酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)與甲苯胺紅不加熱血清試驗(yàn)診斷梅毒螺旋體感染的價(jià)值探究

【摘要】 目的 探究酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）與甲苯胺紅不加熱血清試驗(yàn)（tolulized red unheated serum test，TRUST）診斷梅毒螺旋體（treponema pallidum，TP）感染的臨床價(jià)值。方法 選取2021年1月—2023年12月男性性病就診者哨點(diǎn)監(jiān)測及吸毒綜合哨點(diǎn)監(jiān)測1 800名檢查者進(jìn)行研究，均接受ELISA、TRUST技術(shù)檢查，并接受乳膠法檢查，將乳膠法檢查結(jié)果作為依據(jù)，分析ELISA、TRUST技術(shù)診斷TP感染的臨床價(jià)值（包括靈敏度、特異度、準(zhǔn)確度等），并計(jì)算ELISA、TRUST技術(shù)診斷TP感染與乳膠法診斷的一致性。結(jié)果 納入的1 800名檢查者中，經(jīng)乳膠法檢查，77名確診為TP感染，占比4.28%（77/1 800）。將乳膠法檢查結(jié)果作為依據(jù)，ELISA、TRUST技術(shù)診斷TP感染與乳膠法檢查結(jié)果符合率分別為96.00%（1 728/1 800）、92.28%（1 661/1 800）；ELISA技術(shù)診斷TP感染符合率高于TRUST檢查，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=22.600，P＜0.001）。ELISA技術(shù)診斷TP感染與乳膠法檢查具有理想的一致性（Kappa值=0.592），TRUST技術(shù)診斷TP感染與乳膠法檢查也具有理想的一致性（Kappa值=0.446）。ELISA技術(shù)診斷TP感染的特異度、準(zhǔn)確度、陽性預(yù)測值高于TRUST技術(shù)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；2種技術(shù)檢查診斷TP感染的靈敏度、陰性預(yù)測值比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)論 與TRUST技術(shù)比較，ELISA技術(shù)診斷TP感染與乳膠法檢查符合率更高，可提高診斷特異度、準(zhǔn)確度。

【關(guān)鍵詞】 梅毒螺旋體感染；酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)；甲苯胺紅不加熱血清試驗(yàn)

文章編號：1672-1721（2025）03-0013-04" " "文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A" " "中國圖書分類號：R446.6；R759.1

TP感染會引起梅毒，起初表現(xiàn)為硬下疳、淋巴結(jié)腫大，隨著疾病不斷發(fā)展，患者可能會出現(xiàn)肌肉酸痛、關(guān)節(jié)腫脹、發(fā)燒等癥狀，嚴(yán)重者會損害心臟、中樞神經(jīng)系統(tǒng)、腎臟等多個(gè)器官，危及患者生命安全[1]。因此，臨床應(yīng)采取有效技術(shù)及早診斷TP感染，為臨床早期治療方案的擬定提供參考。

血清學(xué)檢查具有無創(chuàng)、簡單方便、費(fèi)用低等優(yōu)點(diǎn)，是診斷TP感染的重要手段。乳膠法檢查是診斷TP感染的常見技術(shù)，但該技術(shù)中乳膠顆粒的穩(wěn)定性較差，會影響結(jié)果的準(zhǔn)確性，應(yīng)用存在一定局限性[2]。TRUST技術(shù)也是常見檢查方法，具有一定診斷價(jià)值，適用于大樣本篩查，但靈敏度、特異度低，假陽性、假陰性率較高，應(yīng)用也有局限[3]。ELISA技術(shù)具有操作簡單、檢查快速等優(yōu)點(diǎn)，檢查靈敏度較高，適用于小樣本篩查，近年來逐漸受到臨床關(guān)注[4]?；诖?，本研究旨在分析ELISA、TRUST技術(shù)檢查診斷TP感染的臨床價(jià)值，報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2021年1月—2023年12月男性性病就診者哨點(diǎn)監(jiān)測及吸毒綜合哨點(diǎn)監(jiān)測1 800名檢查者進(jìn)行研究，男性1 682名，女性118名；年齡16～84歲，平均（27.32±6.76）歲；體質(zhì)量指數(shù)18.3～26.7 kg/m2，平均（21.52±1.19）kg/m2；婚姻狀況，已婚1 331名，未婚352名，離異113名，喪偶或其他4名。

納入標(biāo)準(zhǔn)：均為男性性病就診者哨點(diǎn)監(jiān)測及吸毒綜合哨點(diǎn)監(jiān)測者；均接受ELISA、TRUST、乳膠法技術(shù)檢查；精神無異常，認(rèn)知正常，意識清楚；具有較高診斷依從性，主動參與調(diào)查；檢查者或家屬簽署同意書。

排除標(biāo)準(zhǔn)：合并其他病毒感染性疾病者；妊娠或哺乳期女性；伴肝衰竭、心力衰竭者；合并肺癌、胃癌等癌癥疾病者；伴血液、免疫系統(tǒng)疾病者；正參與其他臨床試驗(yàn)者。

