遮陽(yáng)對(duì)馬瑟蘭葡萄花色苷組分及合成相關(guān)基因表達(dá)的影響

摘 " "要：【目的】寧夏賀蘭山東麓金山產(chǎn)區(qū)栽培的釀酒葡萄成熟期花色苷積累過(guò)快，降解嚴(yán)重，探討不同轉(zhuǎn)色期遮陽(yáng)對(duì)葡萄果實(shí)花色苷組分及合成相關(guān)基因表達(dá)的影響，為提升葡萄色澤穩(wěn)定性、改善品質(zhì)提供理論依據(jù)?！痉椒ā恳择R瑟蘭釀酒葡萄為試材，在轉(zhuǎn)色初期-采收期（T1）和完全轉(zhuǎn)色期-采收期（T2）采用遮陽(yáng)網(wǎng)對(duì)葡萄樹(shù)體頂端進(jìn)行遮陽(yáng)處理，以正常生長(zhǎng)不遮陽(yáng)的樹(shù)體為空白對(duì)照。采用HPLC方法分析花色苷組分與含量，利用RNA-seq技術(shù)和qRT-PCR技術(shù)研究花色苷合成相關(guān)基因表達(dá)水平?！窘Y(jié)果】遮陽(yáng)可顯著降低馬瑟蘭葡萄果實(shí)成熟期可溶性固形物含量，緩解滴定酸含量下降趨勢(shì)，各處理檢測(cè)到的16種花色苷種類均一致；完全轉(zhuǎn)色期-采收期遮陽(yáng)處理下提高了總花色苷含量，明顯提高了Mv類花色苷含量，同時(shí)也提高了?；ㄉ盏男揎棻壤皇沟肞AL、CHS3、F3’H、F3’5’H、UFGT、GST4和MYB90等花色苷合成相關(guān)基因的表達(dá)量上調(diào)，CHI基因表達(dá)水平與花翠素類（Dp）和花青素類（Cy）含量呈顯著正相關(guān)，MYB5b基因表達(dá)水平與Dp、Cy、甲基花青素類（Pn）及甲基花翠素類（Pt）含量顯著正相關(guān)。qRT-PCR分析發(fā)現(xiàn)，篩選的15個(gè)基因中CHI、F3H、F3’5’H、F3’H、DFR、LDOX、UFGT和OMT在各處理中的表達(dá)水平的變化趨勢(shì)和轉(zhuǎn)錄組測(cè)序不一致，其他基因均一致?！窘Y(jié)論】完全轉(zhuǎn)色期-采收期遮陽(yáng)，促進(jìn)了花色苷的合成，提高了相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄水平，提升了?；ㄉ毡壤?，增加了花色苷顏色的穩(wěn)定性，進(jìn)而提升了葡萄及葡萄酒的色澤穩(wěn)定性。

關(guān)鍵詞：馬瑟蘭葡萄；遮陽(yáng)處理；花色苷；基因表達(dá)

中圖分類號(hào)：S663.1 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號(hào)：1009-9980（2025）01-0030-18

Effects of sun shading on anthocyanin components and the expression of genes related to anthocyanin synthesis in Marselan grape

FU Dongyan1， 2， WANG Lei1， 2， ZHANG Longsheng3

（1Yinchuan Industrial Technology Research Institute， Yinchuan 750011， Ningxia， China; 2Ningxia Helan Mountain East Wine Industry Technology Innovation Center， Yinchuan 750011， Ningxia， China; 3Mengniu Terensu （Yinchuan） Dairy limited Company， Yinchuan 750021， Ningxia， China）

Abstract： 【Objective】 In order to improve the structural stability of anthocyanins in wine grapes， avoid rapid color fading during berry ripening， and enhance the color stability of grapes and wine， we selected Marselan （Vitis vinifera L.） grape as the experimental material， one of the main wine grape varieties grown in the eastern foothills of the Helan Mountains， and investigated the effects of shading at different veraison stages on anthocyanin components and the expression of synthesis-related genes in wine grape. 【Methods】 Using the wine grape Marselan as the test material， the top of grapevines was shaded from the beginning of veraison to the harvest stage， and this treatment was T1. The top of the grapevines was sun-shaded from the complete veraison stage to the harvest stage， which was referred to as T2 treatment. Vines that grew normally without shading served as the control. The shading net adopted a black single-layer shading net with a shading rate of 50% and a specification of 10 meters wide and 25 meters long. All three treatments were designed as a single plot with three biological replicates. High-performance liquid chromatography （HPLC） was used to qualitatively and quantitatively analyze the contents and components of anthocyanins. RNA transcriptome sequencing technology （RNA-seq） and real-time quantitative fluorescence PCR technology （qRT-PCR） were used to investigate the expression levels of genes related to anthocyanin synthesis. 【Results】 Sunshade can significantly reduce the soluble solids content during the ripening period of grape berry， treatments at different stages can increase the titratable acid content of harvested berries， and shading the vine during the complete veraison stage can promote the accumulation of reducing sugar content and total anthocyanin content in the berries. The 16 types of anthocyanins detected in each treatment were consistent， indicating that shading had no effect on the types of grape anthocyanins. Simultaneously， shading treatment increased the modification ratio of grape acylated anthocyanins， increased the stability of anthocyanin structure， and further improved the color stability of anthocyanins. After shading treatment， the contents of delphinidin （Dp）， cyanidin （Cy）， petunidin （Pt） and peonidin （Pn） anthocyanins were significantly reduced， while shading treatment during the complete veraison stage significantly increased the content of malvidin （Mv） anthocyanins， indicating that shading had different effects on anthocyanins at different stages. The synthesis of anthocyanins was influenced by both external environmental factors and the expression of key enzymes involved in the internal regulatory synthesis pathway. The study showed that the expression levels of functional genes related to anthocyanin synthesis were different after shading at various stages. During the initial stage of veraison and shading during the harvesting period， the expression levels of CHI， DFR and OMT genes were upregulated compared to other treatments， with DFR and OMT reaching significant levels during the harvesting stage. During the complete veraison stage and shading during the harvesting stage， the expression levels of PAL， CHS3， F3’H， F3’5’H， UFGT， GST4 and MYB90 genes were upregulated compared to other treatments during the harvesting stage. qRT-PCR analysis revealed that among the 15 screened genes， the expression levels of CHI， F3H， F3’5’H， F3’H， DFR， LDOX， UFGT and OMT showed inconsistent trends with transcriptome sequencing in each treatment， while the changes in other genes were consistent with transcriptome sequencing results. 【Conclusion】 There was no significant difference in the effect of shading during the initial veraison stage and the complete veraison stage on berry quality. The complete veraison stage shading increased the transcription level of anthocyanin synthesis related genes， promoted anthocyanin synthesis， increased the total anthocyanin content of grapes， and significantly increased the content of Mv class anthocyanins. At the same time， complete shading during the veraison stage increased the modification ratio of acylated anthocyanins， and enhanced the stability of anthocyanin color， which provided a theoretical basis for effectively alleviating the problem of rapid color fading caused by unstable anthocyanin structure in grapes and wines. F3’H and F3’5’H played a crucial role in the biosynthesis pathway of anthocyanins， and the ratio of Cy class anthocyanins catalyzed by F3’H to Dp class anthocyanins catalyzed by F3’5’H affected the color of berry peels. This study found that during the early veraiosn stage， when shading and harvesting， the expression of F3’H was up-regulated and the expression of F3’5’H was down-regulated. During the complete veraison stage of shading， both F3’H and F3’5’H were up-regulated during harvesting. However， the Cy and Dp anthocyanin contents with the shading treatment during the initial veraison stage were significantly higher than those with the shading treatment during the complete veraison stage. Perhaps due to the significant positive correlation between CHI expression level Cy and Dp content， and the significantly higher CHI expression level with shading treatment during the early veraison stage compared to shading treatment during the complete veraison stage， the Cy and Dp content with shading treatment during the early veraison stage was significantly higher than that with shading treatment during the complete veraison stage. There may be differential expression of other key genes， leading to differences in Cy and Dp contents， which requires further research.

