和田黑雞、吐魯番斗雞A-FABP、H-FABP基因與IMF關(guān)聯(lián)性分析

摘 要：本試驗采用FQ-PCR法檢測A-FABP、H-FABP基因分別在和田黑雞、吐魯番斗雞心臟、腹脂、胸肌、腿肌中的表達(dá)差異，并分析2種基因的表達(dá)量與IMF沉積的相關(guān)性。結(jié)果表明：（1）和田黑雞胸肌、腿肌IMF含量均明顯高于吐魯番斗雞，且分別高出吐魯番斗雞20.91%（P＜0.01）、14.72%（P＜0.05）；（2）A-FABP基因在和田黑雞心臟、胸肌、腿肌中的表達(dá)量較吐魯番斗雞分別高了11.93%（P＜0.05）、7.50%（P＞0.05）、20.87%（P＜0.01），而腹脂表達(dá)量低于吐魯番斗雞6.27%（P＞0.05）；H-FABP基因在和田黑雞心臟、胸肌和腿肌中的表達(dá)量較吐魯番斗雞分別高了4.67%（P＞0.05）、6.42%（P＞0.05）、14.56%（P＜0.05）；（3）2種品種雞胸肌、腿肌A-FABP基因的表達(dá)與IMF的濃度之間存在正相關(guān)；H-FABP基因的表達(dá)與IMF的濃度之間存在負(fù)相關(guān)。

關(guān)鍵詞：A-FABP基因；H-FABP基因；和田黑雞；吐魯番斗雞；肌內(nèi)脂肪

中圖分類號：S831.2 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：1673-1085（2025）03-0063-06

肌內(nèi)脂肪（IMF）是影響家禽肉質(zhì)的重要因素之一，主要存在于家禽肌肉的肌纖維之間，其含量與家禽的嫩度、多汁性、風(fēng)味等肉質(zhì)特性密切相關(guān)[1]。脂肪酸結(jié)合蛋白A-FABP作為脂肪酸結(jié)合蛋白FABP家族的一員，主要表達(dá)于脂肪細(xì)胞，參與脂肪酸的轉(zhuǎn)運、吸收及酯化過程[2]，對甘油三酯的生成與脂肪分解具有顯著調(diào)控作用[3]。心型脂肪酸結(jié)合蛋白H-FABP是一種重要的細(xì)胞內(nèi)脂肪酸結(jié)合蛋白，它能夠與細(xì)胞內(nèi)的游離脂肪酸結(jié)合，將其運送到細(xì)胞內(nèi)的線粒體或內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中[4-5]，參與脂肪酸氧化過程以及合成過程，從而調(diào)節(jié)脂肪沉積[6-7]。和田黑雞與吐魯番斗雞是新疆優(yōu)良的地方家禽品種，均具備了較強(qiáng)的環(huán)境適應(yīng)力、抗旱、抗風(fēng)沙、抗病性、耐粗放及肉質(zhì)細(xì)嫩、風(fēng)味獨特等特點。截止目前，關(guān)于和田黑雞與吐魯番斗雞肉質(zhì)性狀的研究較少，關(guān)于IMF的研究也鮮見報道，因此本試驗通過分析和田黑雞、吐魯番斗雞不同組織A-FABP和H-FABP基因在其肉質(zhì)中的表達(dá)量，研究2種基因的差異表達(dá)對2個新疆地方品種雞不同組織IMF沉積的影響，并找出2個新疆地方家禽品種肉質(zhì)之間的差異，為后期的研究提供依據(jù)。

1" 試驗材料與方法

1.1" 試驗動物

分別從新疆昆侖尼雅生態(tài)農(nóng)牧發(fā)展有限公司采購和田黑雞（H）種蛋、吐魯番斗雞（T）保種場采購?fù)卖敺冯u種蛋各100枚，在新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科學(xué)院孵化室孵化，在南山哈薩克村養(yǎng)殖示范戶采用地上網(wǎng)養(yǎng)。飼養(yǎng)周期共計16周，整個飼養(yǎng)周期均采用全價配合飼料，統(tǒng)一管理。飼養(yǎng)結(jié)束時分別從2個品種中各選取50只雞，公母對半，禁食12 h后屠宰，采集心臟組織、腹脂放于液氮，之后轉(zhuǎn)-80 ℃超低溫冰箱保存，用于A-FABP、H-FABP基因mRNA分析；采集胴體一側(cè)全部胸肌和腿肌，去除多余脂肪、雞皮后稱重并粉碎裝袋，于-20 ℃保存，用于IMF檢測。

1.2" 基因表達(dá)量分析

1.2.1" 總RNA提取和純度檢測" 各取100 mg心肌組織、腹脂于無菌環(huán)境研磨并混合，RNA試劑盒提取總RNA，取1 μL RNA提取液經(jīng)8 g/L瓊脂糖凝膠電泳驗證純度與完整性，通過分光光度計分析、計算出RNA D260/D280值[8]。