1.2 方法

1.2.1 儀器及試劑

采用美國伯騰公司提供的ELX800型酶標(biāo)儀、ELX5013BioTEK洗板機(jī)和江蘇新康醫(yī)療器械有限公司提供的梅毒旋轉(zhuǎn)振蕩器，儀器均校準(zhǔn)，性能良好。ELISA、TRUST檢查試劑盒均購自北京萬泰生物藥業(yè)股份有限公司，乳膠法試劑盒購自艾博生物醫(yī)藥（杭州）有限公司，各個(gè)技術(shù)檢測步驟均嚴(yán)格按照試劑盒的說明書進(jìn)行。

1.2.2 標(biāo)本采集

叮囑檢查者標(biāo)本采集前需保持空腹?fàn)顟B(tài)，并采集其空腹靜脈血約6 mL，進(jìn)行離心處理10～15 min，速率為3 000 r/min，離心半徑為15 cm，然后取上層血清，及時(shí)送檢，對于無法及時(shí)送檢標(biāo)本，應(yīng)置于4 ℃冰箱中保存，備用。

1.2.3 ELISA檢查及判斷方法

使用前先將樣品室溫平衡30 min以上，然后混勻，之后設(shè)置陰性對照、陽性對照和空白對照，同時(shí)對標(biāo)本進(jìn)行編號，依次進(jìn)行離心、加樣、溫育、洗板、加酶、溫育、洗板、顯色、測定等操作，全部檢測操作需嚴(yán)格根據(jù)檢測試劑盒操作說明規(guī)范進(jìn)行。結(jié)果判讀標(biāo)準(zhǔn)：陰性對照孔A值≤0.10，陽性對照孔A值≥0.80，否則實(shí)驗(yàn)無效；若有1孔陰性對照A值大于0.1應(yīng)舍棄，若2孔或2孔以上陰性對照A值＞0.1，應(yīng)重復(fù)實(shí)驗(yàn)；樣品A值＜臨界值（CUTOFF）者為陰性，樣品A值≥臨界值（CUTOFF）者為陽性（初試陽性應(yīng)重新取樣雙孔復(fù)試）。

1.2.4 TRUST檢查及判斷方法

使用前先將樣品室溫平衡30 min以上，實(shí)驗(yàn)前需混勻，之后設(shè)置陰性、陽性對照，同時(shí)對標(biāo)本進(jìn)行編號、離心、加樣、加抗原、反應(yīng)等操作，全部檢測操作需嚴(yán)格根據(jù)檢測試劑盒操作說明規(guī)范進(jìn)行。結(jié)果判讀標(biāo)準(zhǔn)：陽性反應(yīng)（R）可見中等或較大塊的粉紅色凝塊；弱陽性反應(yīng)（W）可見較小的明細(xì)的粉紅色凝塊；陰性反應(yīng)（N）可見粉紅色均勻的沉淀物無凝集物；定量實(shí)驗(yàn)以呈現(xiàn)明顯凝集反應(yīng)的最高稀釋度作為該血清的凝集效價(jià)。

1.2.5 乳膠法檢查及判斷方法

檢查前，先將所用試劑、樣本恢復(fù)至室溫。取出試劑，置于干凈平坦的臺面上，用一次性塑料吸管吸取樣本后，垂直滴加1滴（約25 μL）于加樣孔S中，然后加入2滴緩沖液，開始計(jì)時(shí)。等待紅色條帶出現(xiàn)，檢測結(jié)果在10～20 min內(nèi)判讀。如果2條紅色條帶出現(xiàn)，一條位于檢測區(qū)（T）內(nèi)，另一條位于質(zhì)控區(qū)（C），提示陽性；如果僅C區(qū)出現(xiàn)一條紅色條帶，T區(qū)無紅色條帶，即為陰性。

1.3 評價(jià)指標(biāo)

以乳膠法檢查結(jié)果作為依據(jù)，分析ELISA、TRUST技術(shù)診斷TP感染與乳膠法檢查結(jié)果符合率和一致性。計(jì)算ELISA、TRUST技術(shù)診斷TP感染的效能，將真陽性、真陰性、假陽性、假陰性分別記為A、B、C、D，靈敏度=A總數(shù)/（A總數(shù)+D總數(shù)）×100%，特異度=B總數(shù)/（B總數(shù)+C總數(shù)）×100%，準(zhǔn)確度=（A總數(shù)+B總數(shù)）/總例數(shù)×100%，陽性預(yù)測值=A總數(shù)/（A總數(shù)+C總數(shù)）×100%，陰性預(yù)測值=B總數(shù)/（B總數(shù)+D總數(shù)）×100%。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 25.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理數(shù)據(jù)，計(jì)數(shù)資料以百分比表示，采用χ2檢驗(yàn)；一致性采用Kappa檢驗(yàn)（Kappa值＞0.75為一致性極好，Kappa值在0.40～0.75為一致性一般，Kappa值＜0.40為一致性較差），檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 乳膠法檢查結(jié)果