Key words： Marselan grape; Sunshade treatment; Anthocyanins; Gene expression

花色苷是花色素與糖以糖苷鍵結(jié)合而成的酚類化合物，主要呈現(xiàn)紅色、紫色或藍(lán)色，是葡萄與葡萄酒的重要呈色物質(zhì)。花色苷根據(jù)結(jié)構(gòu)可分為基本花色苷和經(jīng)過(guò)修飾的衍生物（糖基化花色苷、甲基化花色苷和?；ㄉ眨谄咸押推咸丫浦?，?；ㄉ找蚓哂休^高的穩(wěn)定性而發(fā)揮著關(guān)鍵作用[1-2]。歐亞種葡萄中主要含有花青素、花翠素、甲基花青素、甲基花翠素和二甲花翠素五種花色苷[3]。葡萄果實(shí)中花色苷的組分及含量不僅受到基因型、激素水平的影響，還受到光照、溫度、栽培條件等環(huán)境因素的影響[4-5]。有研究表明，不同光照條件，影響葡萄果實(shí)花色苷的合成，進(jìn)而影響果實(shí)著色[6-7]。目前則通過(guò)遮陽(yáng)網(wǎng)覆蓋、去除葉片以及鋪設(shè)反光膜等方法研究果實(shí)顏色的變化[8-9]。研究發(fā)現(xiàn)，鮮食葡萄栽培中用遮陽(yáng)網(wǎng)可對(duì)葡萄果實(shí)大小、糖和酸含量產(chǎn)生影響，進(jìn)而調(diào)節(jié)葡萄果實(shí)的成熟期[10-11]。赤霞珠葡萄經(jīng)遮光處理后，可溶性固形物、總糖和總花色苷含量顯著下降，總酸及酚類物質(zhì)含量則上升，適當(dāng)?shù)卣诠?，可延遲采收期，有效提升葡萄品質(zhì)[12]。釀酒葡萄通過(guò)遮陽(yáng)處理，可以改善葡萄生長(zhǎng)微氣候，顯著減緩葡萄果實(shí)中糖分的迅速增加和有機(jī)酸的快速分解，增加葡萄和葡萄酒中多酚和單寧的濃度，減少花色苷和類黃酮的濃度；在果實(shí)成熟期間，遮光處理會(huì)干擾光合作用，從而導(dǎo)致與糖類代謝相關(guān)的酶基因表達(dá)發(fā)生變化[13]。研究表明，通過(guò)不同溫度和光照處理，在較低溫度和充足光照條件下，花色苷的合成得到顯著增強(qiáng)；而在高溫環(huán)境或無(wú)光條件下，花色苷合成酶基因的活性受到明顯抑制，環(huán)境條件和遺傳因素共同調(diào)控著花色苷的合成[14]。

寧夏賀蘭山東麓金山產(chǎn)區(qū)晝夜溫差大，光照強(qiáng)、光照時(shí)間長(zhǎng)，導(dǎo)致葡萄過(guò)快成熟、糖分高、酸度低，花色苷快速積累又迅速降解，釀造的葡萄酒酒精度較高，色澤凋零較快等問(wèn)題日漸突出。因此，為有效降低光照度和光照時(shí)間，提升葡萄果實(shí)花色苷組分及結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性，緩解色澤過(guò)快凋零的問(wèn)題，提升葡萄及葡萄酒品質(zhì)，筆者在本研究中選取馬瑟蘭葡萄，在轉(zhuǎn)色期至成熟期進(jìn)行遮陽(yáng)處理，探究不同時(shí)期遮陽(yáng)對(duì)花色苷組分積累及合成相關(guān)基因表達(dá)量的影響，以期為有效提高花色苷結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性，改善葡萄及葡萄酒的色澤，提升品質(zhì)提供理論依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 材料

供試品種為賀蘭山東麓金山產(chǎn)區(qū)夏木酒莊（38°42′49″ N，106°4′11″ E）葡萄園內(nèi)10年生釀酒葡萄馬瑟蘭（Vitis vinifera ‘Marselan’），樹(shù)勢(shì)中庸，株行距為0.7 m×3.5 m，南北行向，礫石土壤，透氣性好。遮陽(yáng)網(wǎng)為兩針普通型，黑色單層，遮光率為50%，規(guī)格為10 m×25 m。設(shè)置3個(gè)處理，以正常生長(zhǎng)不遮陽(yáng)為空白對(duì)照（CK），T1為轉(zhuǎn)色初期至采收期樹(shù)體頂端遮陽(yáng)（7月25日至9月19日：花后50～106 d），T2為完全轉(zhuǎn)色期至采收期樹(shù)體頂端遮陽(yáng)（8月8日至9月19日：花后64～106 d），每個(gè)處理設(shè)置3次重復(fù)。

