普洱茶多糖改善小鼠潰瘍性結(jié)腸炎的作用研究

引用格式：，等.普洱茶多糖改善小鼠潰瘍性結(jié)腸炎的作用研究[J].湖南農(nóng)業(yè)科學(xué)，2025（5）：98-102

DOI：10.16498/j.cnki.hnnykx.2025.005.018

中圖分類號：TS272.5；R574.62 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：1006-060X（2025）05-0098-05

Abstract：Ulcerativecolitis （UC）was iduced inmicebydextran sulfatesodium（DS），and Pu'er ea polysaccaride （PPS）was administered during the modeling period.Four groups of normal control，DsS model，low-dose （ （200mg/kg） PTPS，and high-dose （400mg/kg） PTPS were designed.Theeffcts of PTPSonDSS-induced UC were investigated fromthedisease activity index，colon morphology，istopathoogicalchanges，ndlevelsofinammatorycytokines.heresultsdmonstratedthatPTeviatedthe weightlossinbitedolonsorteingallviatedteolotisuedamagendiminisedteevationsinfamatoryctoie levels，thereby ameliorating DSS-induced UC in mice.The high-dose group demonstratedbeter effects.

Keywords：Pu'er teapolysaccharides;ulcerative colitis; inflammatory cytokines; colon

潰瘍性結(jié)腸炎（ulcerativecolitis，UC）是一種慢性非特異性疾病，主要累及直腸和結(jié)腸粘膜。目前，亞洲地區(qū)潰瘍性結(jié)腸炎的發(fā)病率呈現(xiàn)不斷上升的態(tài)勢[。潰瘍性結(jié)腸炎的發(fā)病機制較為復(fù)雜，受遺傳因素、腸道上皮屏障功能不全、腸道免疫功能失調(diào)以及飲食等多方面因素的影響，其中腸道免疫功能失調(diào)和腸道菌群改變引發(fā)的腸道內(nèi)環(huán)境失衡是其發(fā)病的主要誘因[2-3]。盡管潰瘍性結(jié)腸炎的確切病因尚未完全明確，但目前已有證據(jù)表明，基因變異、免疫應(yīng)激、腸道菌群紊亂以及結(jié)腸黏膜受損等因素與潰瘍性結(jié)腸炎的發(fā)病進(jìn)程密切相關(guān)[4]。目前，沒有藥物能徹底治愈潰瘍性結(jié)腸炎，僅能通過醫(yī)療手段緩解癥狀、延長病情緩解期、提升患者生活質(zhì)量及預(yù)防病情復(fù)發(fā)[5]。因此，探索新的改善策略并研制安全有效的藥物，是潰瘍性結(jié)腸炎患者的迫切需求。

多糖（Polysaccharides）是一種生物活性大分子，對腸道健康具有多方面積極影響，主要表現(xiàn)為：能修復(fù)結(jié)腸功能紊亂，改善結(jié)腸形態(tài)結(jié)構(gòu)；能減少炎癥細(xì)胞浸潤，降低促炎細(xì)胞因子表達(dá)水平；能調(diào)節(jié)腸道菌群的構(gòu)成與多樣性，促進(jìn)腹瀉小鼠腸道黏膜功能恢復(fù)；等等。茶多糖（Teapolysaccharides）是茶葉中的關(guān)鍵生物活性物質(zhì)，憑借其多靶點生物活性和多維度生理調(diào)節(jié)功能，已成為現(xiàn)代食品科學(xué)與醫(yī)藥領(lǐng)域的研究熱點[6-7]。研究表明，綠茶多糖可以通過抑制腫瘤細(xì)胞的增殖和侵襲，促進(jìn)細(xì)胞凋亡，從而防止小鼠結(jié)腸炎相關(guān)的癌變[；茯磚茶多糖能夠調(diào)節(jié)腸道菌群失衡，促進(jìn)微生物代謝，并修復(fù)腸道屏障，緩解潰瘍性結(jié)腸炎；鐵觀音烏龍茶多糖可通過調(diào)節(jié)T細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)并優(yōu)化腸道微生物群，從而對小鼠結(jié)腸產(chǎn)生保護(hù)作用[0]

