HPLC法測定速效心痛滴丸中芍藥苷含量*

車 爽，周 軍，王 杰

(天津市藥品檢驗所，天津3000070)

藥品質(zhì)量與檢驗

HPLC法測定速效心痛滴丸中芍藥苷含量*

車 爽，周 軍，王 杰

(天津市藥品檢驗所，天津3000070)

目的:建立高效液相色譜法(HPLC)測定速效心痛滴丸中芍藥苷的含量。方法:采用phenomenex luna－C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)色譜柱;以乙腈－0.1%磷酸溶液(15∶85)為流動相;檢測波長為230 nm。結(jié)果:芍藥苷在0.031 027 2～3.102 72 μg范圍內(nèi)線性良好，平均回收率為99.46%，RSD為0.46%(n=6)。結(jié)論:本方法可用于速效心痛滴丸的質(zhì)量控制。

速效心痛滴丸，芍藥苷，HPLC

速效心痛滴丸由牡丹皮、川芎、冰片3味藥材組成，具有涼血活血，寬胸止痛之功效，用于治療血熱瘀阻，輕、中度胸痹心痛，煩熱口渴，舌紅。其中牡丹皮具有清熱涼血、活血、散瘀之功效，用以治血中伏火而除熱，是針對胸痹心痛偏熱證的病機(jī)而設(shè)，為君藥。芍藥苷是牡丹皮的主要有效成分之一。本研究建立HPLC法測定速效心痛滴丸中芍藥苷含量，結(jié)果準(zhǔn)確，重復(fù)性好，快速簡便，可作為速效心痛滴丸質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的定量方法。

1 儀器與試藥

日本SHIMADZU LC－20AD高效液相色譜儀，紫外檢測器，LC solution工作站。芍藥苷對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號110736－201035)，速效心痛滴丸分別由北京(批號029005、129006)及上海(批號20111007)兩家藥品生產(chǎn)企業(yè)提供。甲醇、乙腈(色譜純，天津市康科德科技有限公司)，磷酸(分析純，天津市贏達(dá)稀貴化學(xué)試劑廠)，水為去離子水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件色譜柱:phenomenex luna－C18(250 mm×4.6 mm，5μm);流動相:乙腈－0.1%磷酸溶液(15∶85);檢測波長:230 nm;流速:1.0 ml/min;進(jìn)樣量:10 μl;理論塔板數(shù)按芍藥苷峰計算應(yīng)不低于2 000。

2.2 溶液制備

2.2.1 對照品溶液的制備取芍藥苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 ml含30 μg的溶液，即得。

2.2.2 供試品溶液的制備取本品適量，研細(xì)，取0.5 g，精密稱定，精密加入50%甲醇25 ml，稱定重量，超聲提取45 min，放冷，再稱定重量，用50%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2.3 陰性樣品溶液的制備按處方取除牡丹皮的各味藥材，按制法制得樣品，再按“2.2.2”項下供試品溶液制備方法制得陰性樣品溶液。

2.3 陰性對照試驗分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液、陰性樣品溶液各10 μl，注入高效液相色譜儀中，按“2.1”項下色譜條件分析。結(jié)果陰性樣品在芍藥苷色譜峰對應(yīng)的保留時間無干擾。見圖1。

2.4 線性關(guān)系考查取芍藥苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成濃度為每1 ml中含芍藥苷分別為3.102 72、15.513 6、31.027 2、77.568、155.136和310.272 μg的對照品溶液。分別精密吸取10 μl，注入液相色譜儀，按“2.1”項下色譜條件分析，測定芍藥苷峰面積，以對照品進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo)，峰面積值為縱坐標(biāo)，求得回歸方程:Y=1 000 000 X－6 383.7 (r=1，n=6)。結(jié)果表明芍藥苷在0.031 027 2～3.102 72 μg范圍內(nèi)線性良好。

圖1 對照品(A)供試品(B)陰性樣品(C)HPLC色譜圖

2.5 進(jìn)樣精密度試驗取同一批(批號20111007)樣品適量，研細(xì)，取0.5 g，精密稱定，按照“2.2.2”項下供試品溶液制備操作，按“2.1”項下色譜條件分析，連續(xù)進(jìn)樣6次，測定樣品中芍藥苷峰面積，峰面積的RSD為0.07%，符合要求。

2.6 重復(fù)性試驗取同一批(批號20111007)樣品，共6份，研細(xì)，取0.5 g，精密稱定，按照“2.2.2”項下供試品溶液制備操作，按“2.1”項下色譜條件分析，測定每份樣品中芍藥苷含量。結(jié)果表明樣品中芍藥苷平均含量為1.354 6 mg/g，RSD為1.06%，符合要求。

2.7 穩(wěn)定性試驗取同一批(批號20111007)樣品，研細(xì)，取0.5 g，精密稱定，按照“2.2.2”項下供試品溶液制備操作，按“2.1”項下色譜條件分析，分別在0、2、4、8、12、18和24 h測定樣品中芍藥苷峰面積，測得峰面積值的RSD為1.19%。結(jié)果表明供試品溶液在24 h內(nèi)基本無變化，穩(wěn)定性良好。

2.8 回收率試驗取同一批(批號20111007)樣品，研細(xì)，取0.25 g，共6份，精密稱定，置錐形瓶中，分別精密加入含芍藥苷對照品的50%甲醇溶液(0.012 410 88 mg/ml)25 ml，再按照“2.2.2”項下供試品溶液制備操作，制得供回收率用供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件分析，計算回收率，結(jié)果顯示平均回收率為99.46%，RSD為0.46%，符合規(guī)定。見表1。

