大葉桉家系精油組分及抗菌活性研究

摘 要：為篩選出具有優(yōu)良抗菌活性的大葉桉（Eucalyptus robusta）精油家系，探討家系精油產(chǎn)率組分差異、變化和成分對(duì)抗菌活性的影響。該研究以南寧和武宣的4個(gè)5年生大葉桉家系作為研究對(duì)象，采用鮮葉水蒸氣蒸餾法進(jìn)行桉葉精油提取，鑒定了精油化學(xué)組分，并測(cè)定其對(duì)金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、銅綠假單胞菌和傷寒桿菌的抗菌活性。結(jié)果表明：（1）大葉桉4個(gè)家系桉葉精油組成以73.695%～84.535%的單萜類(lèi)化合物為主，主要組分為蒎烯、水芹烯和對(duì)傘花烴，其中α-蒎烯在大葉桉1號(hào)家系含量可達(dá)41.629%，家系間的共有組分為α-蒎烯、β-蒎烯、α-水芹烯、d-檸檬烯、對(duì)傘花烴、γ-松油烯、4-松油醇和α-松油醇，1，8-桉葉素精油化學(xué)型產(chǎn)油率均較低。（2）不同桉葉精油對(duì)于環(huán)境變化響應(yīng)不同，α-水芹烯、1，8-桉葉素、d-檸檬烯、α-松油醇和對(duì)傘花烴是大葉桉家系精油中的相關(guān)性組分。（3）大葉桉精油對(duì)大腸桿菌、金黃色葡萄球菌和傷寒桿菌具有抗菌活性，甚至3號(hào)家系顯現(xiàn)出高于鏈霉素的抗傷寒桿菌活性，但均未發(fā)現(xiàn)對(duì)銅綠假單胞菌的抗菌活性，而醇酮醛類(lèi)物質(zhì)的增加有利于提高精油抗菌活性。綜上認(rèn)為，大葉桉精油以單萜類(lèi)化合物為主，其中以萜烯類(lèi)化合物含量最高，家系間部分精油組分具有相關(guān)性且存在共有組分，組分中醇類(lèi)、酮類(lèi)和醛類(lèi)化合物有利于抗菌活性的提高，但大葉桉1，8-桉葉素化學(xué)型產(chǎn)油率均較低，仍需進(jìn)一步選育，該研究結(jié)果為大葉桉精油品種選優(yōu)選育及在香料和醫(yī)藥應(yīng)用方面提供了理論依據(jù)。

關(guān)鍵詞：大葉桉，家系，精油，ESKAPE病原菌，抗菌活性

中圖分類(lèi)號(hào)：Q946

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1000-3142（2025）02-0317-11

基金項(xiàng)目：廣西科技重大專(zhuān)項(xiàng) （桂科AA23062055）；廣西林科院基本科研業(yè)務(wù)費(fèi)項(xiàng)目（林科202306號(hào)）；廣西林業(yè)科技推廣示范項(xiàng)目（桂林科研 ［2022第10號(hào)］）。

第一作者：梁勝煥（2000—），碩士研究生，主要從事森林培育與經(jīng)營(yíng)研究，（E-mail）2308033850@qq.com。

^*通信作者：楊梅，博士，教授，博士生導(dǎo)師，主要從事森林培育研究，（E-mail）fjyangmei@126.com。

Essential oil components and antibacterial activities of Eucalyptus robusta families

LIANG Shenghuan^1，2，ZHU Hui²，WEI Yinzhou³，GUO Dongqiang²，YANG Mei^1*

（1. Guangxi Colleges and Universities Key Laboratory for Cultivation and Utilization of Subtropical Forest Plantation，Key Laboratory of National Forestry and Grassland Administration on Cultivation of Fast-Growing Timber in Central South China，College of Forestry，Guangxi University，Nanning 530004，China; 2. Nanning Eucalypt Plantation Ecosystem Observation and Research Station of Guangxi，Guangxi Key Laboratory of Superior Timber Trees Resource Cultivation，Guangxi Forestry Research Institute，Guangxi Forestry Laboratory，Nanning 530002，China; 3. Forestry Bureau of Huanjiang Maonan Autonomous County，Hechi 547100，Guangxi，China）

