幾種植物提取物對雞柔嫩艾美耳球蟲感染的防治作用評價

中圖分類號：S852.5 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A文章編號：1673-1085（2025）06-0020-09

柔嫩艾美耳球蟲（Eimeriatenella，E.tenella）是一種細(xì)胞內(nèi)頂復(fù)門寄生蟲，主要危害雛雞及青年雞。球蟲感染雛雞后寄生于盲腸上皮細(xì)胞內(nèi)，引起腹瀉、血便、生長遲緩和飼料轉(zhuǎn)化率降低等癥狀，并可能引起死亡。據(jù)統(tǒng)計，全球家禽養(yǎng)殖業(yè)每年因球蟲病造成的經(jīng)濟(jì)損失達(dá)30億美元[1-2]?，F(xiàn)代大規(guī)模、高密度的家禽養(yǎng)殖方式為艾美耳球蟲的傳播創(chuàng)造了有利條件[3]。當(dāng)雛雞食用存在孢子化卵囊的食物或水源后，會造成球蟲在雞體內(nèi)繁殖，卵囊隨著糞便排出并傳播。球蟲卵囊具有彈性的多層壁，可以抵抗許多標(biāo)準(zhǔn)消毒劑，能使卵囊在潮濕的環(huán)境中存活，并保持傳染性達(dá)數(shù)月到數(shù)年不等[4]。

目前，聚醚類和其他化學(xué)類抗球蟲藥物是畜禽養(yǎng)殖過程中防治球蟲的重要藥劑，隨著上述抗球蟲藥物的普及和廣泛使用，耐藥蟲株不斷出現(xiàn)，極大地削弱了這類藥物的療效，而新藥研發(fā)速度遠(yuǎn)不及球蟲耐藥的產(chǎn)生速度[5。此外，盡管目前也有三價或四價球蟲活卵囊疫苗推向市場，但其成本較高，操作也存在一定局限性[。近年來，具有抗炎、促生長且安全、無殘留等優(yōu)點的植物提取物受到廣泛關(guān)注，這些提取物有望用于球蟲病防治而成為新的抗球蟲藥物[。因此，本試驗基于E.tenella感染雞模型探討了沒食子酸、絲蘭皂苷、桉葉油、姜黃素四種植物提取物各自以及它們之間聯(lián)合的抗球蟲感染的防護(hù)作用。

1材料與方法

1.1試驗材料

1.1.1試驗動物和試驗蟲株1日齡黃羽肉雞購自江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院家禽研究所，飼養(yǎng)于經(jīng)氨水噴灑和甲醛熏蒸消毒的動物房。飼養(yǎng)至14日齡時收集雞糞，采用飽和食鹽水漂浮法鏡檢是否有球蟲卵囊，再次確認(rèn)各組雞無球蟲感染后開展試驗。整個試驗過程飼喂的基礎(chǔ)雛雞飼料不含任何抗球蟲藥。

E.tenella孢子化卵囊（霍頓株，上海獸醫(yī)研究所提供）由揚州大學(xué)中獸醫(yī)教研室保存，每3個月經(jīng)雛雞接種傳代并儲存于 2.5% 重鉻酸鉀溶液中。1.1.2藥物與試劑沒食子酸、絲蘭皂苷、桉葉油、姜黃素預(yù)混劑和姜黃素溶液由建明（中國）有限公司提供； 0.5% 地克珠利溶液為四川藍(lán)晟制藥有限公司產(chǎn)品，購于揚州大學(xué)動物醫(yī)院。

1.2試驗方法

1.2.1試驗分組將110只黃羽肉雞按體重隨機(jī)分為11組，分別為空白對照組、模型組、陽性對照組（地克珠利）、沒食子酸組、絲蘭皂苷組、沒食子酸 + 絲蘭皂苷組、桉葉油組、沒食子酸 + 桉葉油組、姜黃素組、沒食子酸 + 姜黃素組和姜黃素飲水組；地克珠利和姜黃素飲水組飲水給藥，其余各藥物組均拌料給藥。在灌胃球蟲卵囊后立刻開始給藥，連續(xù) 。試驗分組及各組預(yù)混劑的有效成分及終濃度見表1。