1.2 方法

1.2.1 樣品采集與處理 處理后每隔7 d采集1次樣品，至花后106 d果實(shí)采收，T1共取樣8次（花后57～106 d），T2共取樣6次（花后71～106 d）。采樣時(shí)兼顧果穗的陰、陽(yáng)面，果穗的上、中、下部隨機(jī)選取果粒飽滿、大小均勻的果實(shí)300粒，帶回實(shí)驗(yàn)室用液氮速凍，置于冰箱（-80 ℃）保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 理化指標(biāo)檢測(cè) 樣品帶回實(shí)驗(yàn)室后，立即進(jìn)行可溶性固形物、可滴定酸和還原糖含量等理化指標(biāo)檢測(cè)。從不同處理的果實(shí)樣品中隨機(jī)取出約40粒，分別榨成勻漿、過(guò)濾，用手持糖度計(jì)測(cè)定可溶性固形物含量；采用斐林試劑法測(cè)定還原糖含量；采用指示劑滴定法，以酒石酸作為基準(zhǔn)物質(zhì)，測(cè)定樣品可滴定酸含量[15]。

1.2.3 花色苷定性定量分析檢測(cè) 花色苷提?。簠⒖纪跏?zhèn)サ萚16]的方法，提取花色苷過(guò)0.22 μm有機(jī)相濾膜。應(yīng)用超高效液相色譜（UPLC）、光電二極管陣列檢測(cè)器（PDA）和電噴霧離子化質(zhì)譜（ESI）綜合分析技術(shù)（UPLC-PDA-MS/MS-ESI），上樣進(jìn)行分析。

花色苷檢測(cè)：葡萄果實(shí)中花色苷類物質(zhì)測(cè)定方法參照王博[17]和Liang等[18]的略有改動(dòng)。質(zhì)譜條件，電噴霧（ESI）離子源，多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（multiple reaction monitoring，MRM）模式，離子源溫度為150 ℃，脫溶劑氣溫度為400 ℃，脫溶劑氣的流量為800 L·h-1，錐孔氣的流速為50 L·h-1，以及碰撞氣（通常使用高純氬氣）的流速為0.14 mL·min-1。色譜條件，色譜柱為Waters ACQUITY UPLC? HSS T3（2.1 mm×150 mm，1.8 μm）；乙腈作為流動(dòng)相A，5%甲酸溶液作為流動(dòng)相B，進(jìn)樣量設(shè)定為2.0 μL，流速控制在0.3 mL·min-1，保持柱溫40 ℃；洗脫梯度：0～1.0 min（5%～10% A），1.0～16 min（10%～25% A），16～18 min（25%～40% A），18～19 min（40%～100% A），20 min回到初始狀態(tài)，平衡10 min。檢測(cè)器波長(zhǎng)設(shè)置為520 nm。

1.2.4 轉(zhuǎn)錄組分析 RNA提取、建庫(kù)：使用植物RNA提取試劑盒從葡萄中分離出總RNA，參考韋偉等[19]的方法，通過(guò)Nanodrop 2000儀器測(cè)量RNA樣品的濃度與純度，利用瓊脂糖凝膠電泳技術(shù)評(píng)估RNA的完整性，并借助Agilent 5300設(shè)備計(jì)算RNA完整性數(shù)值（RIN）。利用Oligo（dT）磁珠法純化總RNA的mRNA，并將mRNA進(jìn)行隨機(jī)打斷，形成片段，以mRNA片段為模板合成cDNA，為了適合后續(xù)測(cè)序分析，將雙鏈cDNA的黏性末端修復(fù)為平末端。構(gòu)建的cDNA文庫(kù)在Illumimna Novaseq 6000平臺(tái)（上海美吉生物醫(yī)藥科技有限公司）進(jìn)行測(cè)序。

測(cè)序數(shù)據(jù)分析：對(duì)原始測(cè)序數(shù)據(jù)進(jìn)行過(guò)濾得到高質(zhì)量的測(cè)序數(shù)據(jù)，使用Hisat2軟件與參考基因組進(jìn)行比對(duì)，并評(píng)估結(jié)果。使用RSEM軟件對(duì)基因的表達(dá)水平進(jìn)行定量分析，利用DESeq2軟件，篩選標(biāo)準(zhǔn)為表達(dá)差異倍數(shù)|log2FC|≧l和校正過(guò)的P值（P-adjust＜0.05），進(jìn)行基因差異表達(dá)分析，篩選出的差異表達(dá)基因進(jìn)行KEGG富集分析。

1.2.5 基因表達(dá)量分析 qRT-PCR驗(yàn)證：使用MJZol total RNA extraction kit（上海美吉生物醫(yī)藥科技有限公司）試劑盒提取總RNA，使用HiScript Q RT SuperMix for qPCR （+gDNA wiper）（南京諾唯贊生物科技有限公司）試劑盒反轉(zhuǎn)錄為cDNA，使用ChamQ SYBR Color qPCR Master Mix （2X）（南京諾唯贊生物科技有限公司）試劑盒，用熒光定量PCR儀（ABI7300型，美國(guó)）進(jìn)行qRT-PCR檢測(cè)，選用GAPDH基因作為內(nèi)參基因。優(yōu)化后的條件為預(yù)變性95 ℃ 5 min，變性95 ℃ 30 s，退火50～55 ℃ 30 s，35個(gè)循環(huán)，延伸72 ℃ 1 min。運(yùn)用2-△△CT算法計(jì)算相對(duì)表達(dá)量。特異性引物信息見(jiàn)表1。

1.3 數(shù)據(jù)處理

采用Microsoft office 2013進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，使用Origin 2024繪圖。利用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行顯著性和相關(guān)性分析，采用單因素方差分析法（one-way ANOVA）和Duncan法進(jìn)行方差分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 遮陽(yáng)對(duì)葡萄果實(shí)品質(zhì)的影響