1.2.2" cDNA合成" 根據(jù)王永[5]的實驗方法，利用AMV反轉(zhuǎn)錄酶試劑盒，將A-FABP基因、H-FABP基因的mRNA分別合成cDNA的第1條鏈。

1.2.3" 引物設(shè)計與合成" " 利用Primer 5.0軟件設(shè)計特異性引物[9]，并由上海生物科技有限公司合成，具體參數(shù)見表1。

1.2.4" FQ-PCR法檢測基因表達(dá)差異" 將標(biāo)準(zhǔn)品及已合成的2種基因的cDNA鏈按照一定梯度稀釋，用Mx3000P RT-PCR儀定量分析。將GAPDH基因作為2種基因表達(dá)的內(nèi)參對照。RT-PCR反應(yīng)體系，共15 μL：cDNA產(chǎn)物3 μL，2×Taq Master Mix 10 μL，上、下游引物（終濃度100 nmol/mL）各1 μL均勻混合。反應(yīng)條件：95 ℃初始變性5 min，95 ℃循環(huán)變性30 s，55～60 ℃退火30 s，72 ℃延伸1 min，共40個循環(huán)。將FQ-PCR的分析結(jié)果轉(zhuǎn)換為2種基因的起始拷貝數(shù)Ct值，并根據(jù)不同組織樣品的Ct值，計算出起始模板的拷貝數(shù)。

1.2.5" IMF含量測定" 胸肌、腿肌組織樣品各取5 g，將肉眼可見的脂肪去除、混合后粉碎，以索氏浸提法[9]分別測定樣品中IMF含量。

IMF（%）=（提后總重/提前樣品干物料總重）×100%

1.3" 數(shù)據(jù)處理與分析

2種基因差異表達(dá)通過2-ΔΔCt方法分析。試驗數(shù)據(jù)采用SPSS 21.0進(jìn)行統(tǒng)計分析，通過One-Way ANOVA及Pearson相關(guān)性分析探討2種基因表達(dá)與IMF含量之間的相關(guān)性，結(jié)果用“平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差”（Means±SD）表示，顯著性差異以P＜0.05 amp; P＜0.01表示。

2" 結(jié)果與分析

2.1" RNA純度檢測結(jié)果

經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳檢測可見3個條帶，說明RNA完整性好，可進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄。通過GAPDH基因內(nèi)參對照物的引物對反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物進(jìn)行PCR擴(kuò)增檢測，可檢測到cDNA。

2.4" 和田黑雞、吐魯番斗雞不同組織A-FABP、H-FABP基因表達(dá)差異分析

結(jié)果見表3。A-FABP基因在和田黑雞心肌、胸肌、腿肌中的表達(dá)量較吐魯番斗雞分別高11.93%（P＜0.05）、7.50%（P＞0.05）、20.87%（P＜0.01），而腹脂表達(dá)量低于吐魯番斗雞6.27%（P＞0.05）；H-FABP基因在和田黑雞心肌、胸肌和腿肌中的表達(dá)量較吐魯番斗雞分別高4.67%（P＞0.05）、6.42%（P＞0.05）、14.56%（P＜0.05）。

3" 討論

A-FABP基因作為FABP基因家族中專一在脂肪細(xì)胞中表達(dá)的成員，其在脂肪分解與甘油三酯合成過程中扮演著核心調(diào)控角色，與肌肉組織中的脂肪沉積緊密相關(guān)[10]。多項研究表明，A-FABP基因不僅具有組織特異性分布特征，還對所有類型的脂肪酸展現(xiàn)出高親和力，作為可溶性蛋白質(zhì)在脂肪酸代謝中發(fā)揮著關(guān)鍵作用[11]。李文娟等[12]研究純種北京油雞得到A-FABP基因是影響肌內(nèi)脂肪含量的重要候選基因的結(jié)論，且證實了A-FABP基因在脂肪細(xì)胞中呈現(xiàn)特異性表達(dá)，并與脂類代謝呈現(xiàn)劑量相關(guān)。A-FABP基因在調(diào)控脂肪酸攝取、轉(zhuǎn)運及其生理功能中具有核心地位[13]。屠云潔等[14]研究表明，A-FABP基因表達(dá)量與雞的生長速度有關(guān)，即生長較慢的皋黃雞腹脂和肝臟中A-FABP基因的表達(dá)量顯著高于生長較快的安卡紅雞。從本試驗結(jié)果可見，A-FABP基因在和田黑雞心肌、胸肌、腿肌中的表達(dá)量均高于吐魯番斗雞，而腹脂表達(dá)量低于吐魯番斗雞。和田黑雞屬于地方品種，主要用途為產(chǎn)肉和產(chǎn)蛋，生長周期為5個月；而吐魯番斗雞屬于斗雞品種，生長周期為10個月，和田黑雞的生長速度明顯快于吐魯番斗雞，試驗結(jié)果與屠云潔的結(jié)果相一致。