Abstract：In order to screen for essential oil families of Eucalyptus robusta with excellent antibacterial activities，the study focused on the leaves of four E. robusta families in Nanning and Wuxuan. Fresh leaves of 5-year-old E. robusta were collected for steam distillation essential oil extraction. The chemical components of the essential oils were identified，and their antibacterial activities against Staphylococcus aureus，Escherichia coli，Pseudomonas aeruginosa，and Salmonella typhi were measured. The extracted oil yield，component differences among families，regional response of family essential oils，and effects of essential oil components on antibacterial activities were explored. The results were as follows：（1） The essential oils of four families of Eucalyptus robusta were mainly composed of 73.695% to 84.535% monoterpenoids with the main components being pinene，phellandrene and p-cymene. The α-pinene content in the Family 1 content can reach up to 41.629%，common components among E. robusta families included α-pinene，β-pinene，α-phellandrene，d-limonene，p-cymene，γ-terpinene，4-terpineol，and α-terpineol. The 1，8-cineole chemotype of E. robusta had a low oil production rate. （2） The leaf essential oils of different E. robusta families had different responses to environmental changes. α-phellandrene，1，8-cineole，d-limonene，α-terpineol and p-cymene were correlation components. （3） E. robusta essential oil exhibited antibacterial activities against Eucalyptus coli，Staphylococcus aureus，and Salmonella typhi. Notably，F(xiàn)amily 3 of Eucalyptus robusta showed a higher activity against Salmonella typhi than streptomycin. However，no antibacterial activity against Pseudomonas aeruginosa was observed. An increase in alcohols，ketones，and aldehydes was beneficial for improving its antibacterial activity. In conclusion，E. robusta essential oil is mainly composed of monoterpenoids. Certain essential oil components are correlated，and there are common components among families. Increasing alcohols，ketones，and aldehydes is beneficial for improving the antibacterial activity of E. robusta essential oil. However，the 1，8-cineole chemotype of E. robusta has a low oil production rate，indicating a need for further breeding efforts. This study provides a theoretical basis for the selection and breeding of E. robusta essential oil and their application in spices or medicine.

Key words：Eucalyptus robusta，family，essential oil，ESKAPE pathogens，antibacterial activity

精油（essential oil）是采用現(xiàn)代技術(shù)從植物器官中提取到的揮發(fā)性油狀液體，具有易提取、可生物降解（Zygadlo amp; Grow，1995）、對(duì)脊椎動(dòng)物的毒性較?。↖sman，2000）等優(yōu)良性質(zhì)，在抗菌和藥用等方面均有廣泛使用。當(dāng)下，單一抗菌模式的抗生素濫用使得細(xì)菌耐藥性增加，特別是耐藥型的ESKAPE病原菌（糞球菌、金黃色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌、鮑曼不動(dòng)桿菌、綠膿桿菌和腸桿菌屬）（Naveed et al.，2013; Chouhan et al.，2017; 方美辰等，2021）嚴(yán)重威脅了高等動(dòng)植物的生存，精油中富含的化合物對(duì)于開(kāi)發(fā)新型抗菌藥物以減輕耐藥細(xì)菌的壓力具有重要意義（Hyldgaard et al.，2012; Dhakad et al.，2018）。有研究發(fā)現(xiàn)，桉樹(shù)精油在國(guó)際精油貿(mào)易中居精油首位，是一種含有單萜烯、倍半萜烯、醇、酯、醛和酮等混合物的無(wú)色或淡黃色油狀液體（Khan et al. 2020），具有驚人的生物活性（Dhakad et al.，2018）。植物不同器官精油組分存在差異，由于桉樹(shù)在葉上有專(zhuān)門(mén)的分泌結(jié)構(gòu)，精油主要存于葉中，市場(chǎng)上的桉樹(shù)精油主要以桉葉油為主（Filomeno et al.，2016），因此桉葉精油的研究具有重要意義。目前，桉葉精油研究主要以季節(jié)氣候、不同提取條件下精油產(chǎn)率和抗菌抗氧化能力差異為主，極少有研究不同家系間精油。由于優(yōu)良家系選育是桉樹(shù)遺傳改良中的重要環(huán)節(jié)，因此桉葉家系精油仍然需要進(jìn)一步研究。

