連翹苷脂質(zhì)體凝膠的制備工藝優(yōu)化及其質(zhì)量評價(jià)

中圖分類號：R943 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：1674-0033（2025）04-0058-08

Abstract：Using forsythin as the main raw material，forsythin liposomes were prepared by the film dispersion ultrasonic method，and thephysical and chemical propertiesof the prepared liposomes were explored.Furthermore，the forsythin liposomeswere developed into forsythin liposome gel.Taking the appearance，viscosity，spreadabilityand centrifugabilityof the gelas the evaluation indexes，based on the single-factor test，the preparation process of the forsythin liposome gel was optimized with the response surface method.The appearance of the forsythin liposome gel was evaluated by the visual inspection method，and the pH value of the forsythin liposome gel was determined by a pH meter.The centrifugal stability，heat resistance stability and cold resistance stabilityof the forsythin liposome gel were systematically investigated.The results showed that the forsythin liposomes presented arelatively regular spherical profile，with a particle size of（ 123.4±1.6） nm，a PDI of 0.220±0.019 ，and a Zeta potential of （-24.63±0.71）mV .The optimal process conditions for the forsythin liposome gel were determined as follows：the dosage of Carbopol-940 was 0.75% ，the dosage of triethanolamine was 1% ，and the dosage of glycerol was 10% . The prepared forsythin liposome gel was a smooth，shiny，uniform and stable semi-solid with moderate viscosity and extremely easy spreadability. The average pH value of the forsythin liposome gel was 6.9±0.05 ，which met the requirements for topical skin preparations.Meanwhile，the gel had good centrifugal stability，heat resistance stability and cold resistance stability.

Key words： phillyrin; liposome; gel; response surface method

連翹（Forsythiasuspensa）是木犀科，連翹屬的落葉灌木植物。連翹苷是連翹的果實(shí)或葉子中提取的一種天然糖苷木脂素類成分，具有抑菌、抗氧化、抗病毒和抗腫瘤等功效。將連翹苷開發(fā)成具有抑菌、消炎功效的經(jīng)皮給藥制劑，不僅可以避免肝臟的首過效應(yīng)，而且具有用藥簡便、安全、順應(yīng)性好等優(yōu)勢，其市場前景廣闊。然而連翹苷應(yīng)用于經(jīng)皮給藥制劑時(shí)通常存在著水溶性差、顏色較深、物理化學(xué)性質(zhì)不穩(wěn)定和生物利用度低等問題4。脂質(zhì)體技術(shù)為這些問題的解決提供了新思路。脂質(zhì)體是由卵磷脂和膽固醇等物質(zhì)組成的雙分子層所構(gòu)成的微小顆粒，其封閉的囊泡結(jié)構(gòu)可以很好地包載水溶性或脂溶性物質(zhì)。脂質(zhì)體具有靶向性強(qiáng)、緩釋效果好、毒副作用低等優(yōu)勢，被廣泛用于水溶性或疏水性藥物的遞送。然而將脂質(zhì)體溶液直接用于經(jīng)皮給藥時(shí)也存在一些不便，諸如流動(dòng)性過強(qiáng)、不易滯留在皮膚表面等0-12。脂質(zhì)體凝膠是一種由脂質(zhì)體和凝膠組成的復(fù)合物，具有生物相容性好、穩(wěn)定性強(qiáng)、可控釋藥、粘附性佳、易于涂抹、用藥方便等優(yōu)點(diǎn)，在經(jīng)皮給藥領(lǐng)域有著廣闊的應(yīng)用前景4。本文開發(fā)一種外用的具有抑菌、消炎功效的連翹苷脂質(zhì)體凝膠，并優(yōu)化其制備工藝，進(jìn)一步探討其質(zhì)量評價(jià)，以期為連翹苷在皮膚外用制劑領(lǐng)域的應(yīng)用提供參考。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1儀器

BeNano180Zeta納米粒度及Zeta電位分析儀（丹東百特儀器有限公司）、HT7800型透射電子顯微鏡（日立公司）PB-10型 pH 計(jì)（北京賽多利斯科學(xué)儀器有限公司）。

