青貯中植物乳桿菌R1的分離鑒定及其對青貯發(fā)酵品質的影響

中圖分類號：S816.53文獻標志碼：A文章編號：1001-8395（2025）05-0683-10

doi：10.3969/j.issn.1001-8395.2025.05.008

青貯飼料是指將新鮮青飼料切碎后，在真空、密封的環(huán)境下經乳酸菌等發(fā)酵得到的一種柔軟多汁、營養(yǎng)豐富的粗飼料[1].青貯過程涉及復雜的微生物相互作用，乳酸菌在其中起到至關重要的作用[2]，它們通過發(fā)酵過程，將青貯飼料中的碳水化合物轉化為有機酸（乳酸、丙酸等），從而降低pH值，抑制有害微生物的生長，可最大限度地確保飼料的質量與安全[3].Soundharrajan等[4]的研究表明乳酸菌在發(fā)酵過程中能夠促進良好的酸化，防止有害細菌（如克羅斯氏菌、沙門氏菌等）的生長，并且減少了有毒副產物的生成.琚澤亮[5]等通過對燕麥草中乳酸菌的篩選研究，找到了能夠在青藏高原寒冷的環(huán)境中進行有效發(fā)酵，提升燕麥草青貯飼料的發(fā)酵效果和質量的菌株，這些菌株不僅能有效抑制病原菌的生長，還能優(yōu)化青貯飼料中的有益微生物群落，增強青貯飼料的營養(yǎng)成分.因此，乳酸菌在青貯飼料發(fā)酵中起到了關鍵作用，開發(fā)合適的乳酸菌劑對提升青貯飼料品質具有重要的意義.Silva等[將熱帶地區(qū)苜蓿青貯飼料中分離的野生乳酸菌菌株與商業(yè)接種劑對比，研究其對首蓿青貯飼料營養(yǎng)和發(fā)酵特性的影響，發(fā)現野生型乳酸菌更具有作為苜蓿青貯飼料生產的孕育劑的潛力；Ennahar等[7]發(fā)現Lactiplantibacillusplantarum在水稻青貯飼料中占主導地位；而Ni等8發(fā)現Pediococcuspentosaceus占主導地位;說明由于區(qū)域性環(huán)境因素、牧草種類不同等影響其發(fā)酵過程和優(yōu)勢乳酸菌也存在差異[9-10]，因此開發(fā)適合本地化生產的乳酸菌具有重要的意義.

四川省涼山彝族自治州牧草資源豐富，但多數地區(qū)處在海拔較高的高寒山區(qū)，導致冬春季節(jié)草料缺乏，是影響涼山州畜牧業(yè)發(fā)展的主要限制因素[1].青貯能有效地保存飼草青鮮狀態(tài)，而且受環(huán)境氣候因素影響較小，可以為高寒山區(qū)的家畜在冬春季缺乏青綠牧草時提供青綠多汁的飼料，同時也顯著提升了牧草的營養(yǎng)價值、風味、適口性等品質，從而使家畜生產量保持較高的水平[12].目前涼山地區(qū)的青貯飼料發(fā)酵也多采用自然發(fā)酵來實現，但自然發(fā)酵效率相對較低，因此對涼山州本地的青貯飼料中優(yōu)良菌株進行挖掘和培育，制備適合本地區(qū)粗飼料資源青貯發(fā)酵的微生物菌劑具有重要的研究價值.

本研究旨在從涼山州本地產量較大的蕎麥秸稈、全株玉米和紫花苜蓿為原料發(fā)酵后的青貯飼料中分離篩選出具有優(yōu)良特性的乳酸菌，開發(fā)一種適合涼山州本地青貯發(fā)酵的微生物添加劑.對于開發(fā)更多適宜應用于當地青貯飼料的優(yōu)質青貯飼料乳酸菌復合菌劑具有研究意義和實用價值，

1試驗材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1樣品采集本試驗的原料包括蕎麥秸稈、全株玉米和紫花苜蓿，均于2023年9月10日采自四川省涼山彝族自治州市鹽源縣.蕎麥秸稈、青貯玉米和紫花苜蓿按14：21：15的比例混合進行混合發(fā)酵60d，取發(fā)酵后的青貯飼料進行試驗.