普洱茶是一種源自中國云南的大葉種黑茶，以其獨特性而著稱。目前，關(guān)于普洱茶多糖（Pu'erteapolysaccharides，PTPS）在改善潰瘍性結(jié)腸炎方面的研究尚未見報道。研究以右旋糖酐硫酸鈉（Dextransulfatesodium，DSS）誘導(dǎo)小鼠潰瘍性結(jié)腸炎進(jìn)行建模，并在建模期間同步給予PTPS干預(yù)，從結(jié)腸形態(tài)、疾病活動指數(shù)、組織病理學(xué)、炎癥因子水平等方面探討了PTPS對DSS誘導(dǎo)的潰瘍性結(jié)腸炎的影響，以期為普洱茶多糖的開發(fā)應(yīng)用提供參考。

1材料與方法

1.1 試驗材料

普洱茶多糖由湖南艾嘉生物科技有限公司提供。供試小鼠為SPF級6＼～8周齡雌性C57BL/6小鼠，購自湖南斯萊克景達(dá)實驗動物有限公司[生產(chǎn)許可證號：SCXK（湘）2019-0004]。試驗藥劑右旋糖酐硫酸鈉購自MPBiomedical。

1.2 試驗方法

供試小鼠飼喂于SPF級房間，房間溫度為（ 22±3 ） C ，濕度為（ 50±10 ） % ，光照條件為 12h 的光一暗循環(huán)，參與試驗前先適應(yīng)性飼養(yǎng) 3d_?

試驗周期為 ^7d 。將小鼠隨機分為對照組（NC）DSS模型組（DSS）、低劑量PTPS組（LPTPS）、高劑量PTPS組（HPTPS），每個組6只小鼠。試驗周期內(nèi)，除對照組外，其他3組小鼠用 3.0% （質(zhì)量體積比）的DSS藥液（將DSS溶解于飲用水）代替飲用水，以構(gòu)建潰瘍性結(jié)腸炎模型[11];對照組正常飲水。同時，低、高劑量PTPS組在試驗周期內(nèi)分別每天灌胃200、 400mg/kg 的普洱茶多糖；對照組和DSS模型組灌胃等量的飲用水。

試驗期間，觀察小鼠的體重下降情況（ ?8% ）糞便黏稠度（成半固體或液態(tài)）和糞便出血情況（肉眼可見糞便帶血或肛門出血），從而判斷模型組建模是否成功。

試驗結(jié)束（即第8天），采集小鼠眼眶后靜脈竇的血液，靜置 30min ，離心收集血清。然后處死小鼠，測量結(jié)腸長度并拍照。切除干凈的結(jié)腸遠(yuǎn)端組織，保存在固定試劑中進(jìn)行病理檢查，其余組織用生理鹽水沖洗。所有樣品保存在 -80^°C 冰箱中。

1.3 測定指標(biāo)及方法

1.3.1疾病活動指數(shù)評價根據(jù)既往研究，疾病活動指數(shù)（DiseaseActivityIndex，DAI）可通過體重下降百分比、糞便黏稠度及糞便出血情況3個指標(biāo)來綜合評估[12]，各指標(biāo)的評分標(biāo)準(zhǔn)如表1所示。DAI值為3個指標(biāo)評分之和。

1.3.2組織病理學(xué)評價將遠(yuǎn)端結(jié)腸樣本固定在 4% 多聚甲醛溶液中，石蠟包埋后進(jìn)行蘇木精-伊紅（Hamp;E）染色，在顯微鏡下觀察結(jié)腸病理變化。

1.3.3炎癥因子的測量血清中細(xì)胞因子（ IL-1β 和TNF-α）水平采用酶聯(lián)免疫吸附測定Elisa試劑盒（武漢華美生物工程有限公司），按照說明書進(jìn)行定量測定。

2 結(jié)果與分析

2.1PTPS對潰瘍性結(jié)腸炎小鼠體重變化率及疾病活動指數(shù)評分的影響

如圖1所示，試驗期間，NC組小鼠體重保持穩(wěn)定上升趨勢，而DSS組、LPTLS組和HPTPS組小鼠體重均呈下降趨勢。相較于DSS組，LPTLS組和HPTPS組小鼠體重下降幅度有所減小，其中HPTPS組小鼠體重下降幅度較小。試驗第7天，NC組小鼠體重平均值較試驗前增加了 6.73% ，而DSS組、LPTLS組和HPTPS組小鼠體重平均值較試驗前分別下降 9.22% 、 5.66% 和 3.60% 。