大葉桉（Eucalyptus robusta）是桃金娘科桉屬植物，原產(chǎn)澳大利亞?wèn)|南部，1890年左右引進(jìn)我國(guó)，葉子和樹(shù)皮在藥用上具有殺菌和解毒作用，其主要有效成分揮發(fā)油即精油具有很高的抗菌活性（Patrícia et al.，2007; Nagpal et al.，2010; Jian et al.，2012; 陳鋒等，2018）。市場(chǎng)上的桉葉油主要以檸檬桉（Eucalyptus citriodora）和藍(lán)桉（E. globulus）精油為主，而大葉桉在系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)上與藍(lán)桉最為接近（Filomeno et al.，2016; Dhakad et al.，2018; Gao et al.，2021），研究大葉桉家系精油有利于拓寬和增加桉葉精油在香料及醫(yī)藥上的應(yīng)用價(jià)值。目前，在有關(guān)大葉桉精油提取的研究中發(fā)現(xiàn)水是提取大葉桉中富含的酚、黃酮和原花青素等的最佳溶劑，以水為溶劑提取可以獲得更多的酚類(lèi)和類(lèi)黃酮物質(zhì)（Ozen et al.，2011; Dilworth et al.，2017）；桉葉水提物的抗氧化值高于其他桉樹(shù)（Bhuyan et al.，2016）；采用鮮葉提取酚類(lèi)化合物含量比干葉提取物要高幾十上百倍（Pinto et al.，2022）。因此，大葉桉更適合采用工業(yè)常用的水蒸氣蒸餾法提取鮮葉精油（Verdeguer et al.，2009; Puig et al.，2018）?；谝陨涎芯浚瑸榱颂接懘笕~桉家系精油組分及抗菌活性聯(lián)系，本研究采用水蒸氣蒸餾法提取大葉桉鮮葉精油，通過(guò)對(duì)種植在南寧和武宣的4個(gè)不同大葉桉家系精油組分分析，并以銅綠假單胞菌（Pseudomonas aeruginosa）、金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）、傷寒桿菌（Salmonella typhi）和大腸桿菌（Escherichia coli）（它們被認(rèn)為是主要ESKAPE病原菌）作為精油抗菌試驗(yàn)研究對(duì)象，分析家系精油組分、家系精油組分與抗菌能力的聯(lián)系，以期為桉樹(shù)的選優(yōu)選育及在香料和醫(yī)藥應(yīng)用方面提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)地概況

大葉桉家系試驗(yàn)林建于2019年6月，以海拔高度為影響因素布置隨機(jī)區(qū)組試驗(yàn)，高度極差小于10 m，試驗(yàn)設(shè)置3個(gè)區(qū)組，各區(qū)組包含18個(gè)大葉桉家系，各家系小區(qū)內(nèi)重復(fù)數(shù)4，造林密度為2 m × 3 m。廣西南寧市良鳳江和廣西武宣縣六峰山樣地信息如表1所示。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

1.2.1 樣品采集 試驗(yàn)地廣西南寧市、廣西武宣縣（以下分別簡(jiǎn)稱(chēng)南寧、武宣）的采樣時(shí)間分別為2023年9月11日和2023年9月20日，采樣當(dāng)天南寧氣溫26 ℃，中雨；武宣氣溫33 ℃，天氣晴朗。為滿(mǎn)足組分鑒定和抗菌試驗(yàn)需求，根據(jù)各生長(zhǎng)表現(xiàn)選擇較優(yōu)且樣品保存效果最好的1號(hào)、2號(hào)、3號(hào)和4號(hào)共4個(gè)大葉桉家系材料進(jìn)行討論。不同家系在各地區(qū)各區(qū)組重復(fù)中選擇長(zhǎng)勢(shì)良好的2株進(jìn)行采樣，將大葉桉整個(gè)側(cè)枝的葉子收集并在1 h內(nèi)完成，各家系按照地區(qū)進(jìn)行6株樣品混樣。樣品取回后于試驗(yàn)室鋪開(kāi)晾干表面水分后切碎裝瓶。

1.2.2 精油提取 稱(chēng)取剪碎鮮葉樣品約500 g，放入2 000 mL圓底燒瓶中，加水至與電熱套大致齊平保證加熱充分，回流提取4 h，精油經(jīng)提取器分離油水混合物，分離出的精油用足量無(wú)水硫酸鈉脫水干燥，得到精油樣品保存。