1.1.2培養(yǎng)基MRS 液體培養(yǎng)基：胰蛋白肺10g/L， 牛肉粉 10g/L 、酵母粉 4g/L， 檸檬酸三銨2g/L 、乙酸鈉 5‰ 、硫酸鎂 硫酸錳0.05g/L 、磷酸氫二鉀 2g/L 葡萄糖 20g/L 、吐溫80 1mL/L ，調節(jié) ΔpH 值至 5.7，115°C 滅菌 30min

MRS- CaCO₃ 固體培養(yǎng)基：胰蛋白陳 牛 肉粉 10g/L 、酵母粉 4g/L， 檸檬酸三銨 2g/L 乙酸 鈉 5g/L 、硫酸鎂 0.2g/L. 硫酸錳 0.05g/L， 磷酸氫 二鉀 2g/L 葡萄糖 20g/L 、吐溫 80 1mLL 質量分 數 2% 瓊脂，調節(jié) pH 值至 5.7，115°C 滅菌 30min 加入干熱滅菌的碳酸鈣 10g/L.

1.1.3主要試劑胰蛋白陳、牛膽汁鹽購于上海源葉生物科技有限公司；牛肉粉、酵母膏、檸檬酸三銨、瓊脂粉購于北京索萊寶科技有限公司；乙酸鈉購于成都市科隆化學品有限公司；硫酸鎂、葡萄糖、吐溫80、碳酸鈣、氯化鈉購于成都市科龍化工試劑廠；硫酸錳、硫酸錳購于成都金山化學試劑有限公司.

1.1. 4 主要設備 高壓蒸汽滅菌鍋，型號

GT54TW，致微（廈門）儀器有限公司；生化培養(yǎng)箱，型號SN-SPX-50B，上海尚普儀器設備有限公司；紫外分光光度計，型號L6，上海佑科儀器儀表有限公司；pH計，型號：METTLERTOLEDO，上海佑科儀器儀表有限公司；酶標儀，型號SpectraMax190，美谷分子儀器（上海）有限公司.

1.2 試驗方法

1.2.1菌株分離、初篩及保藏選取青貯樣品20g ，裝入錐形瓶中，并加入 180mL 無菌生理鹽水，于 200r/min，37° 條件下振蕩 ¹h 后，稀釋懸浮液，取 1mL 懸浮液，加人 9mL 無菌生理鹽水，即為稀釋 的懸浮液，繼續(xù)按梯度稀釋到 10^-3 10^-4，10^-5，10^-6，10^-7 濃度.選取3個梯度（ 10^-5 、 ）的懸浮液取 100μL 涂布于MRS 固體培養(yǎng)基上，重復3次.在恒溫培養(yǎng)箱中 37°C 培養(yǎng)48～72h 后根據菌落特征進行分離純化2次.直接肉眼觀察菌落形態(tài)特征，取單菌落進行革蘭染色鏡檢以及過氧化氫酶試驗，將革蘭染色陽性和過氧化氫酶試驗陰性的菌株進行編號，挑取單菌落接種于20mL MRS液體培養(yǎng)基 37°C 厭氧培養(yǎng) 48～72h 于體積分數 80% 的甘油生理鹽水中保存， -80^°C 條件下保存.

1.2.2優(yōu)質菌株復篩將初步篩選得到的菌株接種于 MRS 液體培養(yǎng)基， 37^qC 培養(yǎng) 36h ，測定 0D₆₀₀ 值以及 pH 值，以 0D₆₀₀ 值作為橫坐標，以 ΔpH 值作為縱坐標，繪制散點圖，選擇 OD₆₀₀gt;1.8，pHlt;3.5 的菌株進行后續(xù)試驗.