本次研究納入的1 800名檢查者中，經(jīng)乳膠法檢查，77名確診為TP感染，占到4.28%（77/1 800）。

2.2 ELISA、TRUST技術(shù)診斷TP感染與乳膠法檢查結(jié)果符合情況將乳膠法檢查結(jié)果作為依據(jù)，ELISA、TRUST技術(shù)診斷TP感染與乳膠法檢查結(jié)果符合率分別為96.00%（1 728/1 800）、92.28%（1 661/1 800）；ELISA技術(shù)診斷TP感染符合率高于TRUST檢查，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=22.600，P＜0.001）。ELISA技術(shù)診斷TP感染與乳膠法檢查結(jié)果具有理想的一致性（Kappa值=0.592），TRUST技術(shù)診斷TP感染與乳膠法檢查結(jié)果也具有理想的一致性（Kappa值=0.446）。ELISA、TRUST技術(shù)診斷TP感染結(jié)果見表1、表2。

2.3 ELISA、TRUST技術(shù)診斷TP感染的價(jià)值分析

ELISA技術(shù)診斷TP感染的特異度、準(zhǔn)確度、陽性預(yù)測值高于TRUST技術(shù)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；2種技術(shù)檢查診斷TP感染的靈敏度、陰性預(yù)測值比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見表3。

3 討論

TP感染的危害較大，傳染性強(qiáng)，多通過性生活、血液或母嬰傳播，少數(shù)人通過親吻、握手等方式被傳染[5]。TP感染后患者的癥狀較為復(fù)雜，早期一般以硬下疳為主，隨著病情的加重，患者體內(nèi)病原體不斷擴(kuò)散，侵害多個(gè)臟器器官，危及患者生命安全[6]。TP感染早期癥狀多為皮膚表現(xiàn)，容易被忽視[7]。因此，臨床應(yīng)倡導(dǎo)及早篩查、診斷TP感染。

研究發(fā)現(xiàn)，個(gè)體感染TP后，體內(nèi)會出現(xiàn)較多抗體，主要包括抗TP特異性抗體、非特異性反應(yīng)素[8-9]。TRUST技術(shù)能夠有效檢測非特異性反應(yīng)素，但該抗體在體內(nèi)出現(xiàn)晚，多在癥狀出現(xiàn)后4周才可檢出，早期TP感染檢出率低，且檢查神經(jīng)梅毒靈敏度低，進(jìn)而增加漏診風(fēng)險(xiǎn)[10]。此外，TRUST技術(shù)中抗原主要為心磷脂類物質(zhì)，結(jié)果容易受到主觀因素影響，進(jìn)而降低診斷價(jià)值，但該技術(shù)費(fèi)用低，適用于基層醫(yī)院[11]。ELISA技術(shù)具有操作簡單、檢測范圍廣等優(yōu)點(diǎn)，在TP17、TP47酶標(biāo)板孔基礎(chǔ)上檢測，使用雙抗原夾心法測定TP特異性抗原、抗體，并從酶標(biāo)儀上讀出結(jié)果，具有客觀性，避免主觀因素對結(jié)果的影響，可提高TP感染檢查準(zhǔn)確率[12]。據(jù)報(bào)道，ELISA技術(shù)檢查TP感染可提高診斷準(zhǔn)確度，具有一定應(yīng)用價(jià)值[13]。

本研究結(jié)果顯示，將乳膠法檢查結(jié)果作為依據(jù)，ELISA技術(shù)診斷TP感染的總符合率、特異度、準(zhǔn)確度、陽性預(yù)測值高于TRUST技術(shù)，且2種技術(shù)診斷TP感染與乳膠法檢查結(jié)果均具有理想的一致性。結(jié)果提示，與TRUST技術(shù)比，ELISA技術(shù)診斷TP感染可提高符合率、診斷特異度和準(zhǔn)確度。分析原因，TRUST技術(shù)價(jià)格低廉，更容易被檢查者接受，但機(jī)體一般在感染TP后4～8周出現(xiàn)非特異性抗體，經(jīng)治療后抗體會轉(zhuǎn)為陰性，這會在一定程度上降低TRUST技術(shù)檢查靈敏度，不適用于潛伏期、1期和3期患者檢查。TRUST技術(shù)在麻風(fēng)、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎等免疫系統(tǒng)疾病中也會出現(xiàn)假陽性情況，導(dǎo)致誤診率較高[14-15]。ELISA技術(shù)中應(yīng)用的酶屬于有機(jī)催化劑，滴入少量酶可達(dá)到較好的顯色效果，便于醫(yī)師觀察，可追蹤抗體和抗原位置，進(jìn)而定量分析，適用于各期TP感染測定，利于提高準(zhǔn)確度[16]。但ELISA技術(shù)也有不足，比如TP抗體消失較慢，治療后仍可能會檢出，可能會導(dǎo)致TP感染呈終身陽性狀態(tài)，不適合判定TP感染療效。ELISA檢查也有假陽性問題，這可能與抗體、抗原出現(xiàn)交叉反應(yīng)，進(jìn)而出現(xiàn)非特異性吸附功能有關(guān)。

綜上所述，與TRUST技術(shù)比較，ELISA技術(shù)診斷TP感染與乳膠法符合率更高，可提高診斷特異度、準(zhǔn)確度。

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（編輯：徐亞麗）