1.2.3 精油成分含量檢測(cè) 精油含量計(jì)算采用氣相色譜峰面積歸一化法計(jì)算各成分的相對(duì)百分比含量；精油成分鑒定采用N1ST標(biāo)準(zhǔn)譜庫(kù)檢索及人工解析完成精油組分定性分析，試驗(yàn)方法及儀器條件參考梁忠云等（2014）的精油組分鑒定。

1.2.3.1 氣相色譜-質(zhì)譜定性分析條件 美國(guó)Bruker公司TQ456氣質(zhì)聯(lián)用儀，彈性石英毛細(xì)管柱BR-5（30 m × 0.25 mm × 0.25 μm），載氣為高純氦氣（99.99%），進(jìn)樣量1 μL，分流比110。質(zhì)譜條件：EI離子源，電離電壓70 eV，掃描范圍45～350 amu，全掃描方式。溶劑延遲2 min。進(jìn)樣量1 μL（5%乙醇溶液）。程序升溫：70 ℃保持5 min，以2 ℃·min^-1升至150 ℃，停留5 min，以10 ℃·min^-1升至230 ℃，保持5 min。

1.2.3.2 氣相色譜定量分析條件 Agilent 7890A氣相色譜儀。彈性石英毛細(xì)管柱Rtx-5（30 m × 0.25 mm × 0.25 μm），載氣為氮?dú)?，程序升溫?0 ℃保持5 min，先以2 ℃·min^-1升至150 ℃，停留5 min，再以10 ℃·min^-1升230 ℃，停留10 min，進(jìn)樣口250 ℃，汽化室250 ℃，分流比150，進(jìn)樣量0.3 μL。

1.2.4 抗菌活性測(cè)定 抗菌試驗(yàn)對(duì)象選擇依據(jù)，如表2所示。將不同試驗(yàn)菌菌液濃度調(diào)至0.5麥?zhǔn)蠘?biāo)準(zhǔn)濃度，用無(wú)菌棉簽蘸取菌液，并在上端管壁旋轉(zhuǎn)擠壓幾次，去掉過(guò)多的菌液，涂布整個(gè)瓊脂平皿表面，反復(fù)涂布幾次，每次將平皿旋轉(zhuǎn)60度，保證涂布均勻。接種平板后，貼上每片滴加6 μL樣品溶液的藥敏紙片，用鑷子壓紙片使其與培養(yǎng)基表面貼牢，并用浸泡于生理鹽水的紙片做陰性對(duì)照，金黃色葡萄球菌用青霉素藥敏紙片做陽(yáng)性對(duì)照，大腸桿菌、銅綠假單胞桿菌、傷寒桿菌用鏈霉素藥敏紙片做陽(yáng)性對(duì)照。貼上紙片于15 min內(nèi)，把平板倒放在37 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)18～24 h后觀(guān)察結(jié)果。測(cè)量抑菌環(huán)直徑（包含紙片直徑）：手持平皿從背面目測(cè)檢查每塊平皿，借反射光尺量取抑菌環(huán)直徑（mm）。

2 結(jié)果與分析

2.1 大葉桉家系出油率

南寧和武宣種植的4個(gè)大葉桉家系桉葉干重出油率如圖1所示。不同大葉桉家系桉葉在兩個(gè)地區(qū)出油率范圍為0.313%～0.793%，其中在南寧和武宣大葉桉1號(hào)家系的出油率分別為0.717%和0.793%，均顯著高于其他家系（Plt;0.05），2號(hào)家系在兩個(gè)地區(qū)間的出精油率變化較大，3號(hào)和4號(hào)家系在兩地的出油率均較低。