1.1.2藥品與試劑

連翹苷（純度 ?98% 和磷脂酰膽堿（純度 ? 90%） 均購于上海源葉生物科技有限公司，膽固醇（純度 595%） 和卡波姆-940（純度： 98% 均購于上海麥克林生化科技有限公司，三乙醇胺、甘油和無水乙醇均為分析純，均購于自天津市富宇精細(xì)化工有限公司。

1.2方法

1.2.1連翹苷脂質(zhì)體的制備及表征

采用薄膜分散-超聲法制備連翹苷脂質(zhì)體。稱取 37.5mg 連翹苷、 150mg 膽固醇和 37.5mg 磷脂酰膽堿，置于 15mL 無水乙醇中，超聲處理（功率為250W，頻率為 34kHz） 使連翹苷、膽固醇和磷脂酰膽堿完全溶解。采用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀將上述溶液于 33^°C 條件下旋轉(zhuǎn)成膜，再加入 20mL 純化水洗膜。隨后將混合物于 50^qC 條件下超聲振動(dòng) ^1h 即得連翹苷脂質(zhì)體溶液。

采用 BeNanol80Zeta 納米粒度及Zeta電位分析儀測定所制備連翹苷脂質(zhì)體的粒徑、多分散系數(shù)（PDD和電勢，平行測定三次，并取平均值。將連翹苷脂質(zhì)體稀釋后，用 0.2% 磷鎢酸溶液進(jìn)行負(fù)染，采用透射電子顯微鏡（TEM，80KV觀察其形貌。

1.2.2連翹苷脂質(zhì)體凝膠的制備

參考崔雪惠的方法，并稍作調(diào)整，采用冷凝法制備連翹苷脂質(zhì)體凝膠。稱取一定量凝膠基質(zhì)卡波姆-940，將其均勻分散在適量純化水中，待其充分溶脹，攪拌下往其中添加適量甘油，隨后添加適量三乙醇胺調(diào)節(jié)其 pH 值為6＼～7，得到空白凝膠。將所制備的連翹苷脂質(zhì)體與空白凝膠（1：1）混合，攪拌均勻，即得連翹苷脂質(zhì)體凝膠。

1.3單因素試驗(yàn)

參考蘇婷等的方法，以連翹苷脂質(zhì)體凝膠的外觀、粘稠度、鋪展性、離心性的綜合評分為評價(jià)指標(biāo)（評分標(biāo)準(zhǔn)見表1），對攪拌溫度、卡波姆-940用量、三乙醇胺用量和甘油用量進(jìn)行單因素考察，篩選出對連翹苷脂質(zhì)體凝膠制備過程影響較大的因素。

1.3.1攪拌溫度的考察

固定卡波姆-940用量 1% 、甘油用量 10% 、三乙醇胺用量 1% 和純化水用量 10mL， 將上述混合物分別置于 25^°C，35^°C，45^°C，55^°C，65^°C 進(jìn)行攪拌，考察攪拌溫度對連翹苷脂質(zhì)體凝膠的外觀（y₁） 、粘稠度 （y₂） 、鋪展性 （y₃） 和離心性 （y₄） 的影響。

1.3.2卡波姆-940用量的考察

固定甘油用量 10% 、三乙醇胺用量 1% 和純化水用量 10mL ，分別設(shè)定卡波姆-940用量為 0.25% ， 0.50% ， 0.75% ， 1.00% ， 1.25% ，考察卡波姆-940用量對連翹苷脂質(zhì)體凝膠的外觀（y₁） 、粘稠度 （y₂） 、鋪展性 （y₃） 和離心性 （y₄） 的影響。

1.3.3三乙醇胺用量的考察

固定卡波姆-940用量 1% 、甘油用量 10% 和純化水用量 10mL ，設(shè)定三乙醇胺用量分別為0.2%，0.6%，1.0%，1.4%，1.8% ，考察三乙醇胺用量對連翹苷脂質(zhì)體凝膠的外觀 （y₁） 、粘稠度 （y₂） ！鋪展性 （y₃） 和離心性 （y₄） 的影響。