H-FABP基因是一種在心肌細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)的重要基因，它編碼的心型脂肪酸結(jié)合蛋白對心肌細(xì)胞具有相對特異性。研究表明，H-FABP基因在家禽不同組織中的表達(dá)水平與脂肪沉積密切相關(guān)。如在鹿苑雞和隱性白羽雞的研究中發(fā)現(xiàn)，H-FABP基因的mRNA表達(dá)量與肌內(nèi)脂肪（IMF）含量呈顯著的負(fù)相關(guān)[14]。此外，H-FABP基因可能對于家禽的肉質(zhì)性狀，尤其是肉質(zhì)風(fēng)味具有顯著影響。有研究表明，H-FABP基因中的某些等位基因或基因型組合與家禽的肉質(zhì)風(fēng)味緊密相關(guān)；除了肉質(zhì)風(fēng)味外，H-FABP基因還可能對家禽的屠宰性能、肌纖維密度、谷氨酸、肌苷酸等影響肉質(zhì)風(fēng)味的性狀產(chǎn)生作用。這些性狀的綜合優(yōu)化有助于提升家禽的整體肉質(zhì)品質(zhì)[15]。本試驗結(jié)果顯示，和田黑雞公母雞心肌、胸肌、腿肌H-FABP基因的表達(dá)量均高于吐魯番斗雞，這可能與家禽的脂肪沉積模式和生長發(fā)育速度有關(guān)。

IMF含量是影響家禽肉質(zhì)的重要因素之一。IMF主要存在于家禽肌肉的肌纖維之間，其含量與家禽的嫩度、多汁性、風(fēng)味等肉質(zhì)特性密切相關(guān)。IMF含量較高的家禽肉質(zhì)通常更加鮮嫩多汁，風(fēng)味更佳[16]。IMF在家禽不同組織中的分布并不均勻。一般來說，IMF在胸肌、腿肌等肌肉組織中的含量較高，而在皮下脂肪、腹部脂肪等其他組織中的含量相對較低。這種分布特點可能與家禽的生長發(fā)育過程、遺傳背景以及飼養(yǎng)管理等因素有關(guān)。駱娜等[17-21]研究發(fā)現(xiàn)，IMF含量對肉的風(fēng)味呈負(fù)相關(guān)。本研究發(fā)現(xiàn)，不管是和田黑雞還是吐魯番斗雞，其胸肌、腿肌組織中A-FABP表達(dá)量與IMF沉積呈現(xiàn)正相關(guān)；而H-FABP基因表達(dá)與IMF濃度之間均表現(xiàn)為負(fù)相關(guān)。

4" 結(jié)論

A-FABP基因在和田黑雞、吐魯番斗雞各組織器官中均有表達(dá)，且表達(dá)量與IMF在各組織中的沉積水平呈正相關(guān)；而H-FABP基因在和田黑雞、吐魯番斗雞心肌、胸肌、腿肌中有一定表達(dá)，且表達(dá)量與IMF在各組織中的沉積水平呈負(fù)相關(guān)。A-FABP、H-FABP基因在和田黑雞除腹脂外各組織器官中的表達(dá)量均高于吐魯番斗雞。

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Correlation Analysis between A-FABP， H-FABP Genes and IMF in Hetian Black Chickens and Turpan Fighting Chickens

Gulina·BAKE， ZHAO Chenming

（College of Animal Science， Xinjiang Agricultural University， Urumqi" 830052， China）

Abstract： This experiment used FQ-PCR to detect the expression differences of A-FABP and H-FABP genes in the hearts， abdominal fat， breast muscles， and leg muscles of the Hotan Black chicken and Turpan fighting chicken， and analyzed the correlation between the expression of the two genes and the deposition of IMF. The results showed that： （1）The IMF content in chest muscle and leg muscle of Hetian black chicken was significantly higher than that of Turpan fighting chicken， and was 20.91% （Plt;0.01） and 14.72% （Plt;0.05） higher， respectively; （2） The expression of A-FABP gene in heart， pectoralis and leg muscles of Hetian black chickens was 11.93% （Plt;0.05）， 7.50% （Pgt;0.05） and 20.87% （Plt;0.01） higher than that of Turpan fighting chickens， while the expression of abdominal fat was 6.27% lower than that of Turpan fighting chickens （Pgt;0.05）. The expression of H-FABP gene in the heart， pectoral muscle and leg muscle of Hetian black chickens was 4.67% （Pgt;0.05）， 6.42% （Pgt;0.05） and 14.56% （Plt;0.05） higher than that of Turpan fighting chickens， respectively; （3） There was a positive correlation between the expression of A-FABP gene in breast muscle and leg muscle of the two breeds and the concentration of IMF. There was a negative correlation between the expression of H-FABP gene and the concentration of IMF.

Keywords：" A-FABP gene; H-FABP gene; Hotan black chicken; Turpan fighting chicken; Intramuscular fat

基金項目：自治區(qū)自然科學(xué)基金面上項目（2022D01A68）

通信作者：古麗娜·巴克（1976—），博士，副教授，碩士生導(dǎo)師，主要從事動物營養(yǎng)與飼料科學(xué)研究，E-mail：1092821618@qq.com