2.2 精油分析鑒定及差異分析

南寧和武宣種植的4個(gè)大葉桉家系1號(hào)、2號(hào)、3號(hào)和4號(hào)葉片精油成分GC-MS和GC定性定量分析結(jié)果如表3所示。大葉桉精油揮發(fā)性組分共鑒定37個(gè)組分，占總成分的91.999%～97.244%。其中，精油揮發(fā)性組分超過(guò)1%的有α-蒎烯、β-蒎烯、月桂烯、α-水芹烯、α-松油烯、d-檸檬烯、β-水芹烯、對(duì)傘花烴、1，8-桉葉素、γ-松油烯、異松油烯、4-松油醇、異龍腦、α-松油醇、順式檜醇、胡椒酮和β-石竹烯，共計(jì)17個(gè)組分。蒎烯、水芹烯、對(duì)傘花烴、1，8-桉葉素、松油醇、和d-檸檬烯是其主要成分，占揮發(fā)物組分的80.772%～86.774%，其中以在武宣生長(zhǎng)的1號(hào)家系α-蒎烯含量最高，達(dá)41.629%。大葉桉家系精油超過(guò)1%的共有組分有α-蒎烯、β-蒎烯、α-水芹烯、d-檸檬烯、對(duì)傘花烴、γ-松油烯、4-松油醇和α-松油醇，共計(jì)8個(gè)化合物。在南寧生長(zhǎng)的1號(hào)和4號(hào)家系中采收的α-蒎烯含量較武宣的要低，2號(hào)則相反，在武宣生長(zhǎng)的2號(hào)家系β-蒎烯含量則較高；除了3號(hào)家系以外，其余3個(gè)家系在南寧生長(zhǎng)的水芹烯含量均比武宣的要高，而在南寧生長(zhǎng)的3號(hào)家系1，8-桉葉素含量較高。

在南寧和武宣生長(zhǎng)的4個(gè)大葉桉家系的葉片精油揮發(fā)性組分分類(lèi)如表4所示。單萜類(lèi)化合物是其精油的主要成分，含量范圍為73.608%～84.535%，其中單萜烯化合物含量占比為46.283%～77.874%，單萜醇化合物含量占比為5.712%～27.799%；其次為芳香族化合物含量占比為4.570%～18.370%。除了在南寧生長(zhǎng)的3號(hào)家系的單萜醇含量高于武宣生長(zhǎng)的，其余家系單萜醇含量均低于武宣的；所有在南寧生長(zhǎng)的家系芳香族化合物含量均低于武宣的，其中1號(hào)家系和3號(hào)家系相比于2號(hào)家系和4號(hào)家系不明顯；在南寧生長(zhǎng)的2號(hào)家系和4號(hào)家系單萜烯含量較武宣生長(zhǎng)的家系要高，3號(hào)家系則相反，1號(hào)單萜烯含量則相對(duì)穩(wěn)定。

2.3 精油成分相關(guān)性分析

大葉桉桉葉精油大量揮發(fā)性組分相關(guān)性分析如圖2所示。大葉桉各家系桉葉油揮發(fā)性組分中的1，8-桉葉素與d-檸檬烯、α-松油醇分別呈極顯著相關(guān)（Plt;0.01）和顯著正相關(guān)（Plt;0.05），d-檸檬烯與α-松油醇、對(duì)傘花烴分別呈極顯著正相關(guān)（Plt;0.01）和顯著正相關(guān)（Plt;0.05），α-松油醇與對(duì)傘花烴呈顯著正相關(guān)（Plt;0.05）；α-水芹烯與α-松油醇、d-檸檬烯均呈顯著負(fù)相關(guān)（Plt;0.05）?？傮w而言，大葉桉家系桉葉精油揮發(fā)性組分中的1，8-桉葉素、d-檸檬烯、α-松油醇與對(duì)傘花烴組分間存在一定的正相關(guān)。

2.4 精油抗菌活性及主要成分關(guān)聯(lián)分析

2.4.1 精油抗菌活性 大葉桉桉葉精油揮發(fā)性組分抗活性檢測(cè)結(jié)果如表5所示。大葉桉精油揮發(fā)性組分對(duì)于大腸桿菌、傷寒桿菌和金黃色葡萄球菌均具抗菌活性，但均未檢出對(duì)銅綠假單胞菌的抗菌活性。其中，生長(zhǎng)于南寧的1號(hào)和2號(hào)家系大葉桉的桉葉精油抗菌活性均較武宣生長(zhǎng)的要高；生長(zhǎng)于武宣的3號(hào)和4號(hào)大葉桉家系桉葉精油組分對(duì)大腸桿菌的抗菌活性均較南寧生長(zhǎng)的要高，而生長(zhǎng)于南寧的3號(hào)大葉桉家系桉葉精油對(duì)傷寒桿菌和金黃色葡萄球菌的抗菌活性分別高于和低于生長(zhǎng)于武宣的，4號(hào)則相反。此外，生長(zhǎng)于南寧的3號(hào)大葉桉家系桉葉精油，對(duì)傷寒桿菌顯現(xiàn)出來(lái)的抗菌活性比對(duì)照組鏈霉素的要高。

