分娩相關(guān)基因IL-8、OTR及PGHS-2表達(dá)在早產(chǎn)與足月中的差異表達(dá)分析

謝莉莉

（深圳市婦幼保健院兒科，廣東 深圳 518000）

分娩相關(guān)基因IL-8、OTR及PGHS-2表達(dá)在早產(chǎn)與足月中的差異表達(dá)分析

謝莉莉

（深圳市婦幼保健院兒科，廣東 深圳 518000）

目的分析分娩相關(guān)基因IL-8、OTR及PGHS-2表達(dá)在早產(chǎn)與足月中的差異表達(dá)。方法回顧性分析2012年9月至2013年9月我院收治的60例剖宮產(chǎn)分娩的孕婦的臨床資料。結(jié)果早產(chǎn)組孕婦的IL-8基因表達(dá)和孕周呈正相關(guān)（P＜0.05），但是足月產(chǎn)組孕婦的IL-8基因表達(dá)和孕周無顯著相關(guān)（P＞0.05）。兩組孕婦的OTR、PGHS-2基因表達(dá)均和孕周無顯著相關(guān)（P＞0.05）。結(jié)論分娩相關(guān)基因IL-8、OTR及PGHS-2表達(dá)在早產(chǎn)與足月中的差異表達(dá)差異顯著，可能受到早產(chǎn)進(jìn)程的影響。

分娩相關(guān)基因IL-8、OTR及PGHS-2表達(dá)；早產(chǎn)；足月；差異表達(dá)

本研究對我院近一年來收治的60例剖宮產(chǎn)分娩的孕婦的臨床資料進(jìn)行了回顧性分析，探討了分娩相關(guān)基因白細(xì)胞介素-8（IL-8）、縮宮素受體（OTR）及前列腺素H合成酶-2（PGHS-2）表達(dá)在早產(chǎn)與足月中的差異表達(dá)，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

2012年9月至2013年9月我院共收治48例剖宮產(chǎn)分娩的妊娠32～36+6周孕婦，其中有31例孕婦早產(chǎn)臨產(chǎn)（PTL），17例患者早產(chǎn)未臨產(chǎn)（PTNL）。將這些患者作為早產(chǎn)組，另選取我院同期收治的12例剖宮產(chǎn)分娩的妊娠37～42周孕婦作為足月產(chǎn)組，其中有6例孕婦足月臨產(chǎn)（TL），6例孕婦足月未臨產(chǎn)（TNL）。兩組患者各基線資料之間的差異均不顯著（P＞0.05），具有可比性。具體見表1、表2。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)本采集和處理

在子宮下段剖宮產(chǎn)手術(shù)時，取出胎兒后從子宮切口邊緣將所有孕婦的肌層組織采下來，放在4 ℃的溫度下保存，運用0.9%的氯化鈉液對血跡和羊水進(jìn)行沖洗，然后在低溫凍存管中放置組織，立即向液氮中投入，長期保存以備用[1]。

1.2.2 qRT-PCR

內(nèi)參為人GAPDH。上海生物工程有限公司對以上引物進(jìn)行合成純化。將50～75 mg凍存的子宮肌層選取出來進(jìn)行組織勻漿，在對總RNA進(jìn)行提取時嚴(yán)格依據(jù)RNeasy Mini Kit試劑盒（QIAGEN）說明書，在對總RNA反轉(zhuǎn)錄成cDNA時嚴(yán)格依據(jù)qRT-PCR試劑盒（TaKaRa）說明書，將無菌去離子水作為陰性對照。熒光定量PCR反應(yīng)體系：12.5 μL 2×SYBR Premix Ex Taq Ⅱ，1μL上游引物，1μL下游引物（表3），2Μl cDNA模板，8.5μL無菌去離子水，反應(yīng)總體積是25μL。PCR設(shè)定參數(shù)：95 ℃預(yù)變性30 s；95 ℃ 20 s；IL-8的退火溫度為59 ℃，OTR的退火溫度為59 ℃，PGH S-2的退火溫度為60 ℃，GAPDH的退火溫度為60 ℃，退火時間30 s；72 ℃ 20 s；共對40個循環(huán)進(jìn)行擴(kuò)增[2]，見表3。

表1 兩組孕婦的年齡、孕次、產(chǎn)次、孕周、宮口比較

表2 兩組患者的剖宮產(chǎn)指證比較

表3 引物序列和片段長度[3]