由表2可以看出，隨著果實(shí)逐漸成熟所有處理的可溶性固形物含量（w，后同）均呈上升趨勢(shì)且在采收期達(dá)到最大值。對(duì)照為31.47%，T1為27.53%，T2為29.13%，差異達(dá)顯著水平。遮陽(yáng)可明顯降低果實(shí)可溶性固形物含量。

隨著果實(shí)轉(zhuǎn)色至成熟各處理的滴定酸含量逐漸減少（表3），其中花后57～71 d，正值果實(shí)轉(zhuǎn)色初期至完全轉(zhuǎn)色期階段，此階段的各處理滴定酸含量（ρ，后同）迅速下降，對(duì)照由19.00 g·L-1降為4.19 g·L-1，T1由19.56 g·L-1降為4.38 g·L-1。果實(shí)成熟期對(duì)照滴定酸含量為3.06 g·L-1，T1為3.19 g·L-1，T2為3.16 g·L-1，說(shuō)明遮陽(yáng)處理可減緩成熟期果實(shí)滴定酸含量的下降趨勢(shì)，各處理差異不顯著。

表4顯示，隨著果實(shí)轉(zhuǎn)色成熟各處理的還原糖含量呈上升趨勢(shì)，采收期對(duì)照還原糖含量達(dá)到243.27 g·L-1，T1為214.47 g·L-1，差異顯著，說(shuō)明轉(zhuǎn)色初期對(duì)樹(shù)體進(jìn)行遮陽(yáng)處理明顯減少了果實(shí)還原糖的積累量；T2為259.02 g·L-1顯著高于對(duì)照的含量，說(shuō)明完全轉(zhuǎn)色期對(duì)樹(shù)體進(jìn)行遮陽(yáng)可促進(jìn)果實(shí)還原糖的積累。

由圖1可以看出，隨著果實(shí)轉(zhuǎn)色成熟，各處理的糖酸比均呈現(xiàn)逐漸上升而后下降又略有上升的變化趨勢(shì)，且對(duì)照和T2處理的糖酸比始終高于T1處理，果實(shí)采收期時(shí)T2的糖酸比比T1提高了21.63%，差異達(dá)顯著水平；比對(duì)照提高了3.23%，差異不顯著。

2.2 遮陽(yáng)處理對(duì)葡萄花色苷組分及含量的影響

2.2.1 遮陽(yáng)處理對(duì)馬瑟蘭葡萄花色苷組分的影響 對(duì)馬瑟蘭葡萄果實(shí)花后57～106 d各處理進(jìn)行花色苷組分檢測(cè)，對(duì)照、T1和T2中檢測(cè)到的16種花色苷中（表5），其中，花翠素類（Delphinidin，Dp）3種，花青素類（Cyanidin，Cy）3種，甲基花翠素類（Petunidin，Pt）3種，甲基花青素類（Peonidin，Pn）3種，二甲基花翠素類（Malvidin，Mv）4種，各處理的花色苷種類均一致，由此說(shuō)明遮陽(yáng)處理不會(huì)改變葡萄果實(shí)中花色苷的組成。

2.2.2 遮陽(yáng)處理對(duì)馬瑟蘭葡萄花色苷酰化修飾成分相對(duì)含量的影響 由表6可知，在采收期的馬瑟蘭葡萄中主要檢測(cè)到的?；惢ㄉ諡橐阴；惡拖愣辊；?類。各處理中，?；揎棾煞窒鄬?duì)含量在36.06%～43.89%，T2的?；惢ㄉ障鄬?duì)含量最高為43.89%，對(duì)照的?；惢ㄉ障鄬?duì)含量最低為36.06%。由此說(shuō)明，轉(zhuǎn)色期遮陽(yáng)可提高葡萄果實(shí)中?；ㄉ盏谋壤M(jìn)而提高花色苷的穩(wěn)定性。

2.2.3 遮陽(yáng)處理對(duì)馬瑟蘭葡萄花色苷含量的影響 葡萄轉(zhuǎn)色至采收期，馬瑟蘭葡萄果實(shí)中的總花色苷含量呈先上升后下降的波動(dòng)變化趨勢(shì)（圖2-A），花后99 d時(shí)達(dá)到最大，且對(duì)照的總花色苷含量顯著高于T1（轉(zhuǎn)色初期-采收期對(duì)樹(shù)體頂端遮陽(yáng)）和T2（完全轉(zhuǎn)色期-采收期對(duì)樹(shù)體頂端遮陽(yáng)）的總花色苷含量，對(duì)照為2.19 mg·g-1，比T1增加了83.11%，比T2增加了13.82%。至花后106 d葡萄采收時(shí)總花色苷含量增幅減緩，含量有所下降，此時(shí)T2的總花色苷含量最高，且T2與T1的差異達(dá)顯著水平，T2與對(duì)照差異不顯著。

由圖2-B可知，葡萄果實(shí)從轉(zhuǎn)色至采收，花翠素（Dp）含量呈波動(dòng)變化趨勢(shì)，對(duì)照的Dp含量在花后99 d時(shí)達(dá)到最高，為0.22 mg·g-1，比T1高了248.44%，比T2高了13.20%，差異均達(dá)顯著水平；T1在花后71 d時(shí)達(dá)到最高，為0.08 mg·g-1，比對(duì)照降低了21.90%，比T2降低了57.07%，且差異達(dá)顯著水平；T2在花后85 d達(dá)到最高，為0.23 mg·g-1，且Dp含量顯著高于對(duì)照和T1，比對(duì)照高了159.77%，比T1高了326.42%。至葡萄采收時(shí)，各處理的Dp含量均降低，對(duì)照的Dp含量高于T1和T2的，且各處理間差異顯著。

葡萄果實(shí)從轉(zhuǎn)色至采收，花青素（Cy）含量的變化趨勢(shì)同Dp相似（圖2-C），其中對(duì)照的Cy含量在花后99 d達(dá)到最高，為0.03 mg·g-1，比T1高了350%，差異達(dá)顯著水平，比T2高了3.85%，差異不顯著；T1的Cy含量在花后71 d時(shí)達(dá)到最高，為0.01 mg·g-1，比T2降低了48%，且差異達(dá)顯著水平；T2在花后85 d時(shí)Cy含量達(dá)到最高，為0.03 mg·g-1，且Cy含量顯著高于對(duì)照和T1，比對(duì)照高了211.11%，比T2高了366.67%。葡萄采收時(shí)，對(duì)照的Cy含量顯著高于T1和T2的Cy含量，由此說(shuō)明，遮陽(yáng)明顯抑制了Cy含量的積累，且T2比T1的抑制作用更顯著。

