正交試驗優(yōu)化余甘子配方顆粒的提取工藝研究Δ

魏彩彩，李雪利，郝 磊，馮玉康，張風林，霍保軍，李軍山，陳 鐘（神威藥業(yè)集團有限公司，石家莊 051430）

正交試驗優(yōu)化余甘子配方顆粒的提取工藝研究Δ

魏彩彩＊，李雪利，郝 磊，馮玉康，張風林，霍保軍，李軍山，陳 鐘（神威藥業(yè)集團有限公司，石家莊 051430）

目的：優(yōu)化余甘子配方顆粒的提取工藝。方法：以沒食子酸含量、出膏率的綜合評價結果為指標，以加水倍數、提取次數和提取時間為因素，設計正交試驗優(yōu)化余甘子配方顆粒的提取條件并進行驗證試驗。結果：余甘子配方顆粒最優(yōu)提取工藝為飲片加12倍水，提取2次，每次提取1 h。驗證試驗中出膏率平均值為30.44%（RSD＝2.07%，n＝3）、沒食子酸含量平均值為8.12%（RSD＝0.86%，n＝3）。結論：優(yōu)化的提取工藝穩(wěn)定，可為余甘子配方顆粒的標準化、規(guī)范化生產提供依據。

余甘子；配方顆粒；正交試驗；提取工藝

余甘子是大戟科植物Phyllanthus emblica L.的干燥成熟果實，是維吾爾醫(yī)藥中一味重要的治療胃肝病的常用藥材，主要產于印度、中國、緬甸、馬來西亞、巴基斯坦等地，在我國的廣東、云南、江西、廣西、福建、貴州、海南等省（區(qū)）均有分布[1-2]。余甘子富含多酚類、多糖、萜類、維生素、蛋白質、氨基酸和生物堿等成分[3-8]，具有清熱涼血、消食健胃、生津止渴、保肝解毒之功，用于血熱血瘀、消化不良、腸胃炎、腹瀉、腹脹、咳嗽、喉痛、肝病、口干等的治療[9]。

中藥配方顆粒以療效穩(wěn)定、攜帶方便及服用簡便等優(yōu)點備受歡迎[10]。本課題組擬將余甘子制成配方顆粒，在本試驗中采用正交試驗法，以沒食子酸含量、出膏率的綜合評價結果作為主要考察指標，優(yōu)化余甘子的提取工藝條件，為余甘子配方顆粒的生產提供依據。

1 材料

1.1 儀器

LC 20AT型高效液相色譜儀（日本島津公司）；CPA225D型電子天平[德國賽多利斯（上海）貿易有限公司]；DHG-9140A型電熱恒溫鼓風干燥箱（上海精宏實驗設備有限公司）；HH-S8型電熱恒溫水浴鍋（北京科偉永興儀器有限公司）。

1.2 藥材、對照品與試劑

余甘子飲片（河北安國中藥材市場，批號：151101，經河北省藥品檢驗所孫寶惠主任中藥師鑒定為大戟科植物余甘子Phyllanthus emblica L.的干燥成熟果實）；沒食子酸對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號：110831-201204，純度：89.9%）；甲醇、磷酸均為色譜純，水為純化水。

2 方法與結果

2.1 提取方法

取余甘子飲片100 g，加水浸泡一定時間，加熱回流提取一定時間，得提取液。

2.2 出膏率的測定

精密吸取余甘子提取液25 mL，置于干燥至恒質量的蒸發(fā)皿中，水浴蒸干；于105℃干燥3 h后置于干燥器中冷卻1 h，迅速稱質量，計算出膏率[（m1－m2）×V1/V2×m×100%]，其中m1為蒸發(fā)皿恒質量與干膏質量之和，m2為蒸發(fā)皿恒質量，m為藥材質量，V1為提取液總體積，V2為量取的提取液體積。

2.3 沒食子酸含量測定

2.3.1 色譜條件確定 參考文獻[9]確定色譜條件。色譜柱：Gemini C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：甲醇-0.2%磷酸溶液（5∶95）；流速：1.0 mL/min；柱溫：30℃；檢測波長：273 nm；進樣體積：10 μL。理論板數按沒食子酸峰計應不低于2 000。

2.3.2 對照品溶液制備 取沒食子酸對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL含0.25 mg的溶液，即得。

2.3.3 供試品溶液制備 精密吸取余甘子提取液1 mL至10 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.3.4 專屬性考察 分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液（正交試驗9號）及溶劑甲醇各10 μL，注入色譜儀，按上述色譜條件測定，結果其他物質對主成分測定未見干擾。色譜圖見圖1。

圖1 高效液相色譜圖Fig 1 HPLC chromatograms

2.3.5 線性關系考察 精密稱取沒食子酸對照品適量，加甲醇溶解并定容至25 mL，得對照品貯備液（0.43 mg/mL）；分別精密量取貯備液1、2、4、6、8 mL，用甲醇定容至10 mL，取包括貯備液在內的6個質量濃度的對照品溶液，分別精密吸取10 μL，注入色譜儀測定。以沒食子酸質量濃度（x）為橫坐標、峰面積（y）為縱坐標，繪制標準曲線，得回歸方程為y＝3 018.0x+22.4（r＝0.999 9，n＝6）。結果表明，沒食子酸檢測質量濃度線性范圍為0.043～0.344 mg/mL。

