血清APOC1和Klotho表達(dá)對(duì)腎癌后腹腔鏡下腎部分切除術(shù)患者預(yù)后的預(yù)測(cè)價(jià)值

摘要：目的探討載脂蛋白C1（APOC1）和Klotho表達(dá)預(yù)測(cè)腎癌后腹腔鏡下腎部分切除術(shù)患者預(yù)后的臨床價(jià)值。方法選擇確診為腎癌并行后腹腔鏡腎部分切除術(shù)的患者80例，根據(jù)預(yù)后情況分為預(yù)后良好組（61例）和預(yù)后不良組（19例），另擇健康體檢者78例為對(duì)照組。收集一般臨床資料，采用熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（qRT-PCR）檢測(cè)血清APOC1、Klotho表達(dá)。采用Pearson法分析患者血清APOC1與Klotho水平的相關(guān)性，Cox回歸分析影響患者預(yù)后的因素，受試者工作特征（ROC）曲線評(píng)估APOC1、Klotho水平對(duì)患者預(yù)后的預(yù)測(cè)效能。結(jié)果預(yù)后不良組和預(yù)后良好組臨床分期和病理分級(jí)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。對(duì)照組、預(yù)后良好組和預(yù)后不良組血清APOC1表達(dá)水平依次升高，Klotho表達(dá)水平依次降低（P＜0.05）。患者血清APOC1與Klotho表達(dá)水平呈負(fù)相關(guān)（r=-0.577，P＜0.001）。Cox回歸分析結(jié)果顯示，Klotho表達(dá)水平降低、APOC1表達(dá)水平升高、病理分級(jí)2級(jí)、臨床分期Ⅱ期是導(dǎo)致患者預(yù)后不良的獨(dú)立危險(xiǎn)因素（P＜0.05）。ROC曲線結(jié)果顯示，血清APOC1、Klotho聯(lián)合預(yù)測(cè)腎癌患者術(shù)后預(yù)后不良的臨床價(jià)值優(yōu)于單一指標(biāo)（P＜0.05）。結(jié)論腎癌后腹腔鏡下腎部分切除術(shù)預(yù)后不良患者血清APOC1水平升高，Klotho水平降低，二者聯(lián)合對(duì)患者預(yù)后具有較高的臨床價(jià)值。

關(guān)鍵詞：腎腫瘤；載脂蛋白C1；Klotho；后腹腔鏡腎部分切除術(shù)；預(yù)后

中圖分類號(hào)：R737.11文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A DOI：10.11958/20240969

Predictive value of serum APOC1 and Klotho expression for prognosis in patients undergoing laparoscopic partial nephrectomy for renal cancer

WU Yameng，LI Liangliang，WANG Yangang，XING Defu

Department of Urology，Anhui Medical University Affiliated Fuyang Hospital，F(xiàn)uyang 236000，China

Abstract：Objective To explore the clinical value of apolipoprotein C1（APOC1）and Klotho expression levels in predicting the prognosis of patients with renal cancer after laparoscopic partial nephrectomy.Methods Eighty patients diagnosed as renal cell carcinoma and underwent laparoscopic partial nephrectomy were collected as the study subjects.According to the prognosis，patients were separated into the good prognosis group（61 cases）and the poor prognosis group（19 cases）.Seventy-eight healthy individuals underwent physical examination were collected as the control group.The general clinical data of the subjects were collected，and serum levels of APOC1 and Klotho were tested and analyzed in three groups.Pearson method was applied to analyze the correlation between serum APOC1 and Klotho levels in patients.Cox regression was applied to analyze factors affecting the prognosis of patients.Receiver operating characteristic（ROC）curve was applied to analyze the predictive efficacy of APOC1 and Klotho levels on the prognosis of patients.Results There were significant differences in clinical stage and pathological grade between the poor prognosis group and the good prognosis group（Plt;0.05）.Compared with the control group，the serum APOC1 levels were significantly increased in the good prognosis group and the poor prognosis group（P＜0.05），while the Klotho expression levels were obviously reduced（P＜0.05）.And the serum APOC1 level in the control group，the poor prognosis group and the good prognosis group was increased successively（Plt;0.05），while the serum Klotho level was obviously decreased successively（P＜0.05）.The serum APOC1 expression level of patients was negatively correlated with Klotho level（r=-0.577，P＜0.001）.The Cox regression results showed that decreased expression level of Klotho and elevated expression level of APOC1，pathologic grading 2 and clinical staging stageⅡwere all independent risk factors for poor prognosis（P＜0.05）.The area under the curve（AUC）of serum APOC1 and Klotho levels，and their combined application in predicting poor postoperative prognosis in renal cancer patients was 0.863，0.850 and 0.953，respectively，and the clinical value of combination of the two in predicting the prognosis of patients was superiorto that of APOC1 and Klotho alone.Conclusion Patients with poor prognosis after retroperitoneal laparoscopic partial nephrectomy have a obvious increase in serum levels of APOC1 and a obvious decrease in serum level of Klotho.The combination of the two has high clinical significance in predicting the prognosis of patients with retroperitoneal laparoscopic partial nephrectomy.