1.3.4甘油用量的考察

固定卡波姆-940用量 1% 、三乙醇胺用量1% 和純化水用量 10mL ，分別設(shè)定甘油用量為5.0% 7.5% ， 10.0% ， 12.5% ， 15.0% ，考察甘油用量對連翹苷脂質(zhì)體凝膠的外觀 （y₁） 、粘稠度 （y₂） 、鋪展性 （y₃） 和離心性 （y₄） 的影響。

1.4響應(yīng)面試驗(yàn)

根據(jù)單因素試驗(yàn)結(jié)果，選擇對連翹苷脂質(zhì)體凝膠影響較大的三個(gè)因素（卡波姆-940用量、三乙醇胺用量和甘油用量）進(jìn)行考察，以連翹苷脂質(zhì)體凝膠綜合評分為響應(yīng)值 （Y） ，采用Design-Expert.V8.0.6軟件設(shè)計(jì)，開展三因素三水平試驗(yàn)，以確定連翹苷脂質(zhì)體凝膠的最優(yōu)條件，因素水平見表2。

1.5連翹苷脂質(zhì)體凝膠質(zhì)量評價(jià)

1.5.1外觀及性狀

取所制備的連翹苷脂質(zhì)體凝膠于黑色背景下觀察。

1.5.2pH 值測定

將所制備的三批連翹苷脂質(zhì)體凝膠各稱取1g ，分別加入 10mL 純化水進(jìn)行超聲處理，完全溶解后，測定其平均 pH 值。

1.5.3鋪展性及清除性

將所制備的三批連翹苷脂質(zhì)體凝膠均勻涂抹于手心，觀察連翹苷脂質(zhì)體凝膠的鋪展性能，隨后用水清洗 30s ，觀察能否完全清洗干凈。

1.6連翹苷脂質(zhì)體凝膠穩(wěn)定性考察

1.6.1離心穩(wěn)定性

將所制備的三批連翹苷脂質(zhì)體凝膠各稱取 2g ，以 6000r/min 離心 15min ，觀察連翹苷脂質(zhì)

體凝膠是否出現(xiàn)分層現(xiàn)象、顏色是否發(fā)生變化。

1.6.2耐熱穩(wěn)定性

將所制備的三批連翹苷脂質(zhì)體凝膠各稱取2Δg ，于 60^°C 避光保存 10d ，觀察連翹苷脂質(zhì)體凝膠是否出現(xiàn)分層現(xiàn)象、顏色是否發(fā)生變化。

1.6.3耐寒穩(wěn)定性

將所制備的三批連翹苷脂質(zhì)體凝膠各稱取2g ，于 -20^°C 避光保存 10d ，觀察凝膠是否出現(xiàn)分層現(xiàn)象、顏色是否發(fā)生變化。

2結(jié)果與分析

2.1連翹苷脂質(zhì)體的理化性質(zhì)

如圖1所示，所制備的連翹苷脂質(zhì)體粒徑為 （123.4±1.6）nm， PDI為 0.220±0.019 ，粒徑分布較均勻；該連翹苷脂質(zhì)體的Zeta電位為（-24.63±0.71）mV 。透射電子顯微鏡（TEM）結(jié)果顯示，連翹苷脂質(zhì)體具有較規(guī)則的球形輪廓，粒徑約為 100nm 。相較于納米粒度分析儀所測粒徑，TEM所測得的粒徑偏小，這可能是由于TEM制樣過程中的干燥處理致使脂質(zhì)體的外殼坍塌，進(jìn)而導(dǎo)致其粒徑測定值偏小。

2.2各單因素對連翹苷脂質(zhì)體凝膠的影響

2.2.1攪拌溫度的考察

從表3可以看出，溫度對連翹苷脂質(zhì)體凝膠的外觀、粘稠度、鋪展性和離心性影響較小，因此選擇在常溫下進(jìn)行攪拌。

2.2.2卡波姆-940用量的考察

從表4可以看出，當(dāng)卡波姆-940用量為0.25% 時(shí)，連翹苷脂質(zhì)體凝膠粘稠度較稀?？ú?940用量為 1.25% ，連翹苷脂質(zhì)體凝膠粘稠度偏稠。卡波姆-940用量對連翹苷脂質(zhì)體凝膠的粘稠度影響較大，因此卡波姆-940用量宜在0.5%～1.0% 。