1.2.2處理方法于15日齡時將各組雞稱重（初體重）并按體重隨機(jī)分為11組，除空白對照組外，其余各組雛雞于15日齡經(jīng)口灌服 8×10⁴ 個孢子化卵囊；各植物提取物組預(yù)混劑給藥量均為 250mg/kg （預(yù)混劑／飼料），采用分級拌料的方式確保藥物攪拌均勻。此外，姜黃素飲水濃度為 4mg/L ，陽性對照藥物地克珠利飲水濃度為1mg/L 。

試驗期間，每日觀察感染雞臨床癥狀、糞便形態(tài)與血便情況。攻毒后120＼～192h收集各組雞糞便并進(jìn)行卵囊計數(shù)。于攻毒后 192h 再次稱重（末體重）并剖殺各組雞，采集肝臟、脾臟并稱重計算臟器指數(shù)，采集盲腸進(jìn)行病變記分[8]。

1.2.3抗球蟲指數(shù)計算方法本試驗采用抗球蟲指數(shù)（anticoccidialindices，ACI）判定藥物的抗球蟲效果，計算公式如下：

ACI= （存活率 + 相對增重率）－（卵囊值 + 病變值）[9-10]

其中：存活率 （%）= （組內(nèi)存活雞數(shù)/組內(nèi)總雞數(shù)） ×100 ；相對增重率 （%）= （感染投藥組的平均增重/不感染不投藥組的平均增重）×100 ；病變值=病變記分 ×10 。卵囊比數(shù) （% ）=（健康組或試驗組卵囊數(shù)/感染不給藥組卵囊數(shù)）×100 ，如果卵囊比數(shù)為 0%～1% 時，則卵囊值為0；如果卵囊比數(shù)為 1%～25% 時，則卵囊值為5;如果卵囊比數(shù)為 26%～50% 時，則卵囊值為10;如果卵囊比數(shù)為 51%～75% 時，則卵囊值為20;如果卵囊比數(shù)為 76%～100% 時，則卵囊值為40。

判定標(biāo)準(zhǔn)為：ACI在180以上為高效；160＼～180為良好；120＼～160為差；120以下為無效[9]。1.2.4臟器指數(shù)的計算在攻毒感染 192h ，稱重后剖殺各組試驗雞，采集肝臟和脾臟，按照肝臟指數(shù) Σ=Σ 肝臟濕重/雞體重（ mg/g ），脾臟指數(shù) Σ=Σ 脾臟濕重/雞體重（ mg/g ）計算臟器指數(shù)。

1.2.5植物提取物預(yù)混劑對卵囊孢子化率的影響 在 50mL 離心管中加入 1×10⁵ 個未孢子化卵囊，1575g 離心 10min 后收集沉淀，加入 10mg/mL 沒食子酸預(yù)混劑 5mL ，充分混勻，于 28^°C 、 120r/ min振蕩孵育 48h ，于 24h 和 48h 用血球計數(shù)板統(tǒng)計每管的孢子化卵囊數(shù)和全部卵囊數(shù)，計算卵囊的孢子化率。孢子化率=孢子化卵囊數(shù)/卵囊總數(shù) ×100% 。絲蘭皂苷組、沒食子酸 + 絲蘭皂苷組、桉葉油組、沒食子酸 + 桉葉油組、姜黃素組、沒食子酸 + 姜黃素組方法同上，陽性對照組加入地克珠利，另設(shè)加水組為對照組，每組設(shè)3個重復(fù)。1.2.6統(tǒng)計與分析 采用IBMSPSS Statistics 25.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，使用GraphpadPrism9.5.1進(jìn)行圖表制作。數(shù)據(jù)均以“平均值 ± 標(biāo)準(zhǔn)差”表示，組間比較使用單因素方差分析（one-wayANOVA）。以 Plt;0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果與分析

2.1球蟲感染模型的評價

球蟲感染 ^72h 后，觀察模型組發(fā)現(xiàn)試驗雛雞扎堆狀況明顯； 120h 后開始出現(xiàn)較多血便（圖1A）， 144h 時模型組出現(xiàn)死亡，剖檢死亡雞發(fā)現(xiàn)盲腸腫大、增粗，質(zhì)地堅硬，呈棕色或暗紅色，腸壁增厚，黏膜出血及壞死，腸內(nèi)容物出現(xiàn)血液、血塊或干酪樣物，甚至出現(xiàn)栓塞堵塞盲腸形成腸栓（圖1B、1C）。將病死雞的糞便經(jīng)飽和食鹽水漂浮法處理，鏡檢可見大量球蟲卵囊（圖1D），證明球蟲感染模型建立。