如圖2所示，試驗期間，NC組小鼠未出現(xiàn)不良狀態(tài)，而DSS組、LPTLS組和HPTPS組小鼠均出現(xiàn)糞便黏稠度降低、糞便出血的癥狀。相較于DSS組，LPTLS組和HPTPS組小鼠拉稀便和糞便出血的情況均有所緩解，其中HPTPS組小鼠的緩解效果更好。試驗第7天，NC組小鼠的DAI評分為（ 分，而DSS組、LPTLS組和HPTPS組小鼠DAI評分分別為（ 8.86±1.36 ）（ 5.57±1.79 ）和（ 4.14±0.83 ）分，DSS組DAI評分相比于NC組顯著上升，而LPTLS組和HPTPS組小鼠DAI評分相較于DSS組上升顯著減緩。

綜上所述，不同劑量PTPS干預(yù)對小鼠結(jié)腸炎的發(fā)展有一定的緩解作用，且高劑量干預(yù)的作用更加顯著。

2.2PTPS對潰瘍性結(jié)腸炎小鼠結(jié)腸長度的影響

如圖3所示，NC組、DSS組、LPTPS組和HPTPS組小鼠的平均結(jié)腸長度分別為（ 8.58±0.10 ）（ 6.21±0.44 ）、（ 6.58±0.34 ）和（ 6.64±0.50 ）cm;相較于NC組，DSS組、LPTPS組和HPTPS組小鼠的結(jié)腸長度均有所縮短，其中DSS組縮短程度最顯著。經(jīng)PTPS干預(yù)的LPTPS組和HPTPS組小鼠的結(jié)腸長度縮短程度有所改善，其中HPTPS組小鼠的結(jié)腸長度最接近NC組小鼠的結(jié)腸長度。該結(jié)果表明，PTPS能有效改善因結(jié)腸炎導(dǎo)致的結(jié)腸長度縮短，在一定程度上保護(hù)結(jié)腸組織。

2.3PTPS對結(jié)腸炎小鼠病理學(xué)形態(tài)的影響

如圖4所示，NC組黏膜下隱窩結(jié)構(gòu)完整，無炎癥細(xì)胞浸潤，而DSS組杯狀細(xì)胞缺失，黏膜下隱窩破裂，炎癥細(xì)胞浸潤。相較于DSS組，PTPS干預(yù)后小鼠的結(jié)腸結(jié)構(gòu)損傷、隱窩結(jié)構(gòu)破裂均有所改善，炎癥細(xì)胞浸潤比例也有所下降，其中HPTPS組的效果優(yōu)于LPTPS組。這表明，PTPS干預(yù)能顯著改善結(jié)腸組織損傷，減輕結(jié)腸炎的炎癥程度。

2.4PTPS對潰瘍性結(jié)腸炎小鼠結(jié)腸組織炎癥因子的影響

采用ELISA試劑盒定量檢測各處理小鼠血清中的IL- 1β 、TNF- ??a 等炎癥因子水平，結(jié)果如圖5所示，NC組、DSS組、LPTPS組和HPTPS組小鼠血清中的 IL-1β 炎癥因子水平分別為（ 65.24±11.31 ）、（ 142.55±44.85 ）、（ 72.61±2.97 ）和（ 34.31±4.85 ） ，TNF- σ?a 炎癥因子水平分別為（ 43.34±9.02 ）、（ 115.28±37.86 ）（ 76.22±12.35 ）和（ 85.72±9.03 ）pg/mL ，DSS組小鼠血清中 IL-1β 、TNF- σ?a 等炎癥因子水平明顯上升。而PTPS干預(yù)可以抑制炎癥因子水平的上升，其中HPTPS組小鼠血清中IL- 1β 炎癥因子水平顯著低于DSS組。總的來說，PTPS可以抑制炎癥因子水平上升，從而緩解DSS誘導(dǎo)的小鼠結(jié)腸炎癥狀，高劑量組的效果更好。