隨著葡萄果實(shí)轉(zhuǎn)色至采收，對(duì)照的甲基花翠素（Pt）含量在花后99 d達(dá)到最高，為0.22 mg·g-1，比T1高了200%，比T2高了10.20%，差異達(dá)顯著水平；T1的Pt含量在花后71 d時(shí)達(dá)到最高，為0.09 mg·g-1，比對(duì)照降低了19.27%，比T2降低了51.65%，差異均達(dá)到顯著水平；T2在花后85 d時(shí)Pt含量達(dá)到最高，為0.21 mg·g-1，且Pt含量顯著高于對(duì)照和T1，比對(duì)照高了113.27%，比T2高了254.24%。葡萄采收時(shí)，對(duì)照的Pt含量顯著高于T1、T2的Pt含量，說(shuō)明遮陽(yáng)減緩了Pt含量的積累，T1與T2無(wú)顯著差異（圖2-D）。

由圖2-E可知，馬瑟蘭葡萄果實(shí)轉(zhuǎn)色至采收，對(duì)照的甲基花青素（Pn）含量在花后99 d達(dá)到最高，為0.16 mg·g-1，比T1高了376.67%，比T2高了15.56%，差異均達(dá)顯著水平；T1的Pn含量在花后106 d時(shí)達(dá)到最高，為0.06 mg·g-1，比對(duì)照降低了16.22%，比T2增加了19.23%，且差異均達(dá)顯著水平；T2在花后85 d時(shí)Pn含量達(dá)到最高，為0.14 mg·g-1，且Pn含量顯著高于對(duì)照和T1，比對(duì)照高114.06%，比T2高341.94%。葡萄采收時(shí)，對(duì)照的Pn含量顯著高于T1、T2的Pn含量，由此說(shuō)明，遮陽(yáng)明顯抑制了Pn含量的積累，且T2比T1的抑制作用更顯著。

葡萄果實(shí)轉(zhuǎn)色至采收期，二甲花翠素類（Mv）含量逐漸增加（圖2-F），對(duì)照、T1和T2的Mv含量均在花后99 d達(dá)到最大，且對(duì)照的Mv含量最高，為1.59 mg·g-1，比T1的Mv含量高55.57%，比T2高14.19%，差異均達(dá)到顯著水平。葡萄采收時(shí)，各處理的Mv含量均有所下降，T2的Mv含量高于對(duì)照和T1的Mv含量，且有顯著差異，對(duì)照和T1無(wú)顯著差異。

2.3 遮陽(yáng)處理對(duì)馬瑟蘭葡萄花色苷轉(zhuǎn)錄組的影響

在Illumimna Novaseq 6000平臺(tái)完成了花后71 d和花后99 d的對(duì)照、T1和T2共6個(gè)樣品的轉(zhuǎn)錄組分析，為了保證數(shù)據(jù)質(zhì)量，在信息分析前對(duì)原始數(shù)據(jù)進(jìn)行質(zhì)控，過(guò)濾后的Clean reads在44 236 559和48 151 904之間，Q20在96.35%和96.73%之間，Q30在93.94%和94.39%之間，Clean reads數(shù)量最多的為花后71 d的對(duì)照樣本，數(shù)量最少的為花后99 d的T1樣本（表7）。

經(jīng)比對(duì)統(tǒng)計(jì)分析，花后99 d時(shí)，對(duì)照樣本的Total mapped最多，達(dá)到43 804 344個(gè)，T1樣本的最少，為40 408 372個(gè)。Multiple mapped比例為2.74%～3.58%，花后99 d的對(duì)照樣本最小，花后71 d的T2樣本最大，Uniquely mapped數(shù)量在39 043 793～41 759 326之間，Uniquely mapped的比例為86.70%～89.29%（表8）。

對(duì)樣本關(guān)系分析（圖3）發(fā)現(xiàn)，馬瑟蘭葡萄在花后71 d和花后99 d，各處理共有基因?yàn)?4394個(gè)，花后71 d，對(duì)照、T1、T2特有基因分別為160個(gè)、74個(gè)、34個(gè)，花后99 d，對(duì)照、T1、T2特有基因分別為177個(gè)、45個(gè)、193個(gè)。

不同處理與對(duì)照比較，基因表達(dá)量差異如圖4所示，對(duì)照（花后99 d）vs T1（花后99 d）下調(diào)基因和上調(diào)基因數(shù)目均為最多，其中，下調(diào)基因達(dá)到1393個(gè)，上調(diào)基因達(dá)到979個(gè)，對(duì)照（花后71 d）vs T1（花后71 d）下調(diào)基因544個(gè)，上調(diào)基因220個(gè)，對(duì)照（花后71 d）vs T2（花后71 d）下調(diào)基因達(dá)到740個(gè)，上調(diào)基因83個(gè)。對(duì)照（花后99 d）vs T2（花后99 d）上調(diào)基因289個(gè)，下調(diào)基因330個(gè)。

不同遮陽(yáng)處理的基因集分析如圖5，對(duì)照（花后71 d）vs T1（花后71 d）、對(duì)照（花后71 d）vs T2（花后71 d）、對(duì)照（花后99 d）vs T1（花后99 d）和 對(duì)照（花后99 d）vs T2（花后99 d）之間共有基因36個(gè)；對(duì)照（花后71 d）vs T1（花后71 d）和對(duì)照（花后71 d）vs T2（花后71 d）共有基因428個(gè)，對(duì)照（花后99 d）vs T1（花后99 d）和 對(duì)照（花后99 d）vs T2（花后99 d）共有基因442個(gè)；對(duì)照（花后71 d）vs T1（花后71 d）特有基因208個(gè)，對(duì)照（花后71 d）vs T2（花后71 d）特有基因231個(gè)，對(duì)照（花后99 d）vs T1（花后99 d）特有基因1682個(gè)，對(duì)照（花后99 d）vs T2（花后99 d）特有基因118個(gè)。