注：A：模型組血便情況；B：球蟲感染病死雞盲腸充血情況；C：球蟲感染病死雞的盲腸栓；D：鏡檢經(jīng)飽和鹽水漂浮法處理的病死雞糞便，可見球蟲卵囊。

與模型組相比，絲蘭皂苷組、桉葉油組、姜黃素組大部分雛雞精神狀態(tài)良好，血便減少。沒食子酸組、沒食子酸 + 絲蘭皂苷組、沒食子酸 + 桉葉油組、沒食子酸 + 姜黃素組、姜黃素飲水組雛雞臨床癥狀較模型組略有好轉(zhuǎn)，但是總體無明顯效果。

2.2盲腸病變及記分、卵囊值變化

空白對照組盲腸內(nèi)容物柔軟，顏色長度和腸壁正常，無眼觀病變。模型組盲腸明顯縮短，腫大，觸之堅硬，剪開后有腸栓和惡臭味，內(nèi)含凝固的血液，鏡檢含大量球蟲卵囊。沒食子酸組、沒食子酸 + 絲蘭皂苷組、沒食子酸 + 桉葉油組、沒食子酸 + 姜黃素組、姜黃素飲水組可見明顯盲腸縮短、腫脹。陽性對照組、絲蘭皂苷組、姜黃素組盲腸長度較空白對照組短，輕微腫大，觸之柔軟，卵囊數(shù)明顯減少。桉葉油組與空白對照組相似（圖2）。盲腸病變記分及卵囊數(shù)見表2。

2.3雛雞增重的變化

各組雛雞增重的變化情況見表3。由表3可知，各組雛雞初體重差異不顯著，說明各組雞試驗前體重分配均衡。柔嫩艾美耳球蟲感染雞后，平均增重較空白組顯著降低；與模型組相比，桉葉油、沒食子酸 + 桉葉油可以顯著提高球蟲感染雛雞的平均增重，其中沒食子酸 + 按葉油的組合顯示出最佳效果，該組雛雞平均增重最高。

2.4抗球蟲指數(shù)比較

各組抗球蟲指數(shù)統(tǒng)計結(jié)果見表4。由表4可知，沒食子酸組、桉葉油組、沒食子酸 + 桉葉油組、姜黃素組ACI較高，其中桉葉油組ACI達(dá)到174，臨床抗球蟲效果最好。桉葉油與沒食子酸組合降低了ACI；單用姜黃素的ACI為157，但與沒食子酸聯(lián)合同樣會降低抗球蟲效果；與模型組比較，沒食子酸單用也有一定的抗球蟲效果，但達(dá)不到抗球蟲藥物篩選的要求。

2.5臟器指數(shù)的變化

各組臟器指數(shù)的變化情況見圖3。由圖3可知，模型組的肝臟指數(shù)和脾臟指數(shù)顯著高于空白對照組（ Plt;0.05 ）；沒食子酸 + 絲蘭皂苷組、桉葉油組、沒食子酸 + 姜黃素飲水組肝臟指數(shù)顯著降低；桉葉油組脾臟指數(shù)顯著降低。此外，桉葉油組的肝臟指數(shù)和脾臟指數(shù)最接近正常水平。

注：A：肝臟指數(shù)；B：脾臟指數(shù)；同一圖中字母相同，表示差異不顯著（ Pgt;0.05 ）；字母不同，表示差異顯著（ Plt;0.05 ）下圖同。

2.6植物提取物預(yù)混劑對卵囊孢子化率的影響

隨著時間的增加，卵囊孢子化率逐漸升高，各組孢子化率不同，詳細(xì)情況見圖4所示。由圖4可知，與空白對照組相比， 24h 時，沒食子酸、桉葉油對卵囊孢子化的影響大于其他組； 48h 沒食子酸、絲蘭皂苷對卵囊孢子化具有較高的抑制率，表現(xiàn)出了一定抑制卵囊孢子化的作用效果。