Key words：kidney neoplasms;apolipoprotein C1;Klotho;retroperitoneal laparoscopic partial nephrectomy for renal cancer;prognosis

腎癌具有高發(fā)病率、高致死率等特點(diǎn)，是十大惡性腫瘤之一。腹腔鏡腎部分切除術(shù)具有失血少、恢復(fù)快、并發(fā)癥少等優(yōu)點(diǎn)，近幾年已經(jīng)成為傳統(tǒng)開放式腎部分切除術(shù)的替代方法［1］。但對(duì)于該術(shù)式，患者預(yù)后存在較大差異［2］，并且尚缺乏預(yù)測(cè)預(yù)后的有效指標(biāo)。載脂蛋白C1（Apolipoprotein C1，APOC1）是載脂蛋白C家族中最小的載脂蛋白，參與膽固醇代謝、膜重建、神經(jīng)元凋亡和重組等多種生物學(xué)過程，且APOC1在多種癌癥的發(fā)生和發(fā)展中發(fā)揮重要作用［3］。已有研究證明，抗衰老因子Klotho具有抗炎、抗纖維化和抗氧化特性，在腎臟疾病中發(fā)揮了關(guān)鍵作用［4］，同時(shí)可抑制腎癌的進(jìn)展［5］。目前關(guān)于APOC1和Klotho表達(dá)與腎癌后腹腔鏡下腎部分切除術(shù)患者預(yù)后的關(guān)系尚未明確。本研究通過檢測(cè)后腹腔鏡腎部分切除術(shù)患者血清APOC1、Klotho表達(dá)，探討APOC1、Klotho預(yù)測(cè)患者預(yù)后的臨床價(jià)值。

1對(duì)象與方法

1.1研究對(duì)象選取2018年10月—2020年6月于我院泌尿外科確診為腎癌并行后腹腔鏡腎部分切除術(shù)的患者80例，其中男53例，女27例，年齡42～75歲，平均（61.52±11.44）歲。腎癌參照《2016版WHO腎臟腫瘤新分類解讀》［6］的相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)，并經(jīng)實(shí)驗(yàn)室、影像學(xué)、病理學(xué)確診。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）首次發(fā)病，行后腹腔鏡腎部分切除術(shù)。（2）臨床資料完整。（3）生存期≥6個(gè)月。（4）符合腎腫瘤保留腎單位手術(shù)（Nephron sparing surgery，NSS）適應(yīng)證，并順利完成手術(shù)者。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）精神系統(tǒng)疾病。（2）有意識(shí)障礙。（3）冠心病、肺炎等其他器質(zhì)性疾病。（4）其他惡性腫瘤。（5）肝腎功能不全者。另選擇本院同期健康體檢者78例為對(duì)照組，其中男45例，女33例，年齡43～78歲，平均（61.53±10.95）歲。腎癌患者行后腹腔鏡腎部分切除術(shù)后對(duì)其進(jìn)行3年隨訪，根據(jù)預(yù)后情況分為預(yù)后良好組（無復(fù)發(fā)、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移等情況，61例）和預(yù)后不良組（出現(xiàn)腎癌復(fù)發(fā)11例、轉(zhuǎn)移5例、死亡3例，19例）。所有研究對(duì)象均知情同意，本研究經(jīng)過醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)（BY201805-003）。