2.2.3三乙醇胺用量的考察

從表5可以看出，當(dāng)三乙醇胺用量為 0.2% 時(shí)，連翹苷脂質(zhì)體凝膠易鋪展，但比較稀。當(dāng)三乙醇胺用量為 1.8% 時(shí)，連翹苷脂質(zhì)體凝膠略稠，較難鋪展。當(dāng)三乙醇胺用量為 0.6%～1.4% 時(shí)，連翹苷脂質(zhì)體凝膠粘稠度適中，易于鋪展，因此，三乙醇胺用量選擇 0.6%～1.4% 較為適宜。

2.2.4甘油用量的考察

從表6可以看出，甘油用量為 5% 時(shí)，連翹苷脂質(zhì)體凝膠較難鋪展。甘油用量為 15% 時(shí)，連翹苷脂質(zhì)

體凝膠易鋪展，但粘玻璃棒。甘油用量為 7.5%～12.5% 時(shí)，連翹苷脂質(zhì)體凝膠極易鋪展且不粘玻璃棒，因此，甘油用量選擇 7.5%～12.5% 較為適宜。

2.3響應(yīng)面法優(yōu)化連翹苷脂質(zhì)體凝膠的制備工藝

2.3.1模型擬合

采用Design-Expert.V8.0.6軟件對表7中數(shù)據(jù)進(jìn)行擬合，得到二次多元回歸方程

Y=9.00+0.79A+0.17B+1.46C+0.025AB- 0.65AC+0.025BC-1.70A²-2.33B²+0.50C² 。該回歸模型的 F=50.44 ， Plt;0.000 1 ，說明此模型可靠。

表8是連翹苷脂質(zhì)體凝膠工藝優(yōu)化響應(yīng)面試驗(yàn)回歸模型方差分析。從表8可以看出，失擬項(xiàng)P=0.078 2gt;0.05 ，失擬項(xiàng)不顯著，說明該模型對數(shù)據(jù)擬合較好，誤差較小。 表明試驗(yàn)結(jié)果有 96.53% 受試驗(yàn)因素影響，模型試驗(yàn)的誤差小，預(yù)測值和實(shí)測值擬合較好。

使用Design-Expert.V8.0.6軟件繪制。響應(yīng)曲面圖，兩兩因素對連翹苷脂質(zhì)體凝膠綜合評分的影響如圖2所示。響應(yīng)曲面圖坡度越陡，則該因素對連翹苷脂質(zhì)體凝膠綜合評分的影響越大。從響應(yīng)曲面圖中可以看出，圖2（b）是最陡峭的，所以卡波姆-940用量（A）與甘油用量（C）對連翹苷脂質(zhì)體凝膠綜合評分的影響最大，與方差分析結(jié)果一致。

2.3.2連翹苷脂質(zhì)體凝膠制備工藝響應(yīng)面優(yōu)化及 驗(yàn)證

由Box-Behnken響應(yīng)面法確定的最佳工藝條件：卡波姆-940用量為 0.75% ，三乙醇胺用量為 1% ，甘油用量為 10% 。采用最佳工藝條件制備三批連翹苷脂質(zhì)體凝膠，并對其進(jìn)行綜合評分，分別為 9.1，9.0，9.1 分，其平均值為9.07分，與預(yù)測值8.98分相比，誤差小于 5% ，表明該模型可信度較高[1。因此該模型可以用于對連翹苷脂質(zhì)體凝膠工藝條件優(yōu)化的分析與預(yù)測。

2.4連翹苷脂質(zhì)體凝膠質(zhì)量評價(jià)

