江蘇省草莓育苗期主要病害藥劑篩選及安全性評價

摘要：炭疽病和枯萎病是江蘇省草莓育苗期2種主要病害，為篩選有效防治這兩種病害的殺菌劑，采用菌絲生長速率法，測定9種殺菌劑對其致病菌——暹羅炭疽菌和尖孢鐮刀菌的菌絲生長抑制活性，并選擇5種新型殺菌劑開展了田間安全性評價。結(jié)果表明，檢測的9種殺菌劑在培養(yǎng)基中均一定程度抑制2種病原菌的菌絲生長，抑制程度隨藥劑濃度升高而升高。其中，咪鮮胺、氰烯菌酯、腈菌唑和四霉素對2種菌菌絲生長均有較好的抑制效果；溴菌腈、甲基硫菌靈和氰烯菌酯·苯醚甲環(huán)唑?qū)怄哏牭毒z生長的抑制效果優(yōu)于暹羅炭疽菌；苯丙烯菌酮對2種菌的抑制效果均較差；除萎銹靈·福美雙會對草莓植株產(chǎn)生藥害，其他幾種農(nóng)藥均未引發(fā)藥害現(xiàn)象，結(jié)合室內(nèi)毒力測定結(jié)果，初步證明咪鮮胺、氰烯菌酯、腈菌唑和四霉素可用于草莓苗期病害防治。結(jié)果可為南京地區(qū)草莓炭疽病和枯萎病防治藥劑選擇提供參考依據(jù)。

關(guān)鍵詞：草莓；炭疽??；枯萎病；毒力測定；殺菌劑；安全性評價

中圖分類號：S436.68+4" 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號：1002-1302（2025）03-0133-07

王天琪，唐冬蘭，張普娟，等. 江蘇省草莓育苗期主要病害藥劑篩選及安全性評價［J］. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2025，53（3）：133-139.

doi：10.15889/j.issn.1002-1302.2025.03.018

收稿日期：2024-01-03

基金項目：江蘇現(xiàn)代農(nóng)業(yè)（草莓）產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系建設(shè)項目（編號：JATS［2023］008）。

作者簡介：王天琪（1998—），男，江蘇連云港人，碩士，主要從事草莓病害研究。E-mail：2233023312@qq.com。

通信作者：羅志丹，博士，副教授，主要從事分子檢測和藥劑安全性評價方向研究。E-mail：lzd@jou.edu.cn。

草莓（Fragaria×ananassa Duch.）是薔薇科多年生草本植物，果實香味宜人，富含豐富的營養(yǎng)物質(zhì)，深受消費(fèi)者喜愛。隨著經(jīng)濟(jì)的發(fā)展，草莓種植面積逐漸增大，隨之而來的病害問題亦日益嚴(yán)重。育苗是草莓栽培中的重要環(huán)節(jié)，種苗質(zhì)量很大程度決定著后期果實的品質(zhì)與產(chǎn)量，但江蘇省草莓育苗通常在5—8月，正值高溫高濕季節(jié)，適于多種病原菌生長。因此，該時期是草莓生產(chǎn)中病害防治的關(guān)鍵時期［1-2］。

2022年和2023年連續(xù)2年，筆者所在課題組對江蘇13地市的草莓育苗地進(jìn)行了廣泛調(diào)查，通過發(fā)病癥狀及病原菌的分離與鑒定，發(fā)現(xiàn)炭疽病和枯萎病是江蘇省草莓育苗期最主要的2種病害［3-4］。這2種病害除發(fā)病時期相似外，均可侵染草莓的根頸及地下部位，病菌通過根系的傷口或空隙入侵，造成維管束堵塞，影響水分輸送導(dǎo)致地上部萎蔫，表現(xiàn)出新葉沒有光澤，枯萎病還會出現(xiàn)新葉變小和小葉不對稱的現(xiàn)象，隨著病害的發(fā)展最終導(dǎo)致植株死亡。草莓炭疽病還可侵染草莓的地上部各部位，在發(fā)病部位形成褐色或灰黑色病斑。這2種病害的病原菌均有多個種，但在江蘇省其致病菌分別以暹羅炭疽菌（Colletotrichum siamense）［5-6］和尖孢鐮刀菌（Fusarium oxysporum）［7-8］為主。