1.2方法

1.2.1一般資料收集收集并記錄入組患者的年齡、性別、病程、腫瘤類型、病理分級(jí)、TNM分期等指標(biāo)。

1.2.2血液學(xué)指標(biāo)采集腎癌患者術(shù)前（對(duì)照組為體檢當(dāng)日）空腹靜脈血3～5 mL，血液靜置30 min后以3 000 r/min離心獲得血清，置于-80℃下保存?zhèn)溆?。采用酶?lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)血清血肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）水平，試劑盒購自南京卡米洛生物公司（貨號(hào)：2H-KMLJh315349，2H-KMLJh315447），操作嚴(yán)格遵循試劑盒說明書。

1.2.3熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（qRT-PCR）檢測(cè)血清APOC1、Klotho表達(dá)取部分血清樣本，使用TRIzol試劑（上海源葉生物科技有限公司）提取血清總RNA。采用反轉(zhuǎn)錄試劑盒（北京伊塔生物科技有限公司）將總RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA，并進(jìn)行定量分析。引物由生工生物工程（上海）股份有限公司合成，引物序列見表1。qRT-PCR反應(yīng)體系20μL：10.0μL SYBR Green Master Mix（北京伊塔生物科技有限公司）、2.0μL cDNA、0.5μL上游引物、0.5μL下游引物和7.0μL無RNA酶水。反應(yīng)條件：97.5℃8 min；97.5℃30 s，60℃20 s，72.5℃10 s，共40個(gè)循環(huán)。以GAPDH為內(nèi)參，采用2-ΔΔCt法計(jì)算APOC1、Klotho相對(duì)表達(dá)量。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS 27.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。符合正態(tài)分布的計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，2組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，多組間比較采用單因素方差分析，組間多重比較行SNK-q檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料采用例或例（%）表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)；采用Pearson法分析血清APOC1和Klotho水平的相關(guān)性；采用Cox回歸分析影響后腹腔鏡腎部分切除術(shù)患者預(yù)后的因素；采用受試者工作特征（ROC）曲線分析APOC1、Klotho表達(dá)對(duì)患者預(yù)后的預(yù)測(cè)效能，曲線下面積（AUC）比較行Delong檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1 3組一般資料比較預(yù)后良好組、預(yù)后不良組和對(duì)照組的性別、年齡差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；預(yù)后良好組和預(yù)后不良組患者的病程及腫瘤類型差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與對(duì)照組相比，預(yù)后良好組和預(yù)后不良組Scr和BUN水平呈現(xiàn)不同程度的升高（P＜0.05）；與預(yù)后良好組相比，預(yù)后不良組病理分級(jí)為2級(jí)、TNM分期Ⅱ期占比較高（P＜0.05），見表2。

2.2 3組血清APOC1、Klotho表達(dá)水平比較對(duì)照組、預(yù)后良好組和預(yù)后不良組血清APOC1水平依次升高，Klotho水平依次降低（P＜0.05），見表3。

2.3血清APOC1、Klotho表達(dá)水平相關(guān)性腹腔鏡腎部分切除術(shù)患者血清APOC1（1.53±0.46）與Klotho表達(dá)水平（0.78±0.21）呈負(fù)相關(guān)（r=-0.577，Plt;0.001）。

2.4后腹腔鏡腎部分切除術(shù)患者預(yù)后的影響因素分析以腎癌患者行后腹腔鏡腎部分切除術(shù)后的預(yù)后情況為因變量（預(yù)后不良=1，預(yù)后良好=0），以血清APOC1、Klotho表達(dá)水平和表2單因素分析結(jié)果中表現(xiàn)出顯著性差異的指標(biāo)病理分級(jí)（1級(jí)=1，2級(jí)=2）、TNM分期（Ⅰ期=1，Ⅱ期=2）、Scr、BUN為自變量，構(gòu)建Cox回歸模型。結(jié)果顯示，Klotho表達(dá)水平降低、APOC1表達(dá)水平升高、病理分級(jí)2級(jí)、TNM分期Ⅱ期是導(dǎo)致患者預(yù)后不良的獨(dú)立危險(xiǎn)因素（Plt;0.05），見表4。

