀釋一定的濃度后，離心（8 000 r/min，10 min），分別取上清液和沉淀物與buffer處理，原料做同樣的處理，作為對照組。用微量進(jìn)樣器取混合液20 μl加于凝膠的每個凹槽中,在電泳槽中注入Tris-甘氨酸緩沖液，控制電泳電流電壓，電泳2～3 h后結(jié)束，再用0.25%考馬斯亮藍(lán)染色1 h，最后用甲醇-冰醋酸脫色，將膠板放入凝膠成像系統(tǒng)進(jìn)行照相與分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 降解玉米蛋白粉芽孢桿菌菌株的篩選

2.1.1 芽孢桿菌透明圈(H/C)值的測定結(jié)果

從3個豆粕樣品中共分離獲得10株水解圈較明顯的芽孢桿菌菌株，透明圈(H/C)值，如表1所示。X1-1，Xla，X1-3-1這三種菌株透明圈(H/C)值相對較大，其中X1-1最大，可達(dá)1.60。

表1 10株產(chǎn)蛋白酶芽孢桿菌透明圈(H/C)值

2.1.2 堿性蛋白酶活性測定結(jié)果

篩選出的10株芽孢桿菌在玉米蛋白粉基礎(chǔ)發(fā)酵培養(yǎng)基中發(fā)酵，其發(fā)酵液的堿性蛋白酶活性測定結(jié)果如表2所示。X1-1、X1-3-1、X1a這三菌株透明圈值相對比較大，堿性蛋白酶活性也比較高。

表2 堿性蛋白酶活性測定結(jié)果

2.2 三株芽孢桿菌的系統(tǒng)進(jìn)化樹

對篩選到的三株蛋白酶活性較高的芽孢桿菌進(jìn)行16S rDNA基因測序分析，與已知細(xì)菌的16S rDNA序列的相似性比較結(jié)果如圖1所示。X1-1菌株與Ba?cillus subtilis的16S rDNA序列同源性達(dá)100%，鑒定為枯草芽孢桿菌；而X1-3-1和X1a菌株與Bacillu am?yloliquefacien的16S rDNA序列同源性均達(dá)100%，鑒定為解淀粉芽孢桿菌。

2.3 芽孢桿菌對大腸桿菌抑制作用的結(jié)果

3株芽孢桿菌對大腸桿菌E601的平板抑菌圈直徑值（D-d）測定結(jié)果見表3?？莶菅挎邨U菌X1-1對大腸桿菌具有明顯的抑制作用，因此選取該菌株用于玉米蛋白粉發(fā)酵試驗。

圖1 依據(jù)16S rDNA序列構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育樹

表3 大腸桿菌抑菌圈直徑值（D-d）

2.4 不同菌株在玉米蛋白粉基礎(chǔ)發(fā)酵培養(yǎng)基和亞硫酸鈉生長培養(yǎng)基中生長能力的比較測定結(jié)果

2.4.1 三株芽孢桿菌在不同培養(yǎng)基中的生長情況和產(chǎn)蛋白酶能力比較

將本研究篩選到的X1-1菌株與本實驗室保藏的2株產(chǎn)蛋白酶活性較高的芽孢桿菌S14和S37進(jìn)行比較。3株芽孢桿菌在牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基和玉米蛋白粉基礎(chǔ)發(fā)酵培養(yǎng)基中的生長曲線見圖2。結(jié)果表明，在牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基中3株芽孢桿菌的生長情況相似（見圖2A），但在玉米蛋白粉基礎(chǔ)發(fā)酵培養(yǎng)基中，X1-1的生長情況顯著優(yōu)于菌株S14和S37，后2株芽孢桿菌在玉米蛋白粉基礎(chǔ)發(fā)酵培養(yǎng)基中受到明顯抑制（見圖2B）。

將X1-1、S14和S37菌株分別接種于在牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基和玉米蛋白粉基礎(chǔ)發(fā)酵培養(yǎng)基中發(fā)酵培養(yǎng)，發(fā)酵液堿性蛋白酶酶活的測定結(jié)果見表4。結(jié)果表明，這3株芽孢桿菌在牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基中的蛋白酶活相差并不大，但在玉米蛋白粉基礎(chǔ)發(fā)酵培養(yǎng)基中，X1-1菌株的蛋白酶酶活比S14和S37菌株的酶活高2倍以上。顯然，這種差異是由于S14和S37菌株在玉米蛋白粉基礎(chǔ)發(fā)酵培養(yǎng)基中生長能力較弱引起的。