3 討論與結(jié)論

近年來，潰瘍性結(jié)腸炎在全球的發(fā)病率顯著上升，已成為全球性的公共衛(wèi)生負(fù)擔(dān)[13]。臨床上用于改善潰瘍性結(jié)腸炎的常用藥物不良反應(yīng)較為顯著，可能引發(fā)嚴(yán)重的過敏反應(yīng)和高熱癥狀，降低骨密度，甚至增加骨折風(fēng)險[14]。因此，開發(fā)高效低毒、改善潰瘍性結(jié)腸炎的天然活性成分備受關(guān)注。多項研究證明，普洱茶具有調(diào)節(jié)腸道菌群、緩解結(jié)腸炎的作用[15-17]

DSS誘導(dǎo)的小鼠潰瘍性結(jié)腸炎具有體重下降、腹瀉便血、結(jié)腸長度萎縮、炎癥因子水平升高等顯著特征[18]。本試驗中，低、高濃度的PTPS處理均有效緩解了小鼠體重下降、腹瀉便血、結(jié)腸長度萎縮、炎癥因子水平升高等癥狀，且高濃度的PTPS處理緩解效果更明顯。有研究表明，普洱熟茶水提物可通過抑制HIF-1α/NF-KB信號通路來改善結(jié)腸炎病情，茯磚茶可通過抑制JAK2/STAT3炎性信號通路來改善DSS誘導(dǎo)的小鼠潰瘍性結(jié)腸炎癥狀，青磚茶可通過增加小鼠腸道中短鏈脂肪酸含量來緩解小鼠潰瘍性結(jié)腸炎癥狀[19-21]

結(jié)腸組織充血、壞死、水腫是潰瘍性結(jié)腸炎的典型特征[22]。Hamp;E染色結(jié)果表明，DSS誘導(dǎo)的結(jié)腸黏膜損傷嚴(yán)重，表現(xiàn)為隱窩和杯狀細(xì)胞缺失，以及明顯的炎癥細(xì)胞浸潤，而PTPS能有效改善這些損傷。這些發(fā)現(xiàn)與PTPS可抑制炎癥因子水平（如IL-1β和TNF- σ?a ）升高有關(guān)。IL-1β作為炎癥反應(yīng)的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子，對宿主的病原體防御至關(guān)重要，也可導(dǎo)致慢性疾病的急性組織損傷[23]。促炎因子（IL-1β和TNF-α）在結(jié)腸炎的發(fā)生發(fā)展中起關(guān)鍵作用[24]，可直接影響潰瘍性結(jié)腸炎的發(fā)病機制[25]。有研究表明，潰瘍性結(jié)腸炎患者血漿中TNF- σ?a 和IL-6的濃度顯著升高，其濃度與結(jié)直腸黏膜炎癥的嚴(yán)重程度呈正相關(guān)，而應(yīng)用TNF- ??a 和IL-6抑制劑可有效抑制腸黏膜炎癥的進(jìn)一步發(fā)展，這進(jìn)一步證實了潰瘍性結(jié)腸炎的發(fā)生發(fā)展與TNF- σ?a 及IL-6的濃度密切相關(guān)[26-27]。本試驗中PTPS抑制炎癥因子水平的升高從而改善DSS誘導(dǎo)的小鼠潰瘍性結(jié)腸炎癥狀的結(jié)果與之一致。還有研究表明，普洱茶可通過調(diào)節(jié)腸道微生物菌群來減輕DSS誘導(dǎo)的小鼠氧化應(yīng)激引起的炎癥[。本研究中PTPS通過減少炎癥因子釋放來改善DSS誘導(dǎo)的小鼠潰瘍性結(jié)腸炎癥狀，但具體機制仍需進(jìn)一步研究。

綜上所述，PTPS具有緩解DSS誘導(dǎo)的小鼠潰瘍性結(jié)腸炎癥狀的功效，具體表現(xiàn)為控制體重下降、抑制結(jié)腸縮短、改善結(jié)腸組織損傷和抑制炎癥因子水平上升。這些發(fā)現(xiàn)不僅為闡明PTPS改善潰瘍性結(jié)腸炎的作用機制提供了依據(jù)，還為潰瘍性結(jié)腸炎新藥物的研發(fā)開辟了新方向。

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（責(zé)任編輯：成平）