1.2.3菌株DNA的提取及鑒定將復篩得到的菌株接種于MRS培養(yǎng)基中于 37^°C 培養(yǎng) 24h 后，利用北京索萊寶科技有限公司生產的細菌基因組DNA提取試劑盒（BacterialGenomicDNAExtractionKit）提取基因組DNA.采用的通用引物（27F：AGAGTTTGATCCTGGCTCAG，1492R：GGCTACCTT-GTTACGACTT）進行擴增.送至北京擎科新業(yè)生物技術有限公司進行測序，將測序的16SrRNA序列提交至NCBI中進行同源性序列比對分析，以確定菌株的類別，根據比對結果利用MEGA10.1.8軟件用鄰接法來構建該菌的進化樹

1.2.4生化特征檢測根據廣東環(huán)凱微生物科技有限公司生產的細菌新型生化鑒定管的使用說明，分別測定菌株對葡萄糖（產酸產氣）乳糖、麥芽糖、甘露醇、蔗糖、靛基質、MR（甲基紅）、VP、西蒙氏、尿素、硫化氫、靛基質等的作用

1.2.5生長曲線及產酸速率曲線的測定將菌株按體積分數 1% 接種量接種到MRS液體培養(yǎng)基中，每組設置3個重復，于 37^°C 培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 36h ，每隔 ^2h 取樣測定 0D₆₀₀ 值及 pH 值，以培養(yǎng)時間作為橫坐標， 0D₆₀₀ 值和 ΔpH 值作為縱坐標，繪制生長曲線圖及產酸速率曲線，根據曲線的變化趨勢來推測菌株的生長狀況和產酸能力.

1.2.6不同培養(yǎng)溫度生長試驗將菌株按體積分數 1% 接種量接種于MRS液體培養(yǎng)基中，分別于25^°C，30^°C，37^°C，40^°C 培養(yǎng) 24h ，每組設置3個重復，測定各菌液的 0D₆₀₀ 值，以培養(yǎng)溫度作為橫坐標， 0D₆₀₀ 值作為縱坐標繪制柱狀圖.

1.2.7菌株的抗性測定1）耐酸堿性試驗.將菌株按體積分數 1% 接種量分別接種至不同 pH 值的MRS液體培養(yǎng)基中， pH 值分別為3.0、3.5、4.0、4.5、5、0、5、5、6.0、6.5、7.0、7.5、 ，每組設置3個重復，于 37^°C 培養(yǎng) 24h 后測定各菌液的 0D₆₀₀ 值，以培養(yǎng)基 pH 值作為橫坐標， 0D₆₀₀ 值作為縱坐標繪制柱狀圖.

2）耐鹽性試驗.將菌株按體積分數 1% 的量分別接種至6種不同 NaCl 濃度的MRS液體培養(yǎng)基中， NaCl 質量分數分別為 0%.2%.4%.6%.8% 、10% ，每組設置3個重復，于 37^°C 培養(yǎng) 24h 后測定各樣品菌液的 0D₆₀₀ 值，以培養(yǎng)基NaCl濃度作為橫坐標， 0D₆₀₀ 值為縱坐標繪制柱狀圖.

3）耐膽汁酸鹽試驗.根據薛銀剛[13的方法進行耐酸和耐膽汁鹽的組合試驗，用混合酸將MRS培養(yǎng)基 pH 分別調節(jié)成2.0及3.0，各加人質量分數 （0.2%0.3%0.4%0.5% 的牛膽汁鹽，以MRS培養(yǎng)基為空白對照.在不同的培養(yǎng)基中，按體積分數 1% 的接種量接種，置 37^°C 培養(yǎng)箱中分別培養(yǎng)1、2、3、4、5、6h ，以 0h 為對照，測定 0D₆₀₀ 值.

1.2.8 添加篩選菌株進行青貯飼料改進試驗將蕎麥秸稈、青貯玉米和紫花苜蓿按14：21：15的比例混合，實驗組按 1.0×10⁶cfu/g 的接種量添加菌株，對照組加入同等比例的無菌水，混合均勻，真空包裝，于室溫、避光條件下發(fā)酵 30d ，測定青貯飼料各項指標.