KEGG富集分析揭示了馬瑟蘭葡萄在轉(zhuǎn)色期顯著差異基因主要參與的代謝途徑和信號(hào)通路?；ㄉ帐峭ㄟ^(guò)類黃酮代謝途徑中的特定分支進(jìn)行生物合成的，該途徑也被富集出來(lái)（圖6、圖7）?；ê?1 d代謝通路的KEGG富集分析（圖6），以P-adjust＜0.05為標(biāo)準(zhǔn)對(duì)兩兩比較后的代謝通路進(jìn)行選擇，對(duì)照（花后71 d）vs T1（花后71 d）和對(duì)照（花后71 d）vs T2（花后71 d）中，分別有8個(gè)和12個(gè)代謝途徑被顯著富集。對(duì)照（花后71 d）vs T1（花后71 d）中最顯著的幾個(gè)代謝途徑為半乳糖代謝（Galactose metabolism）、植物激素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)（Plant hormone signal transduction）、光合作用-天線蛋白（Photosynthesis -antenna proteins）、ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白（ABC transporters）、二萜生物合成（Diterpenoid biosynthesis）、淀粉和蔗糖代謝（Starch and sucrose metabolism）、脂肪酸降解（Fatty acid degradation）、黃酮類化合物生物合成（Flavonoid biosynthesis）。對(duì)照（花后71 d）vs T2（花后71 d）中最顯著的幾個(gè)代謝途徑為丙烷、哌啶和吡啶生物堿生物合成（Tropane，piperidine and pyridine alkaloid biosynthesis）、植物晝夜節(jié)律（Circadian rhythm - plant）、黃酮類化合物生物合成（Flavonoid biosynthesis）、光合作用-天線蛋白（Photosynthesis -antenna proteins）、二苯乙烯類、二芳基庚烷類和姜酚的生物合成（Stilbenoid，diarylheptanoid and gingerol biosynthesis）、植物病原菌互作（Plant-pathogen interaction）、半乳糖代謝（galactose metabolism ）、植物激素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)（Plant hormone signal transduction）、ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白（ABC transporters）、單萜類生物合成（Monoterpenoid biosynthesis）、苯丙烷類生物合成（Phenylpropanoid biosynthesis）、氮代謝（Nitrogen metabolism）。

花后99 d代謝通路的KEGG富集分析（圖7），以P-adjust＜0.05為標(biāo)準(zhǔn)對(duì)兩兩比較后的代謝通路進(jìn)行選擇，對(duì)照（花后99 d）vs T1（花后99 d）和對(duì)照（花后99 d）vs T2（花后99 d）中，分別有12個(gè)和10個(gè)代謝途徑被顯著富集。對(duì)照（花后99 d）vs T1（花后99 d）富集到的最為顯著的途徑有苯丙烷、哌啶和吡啶生物堿生物合成（Tropane，piperidine and pyridine alkaloid biosynthesis），苯丙烷類生物合成（Phenylpropanoid biosynthesis），黃酮類生物合成（Flavonoid biosynthesis），植物晝夜節(jié)律（Circadian rhythm-plant），苯丙氨酸代謝（Phenylalanine metabolism），ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白（ABC transporters），二苯類、二芳基庚烷類和姜酚類生物合成（Stilbenoid，diarylheptanoid and gingerol biosynthesis），光合作用（Photosynthesis），半乳糖代謝（Galactose metabolism），酪氨酸代謝（Tyrosine metabolism），泛醌及其他萜醌類化合物的生物合成（Ubiquinone and other terpenoid-quinone biosynthesis），異喹啉生物堿生物合成（Isoquinoline alkaloid biosynthesis）。對(duì)照（花后99 d）vs T2（花后99 d）富集到植物晝夜節(jié)律（Circadian rhythm-plant），苯丙烷、哌啶和吡啶生物堿生物合成（Tropane，piperidine and pyridine alkaloid biosynthesis），類黃酮生物合成（Flavonoid biosynthesis），苯丙烷生物合成（Phenylpropanoid biosynthesis），二苯乙烯，二芳基庚烷和姜酚生物合成（Stilbenoid，diarylheptanoid and gingerol biosynthesis），ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白（ABC transporters），苯丙氨酸代謝（Phenylalanine metabolism），光合作用-天線蛋白（Photosynthesis -antenna proteins），脂肪酸延伸（Fatty acid elongation），卟啉代謝（Porphyrin metabolism）途徑最為顯著。

通過(guò)兩兩比較之后每個(gè)組合均富集到較多的代謝途徑，而筆者在本研究中重點(diǎn)關(guān)注的是苯丙烷類化合物的生物合成和類黃酮生物合成兩個(gè)代謝途徑。類黃酮代謝途徑中在對(duì)照（花后71 d）vs T1（花后71 d）、對(duì)照（花后71 d）vs T2（花后71 d）、對(duì)照（花后99 d）vs T1（花后99 d）和對(duì)照（花后99 d）vs T2（花后99 d）中分別富集到的差異基因數(shù)目為9個(gè)、21個(gè)、38個(gè)和28個(gè)，而苯丙烷類生物合成富集到的基因個(gè)數(shù)最多達(dá)到51個(gè)。

2.4 遮陽(yáng)處理對(duì)馬瑟蘭葡萄花色苷合成相關(guān)基因表達(dá)的影響

qRT-PCR驗(yàn)證轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)，隨機(jī)篩選了苯丙烷類生物合成和類黃酮生物合成兩個(gè)代謝途徑中的差異表達(dá)基因通過(guò)qRT-PCR分析相對(duì)表達(dá)水平，以此進(jìn)一步說(shuō)明轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)的可靠性。利用差異表達(dá)基因功能富集分析和表達(dá)量分析的方法，從馬瑟蘭葡萄中篩選了15個(gè)與花色苷合成相關(guān)的差異表達(dá)基因，作為潛在的候選基因（表9）。經(jīng)基因功能注釋分析，這些基因可能與花色苷的生物合成有關(guān)。其中，除GAPDH（內(nèi)參）外，CHS3表達(dá)量最高，GST4次之。