目前，藥劑防治仍是防治草莓病害的主要措施［9］，但隨著藥劑的頻繁使用，病原菌已逐漸產(chǎn)生抗藥性［10-12］。2009年，韓國興等在杭州地區(qū)分離得到63個草莓炭疽病病原菌菌株，分別檢測到92.1%和93.7%菌株對多菌靈和乙霉威具有抗藥性［12］。2021年，Zhong等發(fā)現(xiàn)來自我國5個省區(qū)草莓植株上的23個暹羅炭疽菌菌株中，有2個菌株對多菌靈表現(xiàn)高抗，21個菌株表現(xiàn)為中抗［11］。

因此，為了豐富防治草莓炭疽病和枯萎病的藥劑品種，緩解其抗藥性的產(chǎn)生，在防治草莓炭疽病和枯萎病時選擇的藥劑更具針對性。同時，達(dá)到減少無效用藥和提高草莓種苗質(zhì)量的目的，本研究開展了藥劑篩選工作，選擇了9種前人研究及應(yīng)用較少、作用機(jī)制不同，但在國內(nèi)登記用于草莓或其他作物炭疽病或枯萎病防治的殺菌劑，對暹羅炭疽菌和尖孢鐮刀菌進(jìn)行室內(nèi)毒力測定，并對5種新型殺菌劑進(jìn)行田間安全性測定，以篩選出安全高效的防治藥劑，為草莓育苗期有效防治枯萎病和炭疽病提供藥劑選擇參考。

1" 材料與方法

1.1" 試驗時間與地點

試驗于2023年8—12月在江蘇丘陵地區(qū)南京農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所微生物實驗室和育苗棚中開展。

1.2" 供試菌株

本研究所用暹羅炭疽菌菌株于2022年9月從江蘇省淮安市草莓育苗地炭疽病病株上分離，尖孢鐮刀菌菌株于2022年6月從江蘇省南京市草莓育苗地枯萎病病株上分離。2個菌株均已按照科赫法則經(jīng)過驗證，用分生孢子懸浮液對植株根頸部位接種一段時間后，在接種部位形成病斑并引起植株萎蔫，從病健交界處組織可分離到與接種菌株一樣的菌株。供試菌株均經(jīng)過單孢純化，保存于滅過菌的25%甘油中，于-80 ℃冰箱長期保存［13］ 。

1.3" 供試藥劑

由表1可知，共10種藥劑，先采用無菌水將各供試藥劑配制成濃度為10 000 μg/mL的母液。根據(jù)藥劑使用說明，參考推薦濃度設(shè)置初始濃度，依次稀釋后進(jìn)行后續(xù)試驗，見表2至表4。

1.4" 不同藥劑對暹羅炭疽菌和尖孢鐮刀菌菌絲生長的影響

對表1中前9種殺菌劑，采用平皿法分別比較其對暹羅炭疽菌和尖孢鐮刀菌菌絲生長的抑制效果［14］。操作如下：將保存的菌種接種至9 cm PDA平板上，于28 ℃條件下暗培養(yǎng)一段時間；并配制含藥培養(yǎng)基，根據(jù)設(shè)計的濃度將供試藥劑的母液配成所需濃度，將配好的PDA培養(yǎng)基加熱至融化，再冷卻至40～50 ℃（此時培養(yǎng)基為未凝固狀態(tài)），此時將藥劑按統(tǒng)一比例加入培養(yǎng)基，充分混勻，倒皿，空白對照（CK）中不加藥劑，采用等量無菌水取代。待菌落直徑達(dá)到適宜大小時，用打孔器從菌落邊緣切出直徑為5 mm的菌餅，放置在供試培養(yǎng)基中央，有菌絲的一面朝上，同樣放置在28 ℃條件下培養(yǎng)。每個處理設(shè)4個重復(fù)，試驗重復(fù)2次。培養(yǎng)約3～5 d，對照菌落直徑達(dá)到培養(yǎng)皿1/2以上，從2個相互垂直的方向測量各處理和對照的菌落直徑，以對照對標(biāo)準(zhǔn)，計算菌絲生長抑制率。計算公式如下：