注：A：新收取卵囊在 24h 的孢子化率；B：新收取卵囊在48h的孢子化率。

3討論

隨著現(xiàn)代養(yǎng)殖業(yè)集約化、規(guī)?；目焖侔l(fā)展，雞球蟲病日益嚴(yán)重，并以柔嫩艾美耳球蟲引起的球蟲病影響最嚴(yán)重[]。艾美耳球蟲的生命周期復(fù)雜而精確，由細(xì)胞內(nèi)（孢子生殖）和細(xì)胞外（裂殖生殖和配子生殖）階段組成，需要對各種上皮細(xì)胞進(jìn)行3＼～4次入侵，最終導(dǎo)致盲腸嚴(yán)重破壞甚至死亡。因此，抑制卵囊排出和維持盲腸結(jié)構(gòu)是抗擊球蟲病的首要任務(wù)[1]。研究發(fā)現(xiàn)， 52.5mg/kg （藥物/飼料）絲蘭皂苷有良好的抗球蟲效果[12]；桉葉油的主要成分為1，8-桉葉素（ 80% 以上）、香燴烯、蒎烯和松油醇等[13]。1，8-桉葉素能抑制乙酰膽堿酶活性，引發(fā)寄生蟲持續(xù)興奮、麻痹，也可作用于寄生蟲體內(nèi)的酶，對寄生蟲造成損傷[14]。姜黃素有效濃度為 200mg/kg （藥物／飼料）時被證實有良好的抗球蟲效果[15]。姜黃素是一種天然的多酚類化合物，具有抗菌、抗炎、抗病原蟲、加快創(chuàng)傷愈合等藥理活性[16-17]。姜黃提取物可以顯著提高雞血清中微線蛋白2抗體水平，能夠促進(jìn)刀豆球蛋白A誘導(dǎo)脾淋巴細(xì)胞的增殖，來增強機(jī)體的體液免疫和細(xì)胞免疫[18]。本研究結(jié)果表明，用藥后各組卵囊排出量均明顯減少，且四種藥物單獨使用時均抑制了約 50% 的卵囊排出量，這表明各藥物均具有一定的抗球蟲效果。

柔嫩艾美耳球蟲感染會導(dǎo)致雛雞盲腸上皮細(xì)胞損傷，阻礙養(yǎng)分的吸收和機(jī)體必需維生素的生成，并最終導(dǎo)致雛雞精神萎靡、體重減輕、產(chǎn)生血便，甚至死亡[19-20]。剖檢觀察各組雞的盲腸病變情況并進(jìn)行病變記分，除絲蘭皂苷外，其余各用藥組病變記分均有所降低，且盲腸長度縮短程度減少，其中以按葉油處理對盲腸保護(hù)作用最佳。對比各組雛雞體重變化情況發(fā)現(xiàn)，與模型組相比，除沒食子酸 + 姜黃素組外，其余各藥物處理方案均對體重相對增重率有一定促進(jìn)作用，其中桉葉油組和沒食子酸 + 桉葉油組雛雞的體重相對增重率最高。

綜合增重率、存活率、病變值和卵囊值計算各用藥組的ACI值，結(jié)果表明，沒食子酸、絲蘭皂苷、姜黃素的抗球蟲效果并不佳，這可能是因為本研究使用的藥物濃度相對較低，不能有效發(fā)揮抗球蟲作用。

家禽消化器官的生長發(fā)育直接影響機(jī)體的新陳代謝和動物的生長速度。消化器官指數(shù)作為衡量機(jī)體消化性能的重要指標(biāo)，其相對大小在一定程度上能夠反映機(jī)體的生長發(fā)育狀態(tài)和對環(huán)境適應(yīng)能力的強弱[21]。免疫器官的發(fā)育狀態(tài)反映了機(jī)體免疫系統(tǒng)水平高低，機(jī)體免疫功能增強有利于抵御病原體的入侵，降低家禽患病風(fēng)險，保證家禽的健康生長。艾美耳球蟲感染后，會引起雛雞脾臟細(xì)胞增殖能力升高，并誘導(dǎo)肝細(xì)胞腫脹、空泡變性，甚至導(dǎo)致肝組織局灶性壞死[22]，導(dǎo)致肝臟和脾臟指數(shù)顯著增加。四種植物提取物預(yù)混劑單獨使用或聯(lián)合使用時都降低了肝臟指數(shù)和脾臟指數(shù)，表明各藥物均具有一定的調(diào)節(jié)機(jī)體穩(wěn)態(tài)作用。