1.3統計方法與數據處理采用Excel和 SPSS24.0軟件對數據進行分析.使用SPSS24.0軟件單因素方差分析及LSD檢驗（ Plt;0.05 ）對該研究數據進行統計分析.采用GraphPadPrism8.0和Excel軟件進行圖像處理，

2 結果與分析

2.1菌株的分離與初篩革蘭染色鏡檢以及過氧化氫酶試驗結果表示，分離得到12株菌株皆為革蘭染色陽性、過氧化氫酶試驗陰性.青貯中分離乳酸菌菌株的形態(tài)學特征和鏡檢如圖1，所有菌株細胞均無芽孢且不運動，菌落在MRS培養(yǎng)基上呈大小不一的圓形凸起，表面濕潤光滑，顏色多為乳白色.

2.2菌株的復篩將初篩得到12 株乳酸菌于37^°C 培養(yǎng) ^36h 后，測定 ΔOD₆₀₀ 值以及 ΔpH 值，如圖2，其中有1株菌株的菌體密度最高（ OD₆₀₀=1.8 ）且 pH 值最低（ pH=3.5 ），為本研究篩選得到的最佳菌株，將其命名為R1并用于后續(xù)的研究，

2.3R1菌株16SrRNA序列分析及系統進化樹的建構對R1菌株進行16SrRNA測序，將測序序列提交至NCBI數據庫中的BLAST模塊進行序列比對，結果發(fā)現其與植物乳桿菌（Lactiplantibacillusplantarum）菌株相似度最高（ （99.86% ），L.plantarum在青貯飼料中常作為優(yōu)勢菌株存在4.將16SrRNA序列使用MAGA10.0軟件鄰接法構建系統進化樹，如圖3所示，發(fā)現該菌與L.plantarum親緣關系最近，因此結合其生化特征、 序列、進化樹結果判定該菌為L.plantarum，并命名為L.plantarum R1.

2.4生化特征檢測對R1進行生化鑒定結果如 表1所示.

R1在葡萄糖中產酸但不產氣，可以利用乳糖、麥芽糖、蔗糖和甘露醇，說明菌株有很強的糖發(fā)酵能力，其在蛋白陳水中呈陰性，表明其對蛋白脈的利用能力較弱.MR和VP試驗為陽性，表明菌株能通過混酸發(fā)酵途徑代謝葡萄糖，且能通過丁二酸途徑代謝葡萄糖.此外，其對西蒙氏檸檬酸鹽、硫化氫、尿素（凍干）均為陰性且在半固體瓊脂中呈陽性.

綜上所述，R1在代謝糖類方面具有很強的能力，但是在利用復雜的氮源方面能力較弱.

2.5生長曲線及產酸速率曲線測定R1菌株的生長曲線及產酸速率曲線如圖4所示，R1在 6h 之前生長速度較慢，隨后開始進人對數生長期，并在 ^18h 后進入穩(wěn)定期.培養(yǎng)基的 pH 值在 8h 內緩慢降低， 8～16h 產酸速率較高， 16～24h 產酸速率逐漸降低，在 24～36h 內 pH 值基本保持穩(wěn)定，這表明該菌株可能具有較好的產酸效率.

2.6不同培養(yǎng)溫度生長試驗R1不同溫度生長試驗結果如圖5所示，菌株在 25～40°C 溫度的溫度范圍內均能生長，但是在 37°C 時其培養(yǎng) 24h 后0D₆₀₀ 值最高達1.3，因此 37^qC 為其生長速度最適的溫度，更適宜該菌株生長.

2.7R1菌株的抗性測定

2.7.1 耐酸堿性試驗 R1菌株在不同 pH 值的培養(yǎng)基生長結果如圖6所示，R1在 pH3.0 時幾乎不生長，在 pH3.5～7.0 時生長速度隨 pH 值的增加而不斷提升，并在 pH7.0 時達到最高值（ OD₆₀₀= 1.6），隨后又隨著 pH 值的增加而降低，因此其最適pH 值為7.0.

2.7.2耐鹽性試驗R1菌株在不同濃度的NaCl培養(yǎng)基中生長情況如圖7所示，隨著培養(yǎng)基中NaCl濃度增高菌株的生長速率逐漸降低，但是R1在質量分數 6% 的 ΔNaCl 中仍具有較好的生長效果，可見其具有較好的耐鹽能力.