菌絲生長抑制率=空白對照菌落直徑-藥劑處理菌落直徑空白對照菌落直徑-菌餅直徑×100%。

1.5" 不同藥劑安全性評價

供試草莓品種為紅顏。2023年9月4日選擇壯苗移栽，采用草莓專用育苗基質(zhì)［富蘭農(nóng)業(yè)科技（江蘇）有限公司］，每株保留3～4張葉，雙行定植，株行距18 cm×12 cm。將提前配好的供試藥劑母液采用無菌水稀釋至供試濃度（表4）。采用隨機(jī)區(qū)組設(shè)計，每個處理5個重復(fù)，每個重復(fù)10株苗。分別于2023年9月21日和2023年9月26日施藥，采用灌根法將藥液繞根部灌入土壤中，每株每次用藥量為50 mL，灌施等量無菌水作為空白對照。第2次用藥后10 d進(jìn)行安全性調(diào)查。目測藥劑各試驗濃度對草莓植株有無藥害現(xiàn)象，統(tǒng)計株高及葉片葉綠素相對含量。

1.6" 數(shù)據(jù)分析

采用DPS 7.5軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析。在分析不同藥劑對2種致病菌菌絲生長的抑制效果時，計算毒力回歸方程，得出相關(guān)系數(shù)R和藥劑半最大效應(yīng)濃度（EC50）。

2" 結(jié)果與分析

2.1" 9種殺菌劑對暹羅炭疽菌菌絲生長的抑制作用

由表2可知，9種殺菌劑在供試濃度范圍內(nèi)，對暹羅炭疽菌菌絲生長的相對抑制率在4.77%（0.083 μg/mL苯丙烯菌酮）～98.87%（16.000 μg/mL 咪鮮胺）之間。在每種藥劑的最高供試濃度下，相對抑制率最高的前3種藥劑分別為16.000 μg/mL咪鮮胺（98.87%）、62.500 μg/mL氰烯菌酯（96.72%）和100.000 μg/mL腈菌唑（95.13%）；相對抑制率最低的3種藥劑分別為4.000 μg/mL氰烯菌酯·苯醚甲環(huán)唑（63.46%）、833.333 μg/mL 甲基硫菌靈（59.05%）和 1.333 μg/mL 苯丙烯菌酮（30.22%）。由EC50值觀察，供試9種藥劑毒力從高到低依次為咪鮮胺（0.432 0 μg/mL）、四霉素（0.555 3 μg/mL）、氰烯菌酯·苯醚甲環(huán)唑（1.029 9 μg/mL）、腈菌唑（1.914 7 μg/mL）、溴菌腈（3.017 9 μg/mL）、苯丙烯菌酮（3.767 0 μg/mL）、二氰·吡唑酯（4.377 6 μg/mL）、氰烯菌酯（13.761 2 μg/mL）和甲基硫菌靈（558.795 1 μg/mL）。