雞球蟲的卵囊壁能夠抵御大部分物理和化學(xué)損害，卵囊對于化學(xué)制品、消化酶、洗滌液以及低滲溶液的破壞具有相當(dāng)?shù)牡挚沽?，常?guī)的消毒劑很難破壞球蟲的卵囊壁結(jié)構(gòu)[23]。球蟲孢子化卵囊的傳播性很強，降低卵囊的孢子化率能降低對雞的危害[24]。前期研究發(fā)現(xiàn)，絲蘭皂苷可以通過提高細(xì)菌細(xì)胞壁的通透性發(fā)揮抗菌作用[16]。桉葉素能使球蟲孢子細(xì)胞膜的通透性發(fā)生改變，膜內(nèi)營養(yǎng)物質(zhì)大量滲出，從而殺滅球蟲[25]。結(jié)果顯示，沒食子酸、絲蘭皂苷、桉葉油和姜黃素對卵囊孢子化都有一定的抑制作用。

4總結(jié)

本研究綜合篩選發(fā)現(xiàn)桉葉油能夠顯著減少雛雞糞便中約 51% 卵囊的排出，顯著改善因球蟲感染造成的體重?fù)p失，比模型組體重增加了 47% 左右，使盲腸病變顯著減輕；ACI達(dá)到了172，能改善肝臟指數(shù)和脾臟指數(shù)，使其接近正常空白組水平，且能抑制新鮮卵囊孢子生殖。研究結(jié)果顯示桉葉油有望成為新型植物抗球蟲藥，為聚醚類和其他化學(xué)類等抗球蟲藥物易產(chǎn)生耐藥性的問題提供了解決方案。

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Evaluation of the Protective Effects of Several Herbal Extracts against Eimeria tenellaInfected Chickens

SHIJieyu1，LI Kaiyuan1，HUANG Junjiel，ZHENGHe2，ZHANG Wenhai1，YI Xiaobin1，LI Jingui，3

[1.Yangzhou University CollegeofVeterinary Medicine （InstituteofComparativeMedicine），Yangzhou 225000，Jiangsu，China;2.KeminIndustries，Zhuhai519040，Guangdong，China; 3.Jiangsu Co-innovation CenterforPreventionandControlofImportantAnimal InfectiousDiseases andZoonoses，Yangzhou225000，Jiangsu，China]

Abstract： To investigate the preventive and therapeutic effects of gallic acid，yucca saponin， eucalyptus oil，curcumin and their combination on chickens infected with Eimeria tenella （ E tenella）.A total of110 15- day-old yellow-feathered broilerswere divided into 11 groups（10 per group） after balancing their body weight， namely，blank control group，model group，positive control group （diclazuril），gallic acid group，yucca saponin group，gallic acid + yucca saponin group，eucalyptus oil group，gallic acid + eucalyptus oil group，curcumin group，gallic acid + （20 curcumin group，and curcumin drinking water group.The dosage of each plant extract group premix was 250mg/kg .Except for the curcumin drinking water group，the drugs in other groups were mixed with feed for administration.Except for the blank control group，the chickens in other groups were orally infected with 8×10⁴E .tenella sporulated oocysts at 15 days of age to establish the coccidia infection model，and the drugs were continuously administered for7days. During the experiment，the clinical manifestations of the chickens in each group were observed. The chickens in each group were weighed and killed at 192 h after infection.The cecum，liver and spleen were collected，and the relative weight gain rate，survival rate，lesion value，oocyst value and organ index were calculated.The anticoccidial index （ACI） of each drug group was calculated. In addition，the plant extract premix was co-incubated with the newly collected oocysts to detect the sporulation rate of the oocysts.The experimental results showed that compared with the model group，the ACI values of the gallic acid group，the eucalyptus oil group and the curcumin group were significantly increased，the liver and spleen indexes were reduced，and the sporulation of the oocysts was inhibited to a certain extent;among them，the eucalyptus oil group was the best，with an ACI of about 16O，and had a good inhibitory effect on the sporulation of the oocysts within ^24h ：

Keywords：Eimeria tenella;Plant extracts;Anticoccidial index;Eucalyptus oil