2.3.6 精密度考察 取“2.3.3”項下供試品溶液10 μL，重復進樣測定5次，計算得沒食子酸峰面積的RSD為0.24%（n＝5）。

2.3.7 重復性考察 精密吸取同一余甘子提取液1 mL共6份，按“2.3.3”項下操作，進樣測定，計算得沒食子酸峰面積的RSD為1.73%（n＝6）。

2.3.8 定量限與檢測限考察 將沒食子酸對照品溶液逐級稀釋成不同質量濃度的溶液進樣分析，測得其信噪比為10時的定量限為4.23μg/mL，信噪比為3時的檢測限為1.27μg/mL。

2.3.9 穩(wěn)定性考察 精密吸取同一余甘子提取液1 mL，按“2.3.3”項下操作，分別于放置0、1、8、24、48、72 h后進樣10 μL，計算得沒食子酸峰面積的RSD為0.49%（n＝6），表明供試品溶液在72 h內穩(wěn)定。

2.3.10 回收率考察 精密量取已知含量的余甘子提取液1 mL，分別加入沒食子酸對照品溶液2 mL，混勻，定容至10 mL，平行操作6份。分別進樣10 μL測定，結果平均回收率為100.04%（RSD＝0.57%，n＝6），表明該方法準確度良好。

2.3.11 樣品含量測定 分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液10 μL，注入色譜儀測定，計算沒食子酸的含量。

2.4 正交試驗優(yōu)化提取工藝

根據預試驗結果，確定飲片浸泡時間為0.5 h；另選擇可影響提取效果的加水倍數（A）、提取次數（B）和提取時間（C）為考察因素，以出膏率（W）和沒食子酸的含量（c）為考察指標（二者組成的綜合評價指標計算公式為Wi/Wmax×40%+ci/cmax×60%），采用L9（34）正交表進行試驗設計。因素與水平見表1，試驗設計與結果見表2，方差分析結果見表3。

表1 因素與水平Tab 1 Factors and levels

由表3可以看出，提取次數對綜合評價結果有顯著影響，對出膏率影響不顯著，而加水倍數和提取時間對各項指標影響均不顯著。提取次數是該提取工藝的重要影響因素，根據直觀分析得出提取2次最合適；另再結合直觀分析和成本選擇A3C2。故優(yōu)化后工藝為A3B2C2，即加入12倍水量提取2次，每次提取1 h。

2.5 驗證試驗

按照優(yōu)化后的提取工藝，分別取500 g余甘子飲片進行3次試驗，結果出膏率平均值為30.44%（RSD＝2.07%，n＝3）、沒食子酸含量平均值為8.12%（RSD＝0.86%，n＝3），表明優(yōu)化工藝穩(wěn)定、重現性好。

3 討論

表2 試驗設計與結果Tab 2 Design and results of test

表3 方差分析結果Tab 3 Results of variance analysis

沒食子酸為余甘子主要活性成分之一，其含量為2015年版《中國藥典》（一部）中余甘子藥材的評價指標之一[9]，故本試驗以沒食子酸含量作為質量控制指標優(yōu)選提取工藝的依據合理。

由正交試驗所得提取工藝經驗證試驗表明，該方法穩(wěn)定、重現性較好，故該工藝可為余甘子配方顆粒標準化、規(guī)范化生產工藝提供依據。

目前關于余甘子提取工藝的研究多為針對多糖類、多酚類等某一類成分的提取工藝的研究[11-13]，暫無關于余甘子配方顆粒提取工藝的研究報道。中藥配方顆粒是由單味中藥飲片經水提、濃縮、干燥、制粒而成的免煎煮、直接沖服的純中藥制劑，其是對傳統中藥飲片的補充，并可通過中藥現代化實現標準化生產[14]。余甘子配方顆粒提取液中含有多糖、沒食子酸、多酚類等多種成分，本次工藝優(yōu)選研究主要以出膏率和特征成分沒食子酸含量為指標進行優(yōu)化，暫時未設計能闡明提取條件變化對余甘子提取液其他成分影響的相關試驗。故本課題組下一步將繼續(xù)開展針對余甘子配方顆粒與標準煎劑相應指標的對比研究。

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Study on Optimization of the Extraction Technology for Phyllanthus emblica Formula Granule by Orthogonal Test

WEI Caicai，LI Xueli，HAO Lei，FENG Yukang，ZHANG Fenglin，HUO Baojun，LI Junshan，CHEN Zhong（Shineway Pharmaceutical Group Ltd.，Shijiazhuang 051430，China）

OBJECTIVE：To optimize the extraction technology for Phyllanthus emblica formula granules.METHODS：Using the comprehensive evaluation result of the content of gallic acid and paste rate as index，water amount，extraction times，extracting time as factors，orthogonal test was designed to optimize the extraction conditions of P.emblica formula granules.Validation test was conducted.RESULTS：The optimal extraction technology of P.emblica formula granule was as follows as 12-fold water，extracting for 2 times，1 hour each time.The validation results showed that the average paste rate was 30.44%（RSD＝2.07%，n＝3），and the average content of gallic acid was 8.12%（RSD＝0.86%，n＝3）.CONCLUSIONS：The optimized extraction technology is stable and can provide the basis for standardized production technology of P.emblica formula granule.

Phyllanthus emblica；Formula granules；Orthogonal test；Extraction process

R283；R284.2

A

1001-0408（2017）01-0061-03

2016-04-15

2016-06-08）

（編輯：劉 萍）

國家中醫(yī)藥管理局中醫(yī)藥科學技術研究專項課題（No.國中醫(yī)藥科2013ZX07）；河北省科技計劃項目（No.14272504D）

＊助理工程師。研究方向：藥物工藝及質量標準。電話：0311-88030066。E-mail：13831119281@163.com

DOI10.6039/j.issn.1001-0408.2017.01.16