2.4.2 精油主要成分及抗菌活性冗余分析 篩選出兩個(gè)地點(diǎn)生長(zhǎng)的桉葉精油含量大于1%的組分，并將其與對(duì)應(yīng)的抗菌活性進(jìn)行冗余分析（redundancy analysis，RDA），結(jié)果如圖3所示。在約束性成分42.64%下，RDA1與RDA2對(duì)整體解釋量共39.55%；在95%置信橢圓下，南寧和武宣生長(zhǎng)的大葉桉桉葉精油無(wú)明顯規(guī)律性的差異。RDA結(jié)果表明，大腸桿菌抗菌活性與精油中1，8-桉葉素、d-檸檬烯和α-松油醇相關(guān)；傷寒桿菌的抗菌活性與1，8-桉葉素、d-檸檬烯與α-松油醇的含量相關(guān)；金黃色葡萄球菌的抗菌活性則與組分中胡椒酮相關(guān)性最高，同時(shí)還與4-松油醇、α-松油烯、γ-松油烯和異松油烯含量相關(guān)。冗余分析結(jié)果表明，大葉桉桉葉精油的抗菌活性與含量高的成分蒎烯、水芹烯和對(duì)傘花烴均無(wú)正相關(guān)關(guān)系。

3 討論

3.1 大葉桉家系精油組分及產(chǎn)率

本研究中，共鑒定出大葉桉精油組分37個(gè)，占總成分的92.00%～97.24%，各家系精油超過(guò)1%的化合物共有17個(gè)，大葉桉家系精油超過(guò)1%的共有組分有α-蒎烯、β-蒎烯、α-水芹烯、d-檸檬烯、對(duì)傘花烴、γ-松油烯、4-松油醇和α-松油醇共8個(gè)化合物；蒎烯、水芹烯、對(duì)傘花烴、1，8-桉葉素、松油醇、d-檸檬烯是大葉桉精油的主要成分，占精油組分的80.772%～86.774%，精油組分以蒎烯、水芹烯和對(duì)傘花烴為主，其中大葉桉武宣1號(hào)家系的α-蒎烯含量高達(dá)41.629%；精油中單萜類(lèi)化合物組分占73.608%～84.535%，其中單萜烯化合物含量占46.283%～77.874%。在大葉桉精油研究中，葉舟（2007）和孟巧巧等（2020）均發(fā)現(xiàn)其主要成分為α-蒎烯，大葉桉單萜含量高（Patrícia et al.，2007; Atmani-Merabet et al.，2018），相同的，在本研究中大葉桉家系精油以單萜和含氧單萜為主要成分。

在一些大葉桉精油化學(xué)型分類(lèi)研究中，不同地區(qū)大葉桉有α-水芹烯、對(duì)傘花烯和β-蒎烯等化學(xué)型，中國(guó)的大葉桉精油成分則以α-蒎烯和1，8-桉葉素為主（Filomeno et al.，2016; Atmani-Merabet et al.，2018），研究中大葉桉還含有豐富的水芹烯和對(duì)傘花烴，此現(xiàn)象在國(guó)外的研究中出現(xiàn)較多。本研究中，不同家系間的精油主要組分蒎烯、水芹烯、對(duì)傘花烴和1，8-桉葉素含量存在差異，可能存在不同的化學(xué)型。依據(jù)植物因基因與環(huán)境影響而使得精油主要化合物不同可以將精油劃分成不同化學(xué)型（Benomari et al.，2023），相對(duì)于家系從化學(xué)成分差異來(lái)看，大葉桉武宣4號(hào)家系精油屬于1，8-桉葉素化學(xué)型；直接從家系上劃分，3號(hào)家系則屬于1，8-桉葉素化學(xué)型。本研究中，4個(gè)大葉桉家系精油產(chǎn)率為0.313%～0.793%，與陳鋒等（2018）和孟巧巧等（2020）對(duì)大葉桉精油提取所發(fā)現(xiàn)的出油率相近，大葉桉桉葉精油出油率均較低。本研究以南寧和武宣的1號(hào)家系產(chǎn)油率最高，分別為0.717%和0.793%，在南寧和武宣兩個(gè)地點(diǎn)的3號(hào)和4號(hào)（產(chǎn)1，8-桉葉素）兩個(gè)家系產(chǎn)油率均較其他兩個(gè)家系要低。