如圖3所示，連翹苷脂質(zhì)體凝膠呈米白色、表面光滑、有光澤的粘稠狀半固體制劑。平均 pH 值為 6.90±0.05 ，符合《中華人民共和國藥典》2020年版四部的規(guī)定，且符合人體皮膚的 pH 值，不會(huì)對皮膚產(chǎn)生刺激性。此外，連翹苷脂質(zhì)體凝膠均易鋪展，并能在 30s 內(nèi)完全洗凈，具有良好的鋪展性及清除性。

2.5連翹苷脂質(zhì)體凝膠穩(wěn)定性考察

如圖4所示，連翹苷脂質(zhì)體凝膠分別經(jīng)離心處理、高溫處理和低溫處理后，仍能保持良好的均勻性，未出現(xiàn)分層現(xiàn)象，其顏色也未發(fā)生變化。結(jié)果表明，連翹苷脂質(zhì)體凝膠不僅具有良好的離心穩(wěn)定性，而且具備良好的耐熱穩(wěn)定性和耐寒穩(wěn)定性。

3討論與結(jié)論

隨著對連翹資源的開發(fā)利用不斷深入，連翹在經(jīng)皮給藥領(lǐng)域得到了廣泛應(yīng)用。目前在連翹相關(guān)的經(jīng)皮給藥制劑的制備過程中，通常是將連翹提取物作為添加劑直接加入到相應(yīng)的基質(zhì)中[20-2I]，連翹提取物存在的水溶性差、穩(wěn)定性差及顏色深、氣味大等問題并沒有得到有效的改善。本研究利用薄膜分散-超聲法制備了連翹苷脂質(zhì)體，在一定程度上解決了連翹苷存在的上述問題，并將其進(jìn)一步開發(fā)成連翹苷脂質(zhì)體凝膠，又解決了脂質(zhì)體溶液直接用于經(jīng)皮給藥時(shí)的不便。

本課題組前期考察了連翹苷脂質(zhì)體的抑菌活性和體外透皮性能。研究發(fā)現(xiàn)，連翹苷脂質(zhì)體比連翹苷混懸物有著更好的抑菌效果和透皮性能。這為連翹苷脂質(zhì)體凝膠的開發(fā)奠定了基礎(chǔ)。

本研究通過薄膜分散-超聲法將連翹苷脂質(zhì)體溶液與空白凝膠混合攪拌制備了連翹苷脂質(zhì)體凝膠，制備方法簡單易行。為了篩選合適的凝膠基質(zhì)，綜合評價(jià)了卡波姆-940、羥丙甲纖維素（HPMC和羧甲基纖維素鈉（CMC-Na）這三種基質(zhì)的外觀、延展性、粘稠度和離心性，最終選擇以卡波姆-940為凝膠基質(zhì)來制備連翹苷脂質(zhì)體凝膠。由于正常皮膚表面pH值為5.0＼～7.0，需要將凝膠調(diào)節(jié)至中性?？紤]到無機(jī)堿和有機(jī)堿均可用于調(diào)節(jié)連翹苷脂質(zhì)體凝膠pH值，而三乙醇胺既能降低連翹苷脂質(zhì)體凝膠刺激性，又不易引發(fā)副反應(yīng)，因此選用三乙醇胺作為pH調(diào)節(jié)劑。同時(shí)，添加甘油作為保濕劑，以增強(qiáng)治療效果。

本研究制備的連翹苷脂質(zhì)體凝膠呈米白色，具備良好的鋪展性、粘稠度及穩(wěn)定性，展現(xiàn)出廣闊的開發(fā)與應(yīng)用前景。后續(xù)本課題組將圍繞該凝膠的皮膚刺激性、抑菌活性、抗炎活性等開展深入藥理學(xué)研究，為其臨床應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。

參考文獻(xiàn)：

[1]史正文，郝晶晶，甄會(huì)賢，等.連翹活性成分及其抗氧化和抑菌性比較分析[J].分子植物育種，2023，21（9）：3057-3064.

[2]郭健敏，富力，秦麗莉，等.連翹苷體內(nèi)外抗病毒及解熱作用機(jī)制[J].中國藥理學(xué)通報(bào)，2022，38（8）：1170-1175.