對(duì)基因相對(duì)表達(dá)量進(jìn)行分析，不同時(shí)期遮陽(yáng)處理對(duì)馬瑟蘭葡萄果實(shí)花色苷合成相關(guān)基因的影響由圖8可以看出，轉(zhuǎn)色期遮陽(yáng)處理后，葡萄果皮花色苷相關(guān)合成的上游基因，均有不同程度的上調(diào)表達(dá)。隨著果實(shí)的成熟，T1處理的PAL、F3H、F3’H基因表達(dá)類似，呈先下降后上升的變化趨勢(shì)，花后71 d三個(gè)基因的表達(dá)量均上調(diào)，而后隨著果實(shí)成熟逐漸下降，PAL和F3’H在花后85 d時(shí)達(dá)到最小值，且均顯著低于對(duì)照和T2的基因表達(dá)量，F(xiàn)3H在花后92 d時(shí)達(dá)到最小值，且與對(duì)照和T2的基因表達(dá)量差異顯著；隨著果實(shí)成熟至采收，PAL、F3H和F3’H基因均逐漸上調(diào)表達(dá)，花后106 d時(shí)T1的3個(gè)基因表達(dá)量均顯著低于對(duì)照的基因表達(dá)量。T2處理的4CL和CHS基因表達(dá)呈波動(dòng)變化趨勢(shì)，CHI呈先上升后下降的變化趨勢(shì)，花后71～85 d，4CL、CHS、CHI基因逐漸上調(diào)表達(dá)，均在花后85 d時(shí)表達(dá)量最高，且顯著高于對(duì)照和T1的表達(dá)水平，花后85～106 d，表達(dá)水平有所下調(diào)，果實(shí)采收時(shí)，T2的4CL、CHI、CHS基因表達(dá)量水平顯著低于對(duì)照?；ê?1～106 d，T1處理下的CHS3和F3’5’H表達(dá)水平類似，隨著果實(shí)成熟花色苷的不斷積累，兩個(gè)基因的表達(dá)水平均呈下降-上升-下降的變化趨勢(shì)，CHS3在花后71 d時(shí)表達(dá)水平最高，而后逐漸下調(diào)，至花后99 d表達(dá)量略有上升，果實(shí)采收期有所下調(diào)，且此時(shí)的表達(dá)量顯著低于對(duì)照和T2；F3’5’H在花后71～92 d表達(dá)量逐漸下調(diào)，花后99 d表達(dá)水平上升至最高，果實(shí)采收期又迅速下調(diào)，并達(dá)到最低水平，表達(dá)量亦顯著低于對(duì)照和T2。T2處理的CHS3和F3’5’H表達(dá)水平類似，花后71～106 d，2個(gè)基因的表達(dá)量初期降低，隨后逐漸升高，CHS3的表達(dá)水平在花后71 d時(shí)達(dá)到最高，且顯著高于對(duì)照和T1的表達(dá)水平，而后下調(diào)，并在花后85 d時(shí)達(dá)到最低，且顯著低于對(duì)照的CHS3表達(dá)水平，隨著果實(shí)轉(zhuǎn)色成熟T2的CHS3表達(dá)上調(diào)，在花后106 d時(shí)CHS3表達(dá)量是T1的3.3倍，差異顯著；F3’5’H的表達(dá)水平在花后71～92 d略有下調(diào)，并在花后92 d時(shí)達(dá)到最低，而后隨著果實(shí)轉(zhuǎn)色成熟F3’5’H表達(dá)上調(diào)，在花后106 d時(shí)F3’5’H表達(dá)量達(dá)到最大，是T1的19.5倍，差異顯著。

圖9中DFR在轉(zhuǎn)色前期轉(zhuǎn)錄水平較高，在轉(zhuǎn)色中后期下調(diào)表達(dá)，其中，T1處理在花后106 d時(shí)上調(diào)表達(dá)，比對(duì)照高1.5倍，比T2高1.9倍，差異達(dá)顯著水平。T2處理的LDOX、UFGT和GST4基因表達(dá)量在花后71 d～106 d均高于T1，且除了LDOX在花后71 d的表達(dá)量差異不顯著外，其余各時(shí)期3個(gè)基因的表達(dá)量均達(dá)顯著差異水平。T2處理的OMT在轉(zhuǎn)色后至采收前的轉(zhuǎn)錄水平呈先升后降的波動(dòng)變化趨勢(shì)，采收期時(shí)下調(diào)表達(dá)；T1處理的OMT在花后106 d時(shí)上調(diào)表達(dá)，且顯著高于對(duì)照和T2。調(diào)節(jié)因子MYB5b和MYB90在轉(zhuǎn)色至成熟前期轉(zhuǎn)錄水平較高，近成熟期至采收期轉(zhuǎn)錄水平有所下降。qRT-PCR分析發(fā)現(xiàn)，篩選的15個(gè)基因中，CHI、F3H、F3’5’H、F3’H、DFR、LDOX、UFGT和OMT在各處理中的表達(dá)水平的變化趨勢(shì)和轉(zhuǎn)錄組測(cè)序不一致，其他基因的變化趨勢(shì)與轉(zhuǎn)錄組測(cè)序結(jié)果相吻合。

2.5 馬瑟蘭葡萄花色苷含量與花色苷合成相關(guān)基因的分析

在馬瑟蘭葡萄果實(shí)成熟過(guò)程中，花色苷含量與相關(guān)基因表達(dá)量的相關(guān)性分析除OMT外，均呈正相關(guān)（表10）。其中CHI轉(zhuǎn)錄水平與Dp和Cy含量顯著正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)為0.489和0.512。MYB5b基因表達(dá)水平與Dp、Cy、Pn及Pt含量呈顯著正相關(guān)，說(shuō)明MYB5b基因可能參與調(diào)節(jié)花色苷合成相關(guān)結(jié)構(gòu)基因，進(jìn)而影響花色苷組分及含量的變化。