3.2 大葉桉家系精油組分變化

在兩個(gè)地點(diǎn)4個(gè)大葉桉桉葉精油中，在南寧的大葉桉3號(hào)家系1，8-桉葉素含量較高，而在武宣的4號(hào)家系含量則較高；在武宣的大葉桉1號(hào)、3號(hào)、4號(hào)家系桉葉精油蒎烯含量較高，2號(hào)家系則相反；在南寧的1號(hào)、2號(hào)、4號(hào)家系大葉桉精油水芹烯含量較高，3號(hào)家系則相反。桉葉精油并不穩(wěn)定，無(wú)規(guī)律性的變化，可能是基于引種的大葉桉家系本身屬于不同的精油化學(xué)型，在面對(duì)環(huán)境變化時(shí)調(diào)控方式有所不同（Karimi amp; Meiners，2021）。雖然采樣兩地氣候條件相似，但在采樣當(dāng)天天氣及氣溫存在差異，大葉桉精油組分在武宣出現(xiàn)的1號(hào)、3號(hào)、4號(hào)家系桉葉精油蒎烯較高，可能是受兩地近期水分和氣溫差異的影響。該現(xiàn)象與赤桉葉片在干旱脅迫下比每日澆水處理下葉片中的蒎烯和1，8-桉葉素的高含量表現(xiàn)相同（Leicach et al.，2010）。本研究中的不同家系精油對(duì)于環(huán)境變化具有不同響應(yīng)。

精油屬于代謝產(chǎn)物，同種植物中相關(guān)性化合物可能有共同的代謝途徑（Sá Filho et al.，2022）。對(duì)不同家系大葉桉精油進(jìn)行相關(guān)性分析，發(fā)現(xiàn)主要組分中的α-水芹烯、1，8-桉葉素、d-檸檬烯、α-松油醇和對(duì)傘花烴組分間具有相關(guān)性，是大葉桉精油中的相關(guān)性組分，表明不同家系精油合成與轉(zhuǎn)化可能具有相同代謝途徑。

3.3 大葉桉精油組分與抗菌活性

本研究中的大葉桉桉葉精油具有對(duì)大腸桿菌、傷寒桿菌和金黃色葡萄球菌的抗菌活性，對(duì)于銅綠假單胞桿菌無(wú)抗菌活性或其抗菌活性較低，其中生長(zhǎng)于南寧的大葉桉3號(hào)家系對(duì)傷寒桿菌顯現(xiàn)出來(lái)的抗菌活性比對(duì)照組鏈霉素的要高。前人的研究發(fā)現(xiàn)大葉桉精油對(duì)臨床最具耐藥性的銅綠假單胞菌具有抗菌活性，相比較本研究并未顯現(xiàn)抗菌活性，認(rèn)為微量成分變化影響下不會(huì)引起這種差異。Ameur等（2021）研究的大葉桉精油中含有反式-松香芹醇、香茅醛、冰片和八氫四甲基萘甲醇中量成分，具有銅綠假單胞桿菌抗菌活性，同樣的，當(dāng)大葉桉精油組分中存在桃金娘醛、枯茗醛和匙葉桉葉油醇中量成分時(shí)也表現(xiàn)出銅綠假單胞桿菌抗菌活性（Cimanga et al.，2002）。本研究中所缺少的化合物成分均屬于醇類(lèi)和醛類(lèi)，推斷可能是由于大葉桉精油中的成分需要與這些醇類(lèi)和醛類(lèi)化合物協(xié)同作用才能表現(xiàn)出對(duì)于銅綠假單胞桿菌的抗菌活性。