2.7.3耐膽汁酸鹽試驗耐膽汁酸鹽試驗結果表明，如表2、表3所示，在 pH3.0 、質量分數 0.2% 的膽汁酸鹽中， 0～5h 內R1菌株生長呈上升趨勢，且在 5h 達到最高值（ 0D₆₀₀=0.72 ），表明菌株在較低質量分數的膽汁鹽下生長良好，質量分數 0.3% 膽汁鹽中菌株生長則呈相對較慢，生長密度最高值延到 6h 達到峰值（ OD₆₀₀=0.45 ，也具備了相對較好的耐受性.在質量分數 0.4% 和 0.5% 膽汁鹽中菌株生長明顯受到了抑制，表明高濃度膽汁鹽對菌株生長具有較強的抑制作用.在 ΔpH 值為2.0時，R1菌株的生長整體相比與 pH3.0 時受到一定的抑制，生長效果相對較低，但最大 0D₆₀₀ 值也可以達0.32，因此也可以在一定程度上對膽汁鹽表現出耐受性.

2.8添加R1進行青貯飼料改進試驗

2.8.1添加R1對青貯飼料營養(yǎng)品質的影響將R1作為菌種添加劑對蕎麥秸稈、全株玉米和紫花苜?；旌锨噘A料營養(yǎng)成分影響進行初步研究，結果如表4所示，發(fā)酵30d后，青貯飼料的干物質、粗蛋白、粗灰分含量（質量分數）較對照組分別提高了0.64%.57.39%.6.97% ，因此該飼料可以顯著提高動物的生長性能；水溶性碳水化合物含量（質量分數）較對照組提高了 340.14% ，表明該菌株可以有效抑制不良微生物的生長，顯著減少水溶性碳水化合物的損失；而中性洗滌纖維和酸性洗滌纖維含量（質量分數）較對照組分別降低了 1.95% 和2.98% ，說明該菌的添加能夠降低青貯飼料中的纖維含量，從而提高青貯飼料的可消化性.

2.8.2添加R1對青貯飼料發(fā)酵品質的影響蕎麥秸稈、全株玉米和紫花苜?；旌锨噘A料接種R1發(fā)酵 30d 后對發(fā)酵品質的影響結果如表5所示，青貯飼料的 ΔpH 比對照組降低了 7.49% ，乳酸含量 較對照組升高了 7.51% ，乳酸含量的增加會導致飼料 pH 值下降，進一步抑制其他有害微生物的生長，且對照組和接種組均未檢測到丁酸，證明添加R1菌株可以有效地提升青貯飼料的發(fā)酵品質.

3討論

青貯發(fā)酵過程中有多種微生物參與，受青貯原料來源、環(huán)境溫度、發(fā)酵生化反應過程的影響，微生物群落組成結構和數量存在著較大的差異，特別是乳酸菌在其中起到至關重要的作用[2]，其利用水溶性碳水化合物能快速地生長繁殖，不斷產生有機酸，從而降低pH值，抑制有害微生物的生長，確保飼料的品質與安全[15].因而，青貯飼料中乳酸菌的繁殖速度和產酸能力是評估乳酸菌作為青貯飼料接種劑的重要指標，具有高活性和產酸能力強的乳酸菌不僅能縮短青貯發(fā)酵周期，還能改善青貯營養(yǎng)品質[16].本研究中篩選得到的R1菌株具有生長速度快、產酸量高、抗性能力強等特點，在培養(yǎng) 6～16h 處于對數生長期，并在^18h 后進入穩(wěn)定生長期.有機酸含量在 開始積累，最低 ΔpH 達3.5，因此R1在作為乳酸菌接種劑方面具有更大潛力.