3 討 論

賀蘭山東麓葡萄酒產(chǎn)區(qū)受氣候變化影響，干旱少雨，夏季炎熱、光照強(qiáng)，日照時(shí)數(shù)長(zhǎng)，導(dǎo)致葡萄過(guò)快成熟，糖高酸低，花色苷合成快、色澤凋零也快，進(jìn)而影響了果實(shí)品質(zhì)。通過(guò)遮光、改變?cè)耘喾绞降确椒ㄕ{(diào)節(jié)果實(shí)糖、酸及酚類物質(zhì)積累，可有效提升果實(shí)品質(zhì)?；ㄉ兆鳛楣麑?shí)品質(zhì)的重要指標(biāo)之一，其積累受到環(huán)境因素和生物合成途徑中相關(guān)基因表達(dá)水平的共同調(diào)控。樹(shù)體遮陽(yáng)、果穗套袋等方法[20-21]可改變光照度，導(dǎo)致葡萄果實(shí)總花色苷含量下降，影響果實(shí)著色，延遲采收。套袋對(duì)葡萄花色苷種類沒(méi)有影響，花色苷含量則有所差異[22]。本研究結(jié)果表明，各處理中葡萄果實(shí)檢測(cè)的16種花色苷種類均一致，單體含量有所不同，與上述研究結(jié)果一致[22]。遮陽(yáng)顯著減少了葡萄果實(shí)Dp類、Cy類、Pt類和Pn類花色苷的含量，轉(zhuǎn)色初期遮陽(yáng)，除Mv類花色苷外，總花色苷含量及Dp類、Cy類、Pt類和Pn類含量則顯著下降；完全轉(zhuǎn)色期遮陽(yáng)，總花色苷和Mv類花色苷含量則增加，進(jìn)一步說(shuō)明了不同時(shí)期遮陽(yáng)對(duì)花色苷的影響并不相同[23]，且Mv類花色苷在5類花色苷中仍占主要地位，與相關(guān)研究結(jié)果一致[24]。遮陽(yáng)可降低葡萄果實(shí)含糖量，有效增加酸含量[25]，顯著降低可溶性固形物含量[26]。本研究結(jié)果表明，完全轉(zhuǎn)色期遮陽(yáng)處理促進(jìn)了還原糖積累，且差異顯著，可能由于遮陽(yáng)減少了光照度，提高了光合能力，促進(jìn)了果實(shí)糖的積累。遮陽(yáng)減緩了葡萄酸的下降趨勢(shì)，顯著降低了可溶性固形物含量，這與閆雪[26]的研究結(jié)果一致。

花色苷合成除受到光照、溫度及礦質(zhì)元素等外部因素的影響外[21]，還受到合成途徑中調(diào)控關(guān)鍵酶表達(dá)的相關(guān)基因（PAL、CHS、F3'5'H、F3H、DFR、UFGT、OMT、GST等結(jié)構(gòu)基因和MYB等調(diào)節(jié)基因）的影響。有研究發(fā)現(xiàn)，果穗套袋可使PAL、4CL、F3’5’H、DFR、LDOX、OMT、MYB5a等相關(guān)基因表達(dá)量上調(diào)，促進(jìn)了果實(shí)花色苷的合成[27]。本試驗(yàn)主要研究了PAL、4CL、CHI、CHS、CHS3、F3H、F3’5’H、F3’H、GST4、DFR、LDOX、UFGT、OMT、MYB5b、MYB90基因的表達(dá)水平?；ê?1～106 d，以上基因在果實(shí)中均被檢測(cè)到。轉(zhuǎn)色初期遮陽(yáng)，采收時(shí)CHI、DFR和OMT基因表達(dá)量與其他處理相比有所上調(diào)，且DFR和OMT達(dá)顯著水平，顯著降低了CHS和LDOX基因表達(dá)水平。完全轉(zhuǎn)色期遮陽(yáng)，采收期的PAL、CHS3、F3’H、F3’5’H、UFGT、GST4和MYB90基因表達(dá)量與其他處理相比均有所上調(diào)，進(jìn)一步促進(jìn)了花色苷的合成，?；ㄉ招揎棻壤脑黾?，提升了花色苷的結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性，繼而提高其顏色穩(wěn)定性[28]。對(duì)轉(zhuǎn)色至采收期的花色苷含量與相關(guān)基因表達(dá)量分析表明，MYB5b與花色苷含量呈顯著正相關(guān)，對(duì)花色苷的合成具有調(diào)節(jié)作用，與成果[23]的有關(guān)研究結(jié)果相吻合。F3’H和F3’5’H在花色苷生物合成途徑中起著關(guān)鍵作用，二者分別調(diào)控著花色苷合成的不同支路，繼而形成不同的花色苷[29]，F(xiàn)3’H主要參與生成的Cy類花色苷和F3’5’H主要參與生成的Dp類花色苷含量不同導(dǎo)致果皮顏色也有所不同[27]。筆者在本研究中發(fā)現(xiàn)，在轉(zhuǎn)色初期遮陽(yáng)，采收時(shí)F3’H上調(diào)表達(dá)，F(xiàn)3’5’H下調(diào)表達(dá)；在完全轉(zhuǎn)色期遮陽(yáng)，采收時(shí)F3’H和F3’5’H均上調(diào)表達(dá)，而轉(zhuǎn)色初期遮陽(yáng)處理的Cy類和Dp類花色苷含量均顯著高于完全轉(zhuǎn)色期遮陽(yáng)處理的Cy和Dp含量?？赡苡捎贑HI表達(dá)水平與Cy和Dp含量呈顯著正相關(guān)，且轉(zhuǎn)色初期遮陽(yáng)處理的CHI表達(dá)水平顯著高于完全轉(zhuǎn)色期遮陽(yáng)處理的CHI表達(dá)水平，進(jìn)而導(dǎo)致轉(zhuǎn)色初期遮陽(yáng)處理的Cy和Dp含量顯著高于完全轉(zhuǎn)色期遮陽(yáng)處理的Cy和Dp含量。亦或是其他關(guān)鍵基因存在差異性表達(dá)，導(dǎo)致Cy和Dp含量有所差異，還有待進(jìn)一步研究。

4 結(jié) 論

遮陽(yáng)顯著降低了可溶性固形物含量，增加了滴定酸含量，完全轉(zhuǎn)色期遮陽(yáng)增加了部分花色苷合成相關(guān)基因的表達(dá)量，促進(jìn)了花色苷的合成，提升了總花色苷含量且顯著增加了Mv類花色苷的含量。完全轉(zhuǎn)色期遮陽(yáng)提高了?；ㄉ盏男揎棻壤?，增加了花色苷顏色的穩(wěn)定性，改善果實(shí)著色，提升葡萄色澤的穩(wěn)定性。因此，為有效緩解釀酒葡萄因光強(qiáng)導(dǎo)致花色苷結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定引起色澤過(guò)快凋零的問(wèn)題，可在果實(shí)完全轉(zhuǎn)色期進(jìn)行適當(dāng)遮陽(yáng)處理。

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