2.5血清APOC1、Klotho表達(dá)對(duì)后腹腔鏡腎部分切除術(shù)后預(yù)后的預(yù)測(cè)價(jià)值以腎癌患者行后腹腔鏡腎部分切除術(shù)后的預(yù)后作為狀態(tài)變量（預(yù)后不良=1，預(yù)后良好=0），APOC1、Klotho表達(dá)水平為檢驗(yàn)變量，繪制ROC曲線評(píng)價(jià)血清APOC1、Klotho水平對(duì)患者預(yù)后的預(yù)測(cè)效能。結(jié)果顯示，血清APOC1、Klotho聯(lián)合預(yù)測(cè)腎癌患者術(shù)后預(yù)后不良的臨床價(jià)值優(yōu)于APOC1、Klotho單獨(dú)檢測(cè)（Z分別為2.545、2.045，Plt;0.05），見表5、圖1。

3討論

腎癌發(fā)病率約占所有新發(fā)癌癥的4.1%，術(shù)后預(yù)防復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移是提高患者生存期的關(guān)鍵，因此，尋找特異性指標(biāo)預(yù)測(cè)患者術(shù)后預(yù)后十分重要［7-8］。APOC1是載脂蛋白C家族成員之一，主要由肝臟合成，也可由皮膚、肺和腸道等其他器官合成［9］。APOC1存在于乳糜粒、極低密度脂蛋白和高密度脂蛋白中，作為一種能夠在不同類型的脂蛋白間轉(zhuǎn)移的載脂蛋白，在維持脂質(zhì)穩(wěn)態(tài)及血漿脂蛋白（如高密度脂蛋白、低密度脂蛋白等）代謝中起重要作用，其還被證實(shí)可抑制血漿中膽管酯轉(zhuǎn)移蛋白［10-11］。有研究表明，APOC1參與膜重建、膽固醇分解代謝、樹突狀細(xì)胞凋亡和重組等多種生物學(xué)過程［4］，且被認(rèn)為與2型糖尿病、糖尿病腎病、阿爾茨海默病和腎小球硬化的發(fā)生有關(guān)［9，12］。另外，越來越多的證據(jù)表明，APOC1參與癌癥的發(fā)生和發(fā)展。例如，APOC1在胃癌［13］、結(jié)直腸癌［14］中高表達(dá)，其高表達(dá)與患者預(yù)后不良有關(guān)。本研究結(jié)果顯示，預(yù)后不良組血清APOC1表達(dá)水平顯著高于預(yù)后良好組，且APOC1表達(dá)水平升高是導(dǎo)致后腹腔鏡腎部分切除術(shù)患者預(yù)后不良的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，提示APOC1水平升高與后腹腔鏡腎部分切除術(shù)患者預(yù)后不良有關(guān)，這可能與APOC1參與樹突狀細(xì)胞的凋亡和重組等生理過程有關(guān)；ROC曲線結(jié)果顯示，APOC1預(yù)測(cè)后腹腔鏡腎部分切除術(shù)患者預(yù)后不良的AUC為0.863，敏感度為68.42%，特異度為91.80%，提示APOC1可作為臨床預(yù)測(cè)該類患者預(yù)后的輔助指標(biāo)。

Klotho基因主要在腎臟和大腦組織中表達(dá)，可產(chǎn)生膜結(jié)合受體和體液調(diào)節(jié)因子［15］。研究表明，小鼠缺乏Klotho基因時(shí)，會(huì)出現(xiàn)類似于人動(dòng)脈粥樣硬化、癌癥和骨質(zhì)疏松癥的癥狀，隨后的臨床研究也發(fā)現(xiàn)了類似于Klotho缺乏癥的功能障礙，特別是在癌癥、心血管和腎臟疾病方面［16］。有研究表明，Klotho作為一種腫瘤抑制因子，在肝細(xì)胞癌、胰腺癌、乳腺癌和肺癌等腫瘤進(jìn)展中發(fā)揮重要作用［17-19］。此外，由于Klotho具有抗炎、抗纖維化、抗衰老和抗氧化的特性，亦對(duì)多種腎臟疾病的進(jìn)展有重要影響［5］。Gigante等［5］研究發(fā)現(xiàn)，腎癌組織中Klotho表達(dá)水平顯著低于正常組織，且低表達(dá)的Klotho參與癌癥的發(fā)生和轉(zhuǎn)移過程。