溫度是影響乳酸菌發(fā)酵活性的重要因素之一，乳酸菌的生長溫度范圍是 .不同的乳酸菌株的最適生長溫度是不一樣的，曹然[18]等經篩選獲得5株優(yōu)勢產酸菌，除菌株 Υ_m35 最適溫度為 40°C 外，其余菌株均為 35^qC ，而經本試驗研究發(fā)現 37^°C 時最適宜R1菌株的生長.乳酸菌耐酸能力與其產酸能力密切相關，MonteagudoMera等[19]的研究顯示 L ：paracasei 27092 在 pH值接近中性的環(huán)境中生長速率最快，當環(huán)境中的pH 值降至2.0和2.5時，其生長受到抑制；曹然[18]等的研究則表明，L.pentosus YM22 在pH3.0下幾乎不生長，而在 pH4.0 時其生長微弱，并且在 pH4.0 至6.0范圍內，其存活率隨著 pH 值的升高呈上升趨勢.與之相比，本實驗中盡管R1菌株于 pH3.0 時幾乎不能生長，但在 pH3.5 ＼～7.0范圍內，相較于其他研究其展示出更為顯著的隨著pH值增加而生長加速的特性，反映出R1在特定pH值范圍內具有較強的酸適應性機制，由此可以推斷，R1菌株具備較好的耐酸能力.

青貯飼料經生產加工后，主要用于畜牧飼養(yǎng)，動物攝入該飼料后，在腸道內進行消化吸收，因此乳酸菌的耐膽汁酸鹽能力對提升飼料的營養(yǎng)價值具有重要作用.乳酸菌的耐膽汁酸鹽能力有助于其在動物腸道內的生存與增殖，從而促進有益微生物群的平衡，提升飼料的發(fā)酵質量和營養(yǎng)利用率，進而對提高動物的健康水平和生產性能產生積極影響[20].顧瑞霞等[21]的研究發(fā)現，在低膽汁酸鹽質量分數 （0.2%） 對嗜酸乳桿菌抑制較弱，且相比pH=2.0 其在 pH=3.0 時存活率相對更高，表明嗜酸乳桿菌具有很好的耐膽汁酸鹽和低pH的能力，但是也會隨著膽汁酸鹽濃度進一步增加和pH下降出現活力下降.Tang等[22]在對不同乳酸菌株耐受性研究中指出，在低至中等質量分數（ 0.2% 和0.3% ）的膽汁鹽條件下，菌株的生長較為旺盛，而在高質量分數 （0.5% ）的膽汁鹽條件下，菌株的生長受到明顯抑制.與上述結果類似，本實驗中R1在pH3.0 時，膽汁酸鹽質量分數為 0.2% 和 0.3% 中生長較好，但膽汁鹽質量分數達到 10.5% 時，生長幾乎停止，說明R1在較溫和的酸性環(huán)境下對低濃度膽汁鹽表現出更好的耐受性，而在高膽汁鹽濃度和低pH條件下，菌株的生長受到顯著抑制.這表明該菌株在腸道環(huán)境中具有一定的生存能力.蛋白質是牲畜生長和生產的核心營養(yǎng)素，Ni等[23]的研究發(fā)現乳酸菌的添加在青貯過程中對蛋白質的保存具有重要作用;Chen等[24]也發(fā)現乳酸菌添加劑能夠促進蛋白質降解或抑制蛋白質損失，進而增加青貯飼料中的粗蛋白含量.本研究結果表明R1的添加在一定程度上減少了蛋白質的降解，提升了粗蛋白的保存率.WSC是青貯飼料發(fā)酵過程中乳酸菌的代謝底物，對青貯飼料發(fā)酵質量具有決定性影響，在乳酸菌占優(yōu)勢的情況下，某些有害微生物（如需氧菌或產氣菌）的活動被抑制，這些微生物原本會消耗一部分碳水化合物以產生二氧化碳和其他代謝物，乳酸菌的優(yōu)勢生長減少了碳水化合物的消耗，從而保留更多的水溶性碳水化合物[25].Li等[26]研究表明，特定的添加劑能夠有效提高青貯飼料中WSC含量，增強乳酸菌的發(fā)酵效果，進而改善飼料的適口性和營養(yǎng)價值.本實驗中R1的添加顯著促進了WSC的積累，提高了青貯飼料的適口性和營養(yǎng)價值.纖維含量是衡量青貯飼料消化率的重要指標，Duniere等[27]指出乳酸菌添加劑能夠通過提高纖維素酶活性顯著降低青貯飼料中的纖維含量，從而提高其可消化性.R1的添加有效降低了NDF和ADF含量，表明R1具有促進纖維降解的能力，在增強青貯飼料消化率方面具有潛力.目前普遍認為優(yōu)質的青貯飼料pH值小于4.2，Ma等[28]的研究表明乳酸的積累能夠抑制有害微生物的生長，改善青貯飼料的保存效果.本實驗中R1的添加使青貯飼料的乳酸含量增高，pH值顯著降低，達到了優(yōu)質飼料的要求.丁酸是腐敗菌消耗大量蛋白產生的發(fā)酵產物，嚴重影響青貯的氣味，影響適口性，降低動物采食量[29-30]，本研究中沒有檢測到丁酸，表明R1有效抑制了丁酸菌的生長，避免了青貯飼料的腐敗，進一步確保了青貯質量的穩(wěn)定性.通過添加R1對青貯飼料發(fā)酵性能和營養(yǎng)成分影響進行初步研究，證明其在青貯發(fā)酵過程中能夠發(fā)揮重要作用，能夠有效改善青貯飼料的營養(yǎng)成分和發(fā)酵品質.