[3]李紹霄，李邦亮.連翹苷對體內(nèi)外鼻咽癌血管新生的影響[J].廣州中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2023，40（3）：693-700.

[4]燕文勝，張亮亮，李煥洋，等.化學(xué)改性對連翹不溶性膳食纖維理化性質(zhì)、結(jié)構(gòu)及乳化穩(wěn)定性的影響[J].食品工業(yè)科技，2022，43（19）：61-68.

[5]銀曉晶，王淑君，葉田田.薄膜分散法制備SN-38脂質(zhì)體及質(zhì)量評價(jià)[J].當(dāng)代化工，2023，52（4）：872-877.

[6]孫聚魁，曹金娜.雷帕霉素脂質(zhì)體的處方及工藝研究[J].上海醫(yī)藥，2022，43（23）：79-82.

[7]SU QJ，PANJQ， WANG C X， et al. Curcumin and baicalinco-loaded nanoliposomes for synergistic treatment of non-small cell lung cancer[J].Pharmaceutics，2O24，16（8）：973-990.

[8]NIZAM N， TANER G，CAGAL M M. Nanoliposomalsystem for augmented antibacterial and antiproliferativeefficacy of Melissa officinalisL.extract[J].ToxicologyResearch，2024，13（6）：1-10.

[9]ASHRAFW，ALI K， SHARIFHR， et al. Preparation，characterization，and controlledrelease of fenugreekseed extract-loaded nanoliposomes with chitosan surfacedecoration[J].Food and Bioprocess Technology，2025，18818-835.

[10]李康，何羨霞，賀智玲，等.土槿乙酸脂質(zhì)體凝膠的制備、質(zhì)量評價(jià)及對特應(yīng)性皮炎小鼠的治療作用[J].中國新藥雜志，2022，31（16）：1623-1630.

[11]李雪梅，楊丹，周雪.白花蛇舌草脂質(zhì)體凝膠的制備工藝研究[J].信息記錄材料，2022，23（3）：26-29.

[12] ELKHOURY K， KOAK P， KANG A， et al. Engineeringsmart targeting nanovesicles and their combination withhydrogels for controlled drug delivery[J].Pharmaceutics，2020，12（9）：849-872.

[13]王佳輝，陳麟，孫平，等.黃芩苷脂質(zhì)體凝膠制備、質(zhì)量評價(jià)及其對痤瘡的藥效學(xué)評價(jià)[J].中草藥，2021，52（16）：4860-4872.

[14]竇晨，潘蕊，趙聲蘭，等.葡萄籽原花青素柔質(zhì)體凝膠劑的制備工藝研究[J].中南藥學(xué)，2022，22（2）：315-322.

[15]盧玉潔，周珊珊，單鈺君，等.全緣千里光堿脂質(zhì)體及其凝膠劑的皮膚滲透研究與機(jī)制探討[J.中草藥，2023，54（11）：3459-3467.

[16]呂菊芳，于藝斌，謝巖，等.黃芪甲苷脂質(zhì)體原位凝膠眼部給藥系統(tǒng)的研究[J].中南藥學(xué)，2024，22（7）：1712-1717.

[17]崔雪惠.歐前胡素柔性脂質(zhì)體凝膠的制備及透皮機(jī)制研究[D].廣州：廣東藥科大學(xué)，2020：19-20.

[18]蘇婷，趙燕，畢野，等.烏拉草總黃酮脂質(zhì)體凝膠劑的制備工藝研究[J].藥物評價(jià)研究，2021，44（5）：990-996.

[19]劉建清，林水森，謝志新，等.基于星點(diǎn)設(shè)計(jì)-響應(yīng)面法優(yōu)化雙柏凝膠貼膏劑基質(zhì)處方[J].安徽醫(yī)藥，2024，28（9）：1737-1740，1909.

[20]王小青.銀花連翹水凝膠制劑的應(yīng)用研究[D].西安：西北大學(xué)，2011：30-33.

[21]付信寶.銀翹抗感鼻用凝膠的研制[D].濟(jì)南：山東中醫(yī)藥大學(xué)，2012：42-46.

（責(zé)任編輯：李堆淑）