圖2 三株芽孢桿菌在不同培養(yǎng)基中的生長曲線

表4 三株芽孢桿菌在不同培養(yǎng)基中的蛋白酶酶活比較

2.4.2 三株芽孢桿菌在含不同濃度的亞硫酸鈉培養(yǎng)基中的生長結(jié)果

考慮到玉米蛋白粉的生產(chǎn)是由玉米經(jīng)過亞硫酸鈉浸泡而來，使得玉米蛋白粉中有含硫化合物殘留。菌株X1-1、S14和S37在玉米蛋白粉基礎(chǔ)發(fā)酵培養(yǎng)基中生長能力的差異可能是由于它們對亞硫酸鈉耐受能力的不同導(dǎo)致的，因此，本研究對這3株芽孢桿菌耐亞硫酸鈉的能力進(jìn)行了測試。3株芽孢桿菌在含有0.5～2 g/l亞硫酸鈉生長培養(yǎng)基上的生長情況見圖3。由圖3可知，X1-1菌株在含2 g/l的亞硫酸鈉平板上仍生長良好，而S14和S37菌株均不能生長，表明X1-1菌株對亞硫酸鈉具有明顯的耐受性。

圖3 芽孢桿菌在含不同濃度亞硫酸鈉生長培養(yǎng)基中的生長情況

X1-1和S37菌株在含2 g/l亞硫酸鈉和不含亞硫酸鈉培養(yǎng)基中的生長曲線測定結(jié)果（見圖4）表明，亞硫酸鈉對X1-1菌株的生長無抑制作用（見圖4A），但對S37菌株的生長抑制作用顯著(圖4B)。

圖4 亞硫酸鈉對不同芽孢桿菌菌株生長的影響

2.4.3 X1-1菌株在不同濃度玉米蛋白粉基礎(chǔ)發(fā)酵培養(yǎng)基中的生長結(jié)果

枯草芽孢桿菌X1-1在含40 g/l和80 g/l的玉米蛋白粉基礎(chǔ)發(fā)酵培養(yǎng)基中的生長曲線如圖5所示。結(jié)果表明，當(dāng)培養(yǎng)基中玉米蛋白粉底物的濃度增加1倍后，X1-1的活菌數(shù)并無明顯增加，這可能與玉米蛋白粉中的硫化物含量有關(guān)。

圖5 X1-1在不同濃度的玉米蛋白粉培養(yǎng)基中的生長曲線

2.5 X1-1發(fā)酵玉米蛋白粉單因素發(fā)酵工藝優(yōu)化

2.5.1 培養(yǎng)基底物濃度對可溶性蛋白含量的影響

在初始發(fā)酵條件下，考察培養(yǎng)基底物濃度對培養(yǎng)液中可溶性蛋白含量的影響。結(jié)果表明（見圖6），當(dāng)培養(yǎng)基中玉米蛋白粉含量為4%時，發(fā)酵液的可溶性蛋白含量最高達(dá)31.4%，比發(fā)酵前培養(yǎng)基中可溶性蛋白含量提高了1.34倍。

圖6 底物濃度對可溶性蛋白含量的影響

2.5.2 接種量對可溶性蛋白含量的影響

試驗采用4%玉米蛋白粉含量的發(fā)酵培養(yǎng)基，其它發(fā)酵條件不變，研究不同接種量對發(fā)酵液可溶性蛋白含量的影響。結(jié)果表明（見圖7）。當(dāng)接種量為6%時，可溶性蛋白含量最高，達(dá)47.7%。

2.5.3 初始pH值對可溶性蛋白含量的影響

接種量為6%，其它發(fā)酵條件同上，試驗發(fā)酵培養(yǎng)基不同初始pH值對可溶性蛋白含量的影響。結(jié)果表明（圖8），培養(yǎng)基初始pH值對發(fā)酵液的可溶性蛋白含量有明顯影響，當(dāng)初始pH值為7.5時，發(fā)酵液可溶性蛋白含量最高，達(dá)64.3%。

圖7 接種量對可溶性蛋白含量的影響

圖8 初始pH值對可溶性蛋白含量的影響

2.5.4 搖瓶轉(zhuǎn)速對可溶性蛋白含量的影響

培養(yǎng)基的初始pH值為7.5，其它發(fā)酵條件同上，試驗不同搖瓶轉(zhuǎn)速對發(fā)酵液中可溶性蛋白含量的影響。結(jié)果表明（見圖9），當(dāng)搖瓶轉(zhuǎn)速為180 r/min時，可溶性蛋白含量最高，達(dá)68.7%。

2.5.5 發(fā)酵溫度對可溶性蛋白含量的影響

搖床轉(zhuǎn)速為180 r/min，其它發(fā)酵條件同上，試驗不同發(fā)酵溫度對可溶性蛋白含量的影響。結(jié)果表明（見圖10），當(dāng)發(fā)酵溫度為36℃時，可溶性蛋白含量最高達(dá)71.9%。