4結論

R1作為一種高效的乳酸菌添加劑，具有廣泛的應用前景.在實際生產中，添加乳酸菌能夠顯著改善青貯飼料的品質，減少營養(yǎng)損失，提高飼料的適口性和營養(yǎng)價值.這對于畜牧業(yè)生產，特別是牛羊等反芻動物的飼養(yǎng)具有重要的經濟效益和環(huán)保效益.本文的研究結果也為進一步開發(fā)乳酸菌添加劑提供了理論基礎和實踐指導.未來的研究可以進一步優(yōu)化R1菌株的培養(yǎng)條件，研究其在不同原料、不同環(huán)境下的應用效果，以期為畜牧業(yè)提供更為優(yōu)質的青貯飼料添加劑.

致謝校級實驗設備科研項目（KFSY2023011和SYJS2023017）對本文給予了資助，謹致謝意.

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Isolation and Identification of Lactiplantibacillus Plantarum R1 in Silage and Its Effect on Silage Fermentation Quality

LIANG Shaorong1， XU Lu1，HU Wenxin1，LAI Xianjun2，YANG Feixue1YANG Ruiqi1， ZHANG Qian1， XIANG Kejing1， SHI Yingxin1，PU Chunyan’， SHAO Huanhuan1，YAN Lang2，WANG Xiaoyan1

（1. College of Life Sciences，Sichuan Normal University， Chengdu 61oio1， Sichuan;

2.SichuanPrcalKbofsecUlfiraceristoscgUesiticg5o）

Abstract：ToimprovethequalityofsilageinLiangshanYiAutonomousPrefectureandidentifylocallsuitablecharacteristicfermentationstrains，lacticacidbacteriawithfastgrowth，highacidproduction，andstrongappicationpotential wreselectedfroma mixedsilagemadeofbuckwheatstraw，whole-con，andalfalfa.AstrainR1ofhighyieldlacticacidbacterial，wasisolatedandits physiologicalandbiochemical characteristics，colonymorphology，and16SrRNA sequence were analyzed.The strainRlwasusedas anaditiveinasimulatedmixedsilagefermentationfor3Odays.TheresultsshowedthatRlformedsmooth，milkywhitecolonies，，was Gram-positive，andexhbitedstrongsugarfermentationabilty.After16SRNAsequenceanalysis，twasidentifidasLactiplantibacilus plantarum R1. R1 grew best at pH7.O and 37 C ，showing strong tolerance to NaCl，and exhibited high resistance to bile salts at pH3.0.Afterinoculating theRlstrainintosilageandfermentingitfor30dys，comparedwiththecontrolgroup，thecrudeprotein， watersolublecarbohydrates，andlacticacidcontentsinthelageweresignificantlyincreased，whilethepHvalue，neutraldetergent fiber，andaciddetergenfibercontentswerereduced.herefore，Rlcanbeusedasalacticacidbacteriaadditivetosignificantlyimprove the nutritional quality of grass silage.

Keywords：silage；Lactiplantibacillus plantarum；isolation and identification；silage quality

（編輯 陶志寧）