2.2" 9種殺菌劑對尖孢鐮刀菌菌絲生長的抑制作用

由表3可知，9種殺菌劑在供試濃度范圍內(nèi)，對尖孢鐮刀菌菌絲生長的相對抑制率在 2.11%（0.083 μg/mL 苯丙烯菌酮）～100.00%（125.000 μg/mL 溴菌腈、450.000 μg/mL咪鮮胺、833.333 μg/mL甲基硫菌靈和4.000 μg/mL四霉素）之間。在每種藥劑的最高供試濃度下，除溴菌腈、咪鮮胺、甲基硫菌靈和四霉素的相對抑制率達(dá)100%外，150.000 μg/mL氰烯菌酯·苯醚甲環(huán)唑、100.000 μg/mL腈菌唑和125.000 μg/mL氰烯菌酯的相對抑制率也可達(dá)90%上，分別為98.97%、91.53%和91.04%，1.333 μg/mL苯丙烯菌酮的相對抑制率最低（16.22%）。毒力分析結(jié)果表明，9種藥劑對尖孢鐮刀菌的EC50值從低到高依次為氰烯菌酯·苯醚甲環(huán)唑（0.454 1 μg/mL）、四霉素（0.618 1 μg/mL）、二氰·吡唑酯（0.987 4 μg/mL）、氰烯菌酯（1.306 6 μg/mL）、腈菌唑（2.985 6 μg/mL）、溴菌腈（4.262 6 μg/mL）、苯丙烯菌酮（14.473 6 μg/mL）、咪鮮胺（18.290 3 μg/mL）和甲基硫菌靈（54.793 6 μg/mL）。

2.3" 田間安全性評價

由圖1可知，第2次采用藥后10 d進(jìn)行調(diào)查，僅有40%萎銹靈·福美雙的處理出現(xiàn)藥害，表現(xiàn)為葉緣或葉脈間褪綠、焦枯，嚴(yán)重者發(fā)展至整個葉片；其他藥劑處理對草莓葉片、葉柄等部位均未造成藥害，生長正常。值得注意的是，用藥20 d后，受藥害影響但未死亡的植株開始恢復(fù)生長。通過SPAD值對比，40%萎銹靈·福美雙引起草莓葉片失綠的癥狀從葉片葉綠素含量可以得到量化體現(xiàn)，該處理植株葉片的SPAD值低于其他處理及對照，差異顯著（Plt;0.05）。由表4可知，從株高來看，40%萎銹靈·福美雙對植株的生長勢也起到一定的抑制作用，株高低于其他藥劑處理及對照，差異顯著（Plt;0.05）。40%萎銹靈·福美雙2 000倍液比800倍液藥害稍嚴(yán)重，但兩者間差異不顯著。

3" 討論與結(jié)論

草莓炭疽病與枯萎病作為草莓生產(chǎn)中2種重要病害，已有關(guān)于其病原菌防治藥劑篩選的報道［15-22］。

這2種病害在草莓育苗期均可發(fā)生，為了觀察對其中一種病害有防治效果的藥劑對另一種病害病原菌是否有抑制效果，本研究選擇9種化學(xué)農(nóng)藥分別調(diào)查了其對草莓炭疽病和枯萎病病原菌的室內(nèi)毒力。其中，除咪鮮胺、四霉素和腈菌唑外，其他農(nóng)藥在前人研究中幾乎沒有報道。根據(jù)中國農(nóng)藥信息網(wǎng)（www.chinapesticide.org.cn）公布的數(shù)據(jù)顯示，咪鮮胺可用于防治草莓炭疽病；二氰·吡唑酯、溴菌腈、腈菌唑可用于防治辣椒、煙草、蘋果等作物炭疽病；氰烯菌酯和氰烯菌酯·苯醚甲環(huán)唑可用于草莓枯萎病的防治；四霉素和萎銹靈·福美雙可用于防治花生、大豆、玉米等作物的根腐病。苯丙烯菌酮和甲基硫菌靈為廣譜性殺菌劑。