2.5.6 發(fā)酵時間對玉米蛋白粉可溶性蛋白含量的影響

發(fā)酵溫度為36℃，其他發(fā)酵條件同上，試驗不同發(fā)酵時間對可溶性蛋白含量的影響。結(jié)果表明（見圖11），當(dāng)發(fā)酵時間為72 h時，發(fā)酵液的可溶性蛋白含量最高，達(dá)75.2%，發(fā)酵前發(fā)酵液的可溶性蛋白含量達(dá)13.4%，發(fā)酵后可溶性蛋白含量提高了462.6%。

圖9 搖瓶轉(zhuǎn)速對可溶性蛋白含量的影響

圖10 發(fā)酵溫度對可溶性蛋白含量的影響

圖11 發(fā)酵時間對可溶性蛋白含量的影響

2.6 玉米蛋白粉發(fā)酵后理化與生化指標(biāo)的測定結(jié)果

2.6.1 噴霧干燥樣品與原料生化指標(biāo)的比較

采用優(yōu)化后的玉米蛋白粉發(fā)酵培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件，對X1-1發(fā)酵液進(jìn)行噴霧干燥，制備成發(fā)酵玉米蛋白粉。由表5可知，發(fā)酵后的玉米蛋白樣品蛋白酶活性達(dá)2 217 U/g，粗蛋白和小肽含量分別為69.7%和47.6%，比玉米蛋白粉原料分別提高了18.1%和534.7%。

2.6.2 玉米蛋白粉發(fā)酵前后的電泳圖譜

玉米蛋白粉中主要含有醇溶蛋白(68%)和谷蛋白(28%)，醇溶蛋白的分子量約為21～25 kD，疏水性強(qiáng)。谷蛋白亦不溶于水。如圖12所示，經(jīng)枯草芽孢桿菌X1-1發(fā)酵后的玉米蛋白粉中蛋白質(zhì)的分子量明顯降低，主要為分子量在17 kD以下的小分子蛋白，親水性明顯提高。

表5 玉米蛋白粉發(fā)酵前后生化指標(biāo)的對比

圖12 玉米蛋白粉發(fā)酵前后蛋白質(zhì)的SDS-PAGE電泳圖譜

3 討論

本研究篩選到1株在玉米蛋白粉培養(yǎng)基中蛋白酶活性高、能有效降解玉米蛋白粉菌株的枯草芽孢桿菌X1-1菌株，經(jīng)測定發(fā)現(xiàn)該菌株X1-1具有較強(qiáng)的抗亞硫酸鈉的能力和在玉米蛋白粉培養(yǎng)基中良好生長的能力，而不抗亞硫酸鈉的參比芽孢桿菌菌株在玉米蛋白粉培養(yǎng)基中的生長也明顯減弱。亞硫酸鈉是食品和飼料工業(yè)中常用的一種防腐劑,對許多細(xì)菌具有抑制作用[19-20]，由于玉米蛋白粉加工過程中使用了亞硫酸鈉，從而使得玉米蛋白粉原料中殘留有該物質(zhì)，因此，本研究篩選的X1-1菌株對玉米蛋白粉的高效降解能力與其抗亞硫酸鈉的能力有關(guān)。

目前已報道的玉米蛋白粉發(fā)酵工藝中，存在發(fā)酵底物濃度不高[21-22]或較高底物濃度下水解效率不高[23]等不足。本研究結(jié)果表明，當(dāng)發(fā)酵液中玉米蛋白粉發(fā)酵濃度由4%提高到8%時，細(xì)菌數(shù)量并無顯著增加，發(fā)酵液中的可溶性蛋白比例也明顯下降，這可能與發(fā)酵底物中含有較高濃度的硫化物從而對微生物的發(fā)酵產(chǎn)生抑制作用有關(guān)。因此，玉米蛋白粉中亞硫酸鈉的含量需要引起生產(chǎn)廠家的重視，在玉米蛋白粉加工過程中應(yīng)控制硫化物的添加量。此外，可通過選育抗硫化物的菌株用于發(fā)酵來提高底物發(fā)酵濃度。

目前，生產(chǎn)玉米活性肽的方法主要有酶解法和微生物發(fā)酵法[24-26]。本研究通過枯草芽孢桿菌X1-1液體發(fā)酵和噴霧干燥制備的發(fā)酵玉米蛋白粉樣品，經(jīng)感官品嘗無明顯苦味，而經(jīng)堿性蛋白酶水解的玉米蛋白粉溶液具有明顯的苦味[27]。因此，與酶解法相比，發(fā)酵法制備的玉米肽在口感上具有一定優(yōu)勢。有報道表明，微生物發(fā)酵可以減少玉米肽制備過程中的苦味,降低成本,將會成為玉米肽制備產(chǎn)業(yè)化發(fā)展的重要趨勢[28]。