表4 IL-8、OTR、PGHS-2mRNA和孕周的相關(guān)性分析

1.2.3 Western blot及半定量分析

清洗PBS之后依據(jù)1 mL/g組織將RIPA裂解液加入，并在第一時間運用玻璃勻漿器在冰上進(jìn)行20 min的勻漿，在4 ℃的溫度下進(jìn)行15 min的離心，離心速度為12 000 r/min，將上清取出來，運用BCA法定量后將30 μg的蛋白樣品取出來進(jìn)行SDS- PAGE并向0.45 Lm PVDF膜上電轉(zhuǎn)移，在室溫下震蕩封閉5%脫脂奶粉2 h，然后分別用1∶250稀釋的OTR和PGH S-2-抗4 ℃孵育過夜，內(nèi)參為β-actin（1∶2000）。完成孵育后TBST進(jìn)行4次洗膜，每次7 min。然后再和HRP標(biāo)記的1B5 000二抗室溫孵育1 h，TBST進(jìn)行5次洗膜，每次5 min。將發(fā)光液加入其中后在暗室運用X線片顯影。在對各組的蛋白積分光密度進(jìn)行分析時運用Quantity One 軟件，目的蛋白表達(dá)水平=目的條帶積分光密度值/對應(yīng)的β-actin的積分光密度。重復(fù)同一實驗3次，取平均值[4]。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理

2 結(jié) 果

見表4。

3 討 論

早產(chǎn)屬于一種妊娠并發(fā)癥，在臨床極為常見，極易引發(fā)新生兒患病和死亡。分娩的過早發(fā)動是其發(fā)生的根本原因，也就是說，子宮組織從靜止期過早轉(zhuǎn)化為激活期，但是目前臨床還沒有弄清楚其具體機(jī)制。既往相關(guān)醫(yī)學(xué)研究表明，在分娩的啟動和維持過程中，分娩相關(guān)基因IL-8、OTR及PGHS-2發(fā)揮著至關(guān)重要的作用，但是在早產(chǎn)子宮肌層中，臨床還沒有弄清楚這些分娩相關(guān)基因的表達(dá)[5]。

本研究中，熒光定量PCR檢測IL-8、OTR、PGHS-2mRNA 的表達(dá)情況為在子宮下段肌層中，PTL組孕婦的IL-8 mRNA水平明顯比TL組低，但明顯比PTNL組和TNL組高（P＜0.05）；PTL組孕婦的PGHS-2mRNA水平明顯比TL組低，但明顯比TNL組高（P＜0.05），和PTNL組之間的差異不顯著（P＞0.05）；各組孕婦的OTRmRNA水平之間的差異均不顯著（P＞0.05）。Western blot檢測IL-8、OTR、PGHS-2蛋白的表達(dá)情況為在子宮下段肌層中，各組均沒有檢測出IL-8蛋白的表達(dá)，各組的OTR蛋白均具有豐富的表達(dá)，各組間表達(dá)之間的差異均不顯著（P＞0.05）；TL組孕婦的PGHS-2蛋白表達(dá)水平明顯比TNL組高（P＜0.05），但PTL和PTNL組孕婦的PGHS-2蛋白表達(dá)水平之間的差異不顯著（P＞0.05）。IL-8、OTR、PGHS-2mRNA和孕周的相關(guān)性分析顯示，早產(chǎn)組孕婦的IL-8基因表達(dá)和孕周呈正相關(guān)（P＜0.05），但是足月產(chǎn)組孕婦的IL-8基因表達(dá)和孕周無顯著相關(guān)（P＞0.05）。兩組孕婦的OTR、PGHS-2基因表達(dá)均和孕周無顯著相關(guān)（P＞0.05），和相關(guān)醫(yī)學(xué)研究結(jié)果一致。

綜上所述，分娩相關(guān)基因IL-8、OTR及PGHS-2表達(dá)在早產(chǎn)與足月中的差異表達(dá)差異顯著，可能受到早產(chǎn)進(jìn)程的影響。

[1] 曹澤毅.中華婦產(chǎn)科學(xué)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2008:99.

[2] 樂杰.婦產(chǎn)科學(xué)[M].6版.北京:人民衛(wèi)生出版社,2009:92.

[3] 李芳,王少軍.磷脂酶A2和環(huán)氧合酶-2 在早產(chǎn)發(fā)生的作用[J].中國婦幼保健,2010,25 (28):4125.

[4] 徐志紅,徐愛群,曾蔚越.早產(chǎn)的定義和分類[J].實用婦產(chǎn)科雜志, 2010,21(11):643-644.

[5] 賈贊慧,鄭桂英,崔滿華.促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素受體-1與分娩發(fā)動的關(guān)系[J].中國婦幼保健,2009,254(20):2766.

R72

B

1671-8194（2014）17-0091-02

2012年深圳市科技計劃項目，項目名稱：早產(chǎn)相關(guān)基因表達(dá)對胎兒發(fā)育和出生體重的影響（立項項目編號：201203102）