本研究只有在南寧生長(zhǎng)的3號(hào)家系精油表現(xiàn)出對(duì)傷寒桿菌的抗菌活性超越抗生素抗菌活性水平，其精油成分中1，8-桉葉素含量達(dá)16.759%。在精油組分與抗菌活性的冗余分析顯示，大葉桉桉葉精油對(duì)于大腸桿菌抗菌活性和傷寒桿菌抗菌活性中相關(guān)且含量較高的成分是1，8-桉葉素，精油的抗菌活性提高與其主要成分蒎烯、水芹烯和對(duì)傘花烴均無(wú)正相關(guān)，RDA擬合結(jié)果約束性成分僅為42.64%，抗菌活性源自不同類(lèi)別化合物之間的相互作用（Tariq et al.，2019）。在一些研究中，1，8-桉葉素對(duì)大腸桿菌和金黃色葡萄球菌均具有很強(qiáng)的抗菌活性，能夠影響生物膜形成，抑制大腸桿菌蛋白合成能力，與其他萜烯（如莰烯、α-蒎烯和檸檬烯）結(jié)合，通過(guò)協(xié)同作用，對(duì)金黃色葡萄球菌、大腸桿菌和綠膿桿菌更有效（Hendry et al.，2009; Miguel et al.，2018; Ameur et al.，2021; 王一明，2023）。相同的，本研究中的精油抗菌活性與1，8-桉葉素含量相關(guān)，抗菌活性而精油中各組分相互作用而顯現(xiàn)。對(duì)于精油主要成分烯烴化合物，以往的研究發(fā)現(xiàn)對(duì)傘花烴對(duì)細(xì)菌細(xì)胞膜有很強(qiáng)的親和力，能夠破壞細(xì)胞膜完整性，引起細(xì)胞質(zhì)膜的腫脹（Burt et al.，2007），對(duì)大腸桿菌細(xì)胞的蛋白質(zhì)合成有影響（Chouhan et al.，2017），但在精油組分的分餾抗菌試驗(yàn)中卻發(fā)現(xiàn)單一成分如蒎烯、對(duì)傘花烴、檸檬烯和月桂烯等萜烯類(lèi)化合物，其自身沒(méi)有或者只有較小的抗菌活性，而萜烯對(duì)于破壞真菌特有的細(xì)胞壁似乎更有意義（Hyldgaard et al.，2012）。單獨(dú)測(cè)試精油中的酚類(lèi)、醛類(lèi)、酮類(lèi)、醇類(lèi)和酯類(lèi)化合物均能表現(xiàn)出顯著的抗菌性能，如4-松油醇對(duì)于金黃色葡萄球菌具有很強(qiáng)的抗菌活性（Tariq et al.，2019）。單萜類(lèi)化合物的抗菌主要作用層面是細(xì)菌生物膜，可能是由于萜類(lèi)化合物含氧官能團(tuán)比碳?xì)浠衔锞哂懈玫募?xì)菌生物膜破壞能力（Rao et al.，2019），同樣的，在本研究中對(duì)于革蘭氏陰性菌大腸桿菌和傷寒桿菌，當(dāng)精油中含氧單萜1，8-桉葉素和α-松油醇等含量更高時(shí)則表現(xiàn)出更高的抗菌活性，精油所表現(xiàn)出的抗菌活性提高均與含氧單萜含量相關(guān)。因此，對(duì)于大葉桉桉葉精油抗菌活性的提高，精油組分中含氧單萜的含量增加比其他萜烯成分增加更具有意義。

4 結(jié)論

大葉桉桉葉精油單萜類(lèi)化合物占比為73.695%～84.535%，主要組分是蒎烯、水芹烯和對(duì)傘花烴，其中在武宣生長(zhǎng)的大葉桉1號(hào)家系α-蒎烯含量可達(dá)41.629%，α-蒎烯、β-蒎烯、α-水芹烯、d-檸檬烯、對(duì)傘花烴、γ-松油烯、4-松油醇和α-松油醇是大葉桉家系間的共有組分。雖然不同大葉桉家系精油對(duì)環(huán)境變化響應(yīng)不同，但大葉桉家系精油成分中的α-水芹烯、1，8-桉葉素、d-檸檬烯、α-松油醇與對(duì)傘花烴具有相關(guān)性。大葉桉桉葉精油對(duì)于大腸桿菌、金黃色葡萄球菌和傷寒桿菌具有一定的抗菌活性，其中在南寧生長(zhǎng)的大葉桉3號(hào)家系顯現(xiàn)出較高的抗傷寒桿菌活性。本研究中，大葉桉桉葉精油對(duì)銅綠假單胞菌未表現(xiàn)出抗菌活性，可能是缺少部分醇類(lèi)和醛類(lèi)中量化合物的協(xié)同作用，大葉桉桉葉精油中1，8-桉葉素和松油醇等含氧單萜含量對(duì)于抗菌活性提高具有重要意義，但大葉桉桉葉精油產(chǎn)1，8-桉葉素化學(xué)型的家系產(chǎn)油率較低，仍需要進(jìn)一步選育。

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（責(zé)任編輯 蔣巧媛 王登惠）