供試的9種藥劑對暹羅炭疽菌的室內(nèi)毒力測定結(jié)果表明，EC50值從低到高依次為咪鮮胺、四霉素、氰烯菌酯·苯醚早環(huán)唑、腈菌唑、溴菌腈、苯丙烯菌酮、二氰·吡唑酯、氰烯菌酯和甲基硫菌靈；但在推薦濃度下，氰烯菌酯·苯醚甲環(huán)唑、甲基硫菌靈和苯丙烯菌酮對暹羅炭疽菌的相對抑制率低于80%；四霉素、二氰·吡唑酯和溴菌腈的相對抑制率在80%～90%之間；咪鮮胺、氰烯菌酯和腈菌唑的相對抑制率在90%以上。由此可見，4種用于防治炭疽病的化學(xué)農(nóng)藥（咪鮮胺、腈菌唑、二氰·吡唑酯和溴菌腈）對暹羅炭疽菌均有較好的抑制效果；對尖孢鐮刀菌有抑制效果的氰烯菌酯和四霉素對暹羅炭疽菌也有較好的抑制效果；2種廣譜殺菌劑（甲基硫菌靈和苯丙烯菌酮）使用效果相對較差。姜莉莉等通過盆栽試驗已證實咪鮮胺對草莓炭疽病有較好防治效果［15］。四霉素對炭疽病菌的毒力也得到了鄔劼等證實［16］。

供試的9種藥劑對尖孢鐮刀菌室內(nèi)毒力測定結(jié)果表明，EC50值從低到高依次為氰烯菌酯·苯醚甲環(huán)唑、四霉素、二氰·吡唑酯、氰烯菌酯、腈菌唑、溴菌腈、苯丙烯菌酮、咪鮮胺和甲基硫菌靈；但在推薦濃度下，除了二氰·吡唑酯和苯丙烯菌酮的相對抑菌率分別為86.37%和16.22%，其他藥劑的相對抑菌率均達(dá)90%以上。由此可見，供試的3種用于枯萎病的藥劑、大部分用于炭疽病的藥劑和1種廣譜性殺菌劑（甲基硫菌靈）對尖孢鐮刀菌均有較好的抑制效果；效果最差的是廣譜性殺菌劑苯丙烯菌酮。腈菌唑?qū)怄哏牭毒姆乐涡Ч训玫揭梁ｌo等［17］和楊煥青等［21］證實。

本研究除檢測了9種殺菌劑對暹羅炭疽菌和尖孢鐮刀菌的室內(nèi)毒力，也對幾種抑菌效果較好的殺菌劑及另外一種新型殺菌劑（40%萎銹靈·福美雙）對草莓的安全性進(jìn)行了田間評價，結(jié)果發(fā)現(xiàn)只有施用40%萎銹靈·福美雙的草莓植株出現(xiàn)藥害癥狀，表現(xiàn)為葉片失綠，黃化、焦枯及植株相對矮小，其他藥劑均未引起藥害。

綜上所述，通過田間安全性評價，筆者所在課題組發(fā)現(xiàn)40%萎銹靈·福美雙會對草莓植株產(chǎn)生藥害，不適于草莓病害防治；其他供試藥劑不會引發(fā)草莓藥害，在確保有抑菌效果的情況下均可用于草莓病害防治。通過對9種殺菌劑在暹羅炭疽菌和尖孢鐮刀菌菌絲生長的室內(nèi)抑制效果測定，結(jié)果得出咪鮮胺、氰烯菌酯、腈菌唑和四霉素對暹羅炭疽菌和尖孢鐮刀菌的菌絲生長均有較好的抑制效果，它們分別屬于咪唑類殺菌劑、新型殺菌劑、內(nèi)吸治療性殺菌劑和生物殺菌劑（表1），在生產(chǎn)中使用這些農(nóng)藥可能有機(jī)會減少藥劑使用頻率，通過交替用藥還可延緩抗藥性的產(chǎn)生；溴菌腈、甲基硫菌靈和氰烯菌酯·苯醚甲環(huán)唑?qū)怄哏牭毒z生長的抑制效果優(yōu)于暹羅炭疽菌；苯丙烯菌酮對2種病原菌的菌絲生長抑制效果均較差。本研究可為江蘇地區(qū)草莓炭疽病和枯萎病防治藥劑選擇提供參考依據(jù)。本研究以室內(nèi)試驗為主，在推廣應(yīng)用前，還需進(jìn)一步開展田間藥效試驗。

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