表1 加樣回收率試驗測定結(jié)果

2.9 樣品含量測定取3個批號的樣品，按照“2.2.2”項下供試品溶液制備操作，按“2.1”項下色譜條件測定，記錄色譜圖。按外標(biāo)法以峰面積計算樣品的含量。測得3批供試品中芍藥苷的平均含量分別為1.359 4、1.244 8和1.298 4 mg/g(n=2)。

3 討論

3.1 流動相的選擇高效液相法測定芍藥苷含量時，在《中國藥典》等現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)中采用有多種流動相系統(tǒng)。分別采用甲醇－水－冰醋酸(40∶60∶0.01)［1］、甲醇－0.1%磷酸緩沖鹽(pH為7.4)(21∶79)［2］、乙腈－0.1%磷酸水(14∶86)［3］與乙腈－0.1%磷酸水(15∶85)等流動相進(jìn)行實驗。結(jié)果以乙腈－0.1%磷酸水溶液(15∶85)為流動相，分離效果最佳，保留時間適中，故選用乙腈－0.1磷酸水溶液(15∶85)為流動相。

3.2 提取方法的選擇

3.2.1 提取溶劑取同一批(批號20111007)樣品，研細(xì)，取0.5 g 8份，精密稱定，分別精密加入稀乙醇、75%乙醇、50%甲醇和75%甲醇各25 ml，稱定重量，超聲處理45 min，放冷，再稱定重量，用各自的溶劑補(bǔ)足減失的重量，濾過，取續(xù)濾液，分別測定樣品中芍藥苷含量。結(jié)果表明，以50%甲醇作為溶劑時，樣品中芍藥苷含量較高，為1.380 1 mg/g，故本實驗采用50%甲醇作為提取溶劑。

3.2.2 提取方式取同一批(批號20111007)樣品，研細(xì)，取0.5 g 4份，精密稱定，精密加入50%甲醇25 ml，稱定重量，分別超聲處理或加熱回流45 min，放冷，稱定各自重量，用50%甲醇補(bǔ)足減失的重量，濾過，取續(xù)濾液，測定樣品中芍藥苷含量分別為1.324 6和1.324 7 mg/g(n=2)。采用超聲處理和加熱回流兩種提取方式，測定結(jié)果基本相同。但超聲處理較簡便，故選擇超聲處理為樣品的提取方式。

3.2.3 提取時間取同一批(批號20111007)樣品，研細(xì)，取0.5 g 8份，精密稱定，分別精密加入50%甲醇25 ml，稱定重量，分別超聲處理30、45、60和90 min，放冷，再稱定各自重量，用50%甲醇補(bǔ)足減失各自的重量，濾過，取續(xù)濾液，測定樣品中芍藥苷的含量分別為1.354 8、1.357 3、1.357 0和1.353 9 mg/g (n=2)，測定結(jié)果無明顯區(qū)別，但超聲45 min提取的結(jié)果含量最高，故選定超聲處理時間為45 min。

3.3 柱溫的選擇比較不同柱溫(30、35和40℃)條件下樣品的分離情況，結(jié)果樣品中的芍藥苷與雜質(zhì)峰均分離較好。

3.4 色譜柱的選擇取重現(xiàn)性試驗項下的供試品溶液，分別采用資生堂SPOLAR－C18柱、phenomenex luna－C18柱和Agilent ZORBAX SB－C18柱，均為(4.6 mm×250 mm，5 μm)，采用日本SHIMADZU LC－20AD高效液相色譜儀，進(jìn)樣測定。結(jié)果上述3種色譜柱其色譜峰峰型和分離度良好，測定結(jié)果均不受影響，證明本方法耐用性良好。

通過方法學(xué)考查建立了高效液相色譜法測定速效心痛滴丸中芍藥苷含量，本方法簡便易行，結(jié)果準(zhǔn)確，重復(fù)性好，可作為速效心痛滴丸質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的定量方法。

1鮑邢杰，宿樹蘭.對《中國藥典》2010版Ⅰ部中白芍中芍藥苷含量測定方法的探討［J］.時珍國醫(yī)國藥，2012，23(5):1309

2尹靜文，吳貴華，王杏林.HPLC法測定得生片中芍藥苷含量［J］.天津藥學(xué)，2013，25(1):11

3中國藥典［S］.一部.2010:96

Determination of paeoniflorin in Suxiaoxintong dropping pills by HPLC

Che Shuang，Zhou Jun，Wang Jie
(Tianjin Institute for Drug Control，Tianjin 300070)

Objective:To establish an HPLC method for the determination of paeoniflorin in Suxiaoxintong dropping pills.Methods:Analyses was carried out on phenomenex luna－C18column(250 mm×4.6 mm，5 μm)with acetonitrile－0.1%phosphoric acid as mobile phase，The detection wavelength was set at 230 nm.Result:The calibration curve of paeoniflorin was linear in the range of 0.031 027 2 to 3.10272 μg(r=1，n=6)，and average recovery was 99.46%，RSD was 0.46%.Conclusion:The method can be used for the quality control and determination of Suxiaoxintong dropping pills.

Suxiaoxintong dropping pills，paeoniflorin，HPLC

R927.2

A

1006-5687(2014)01-0005-03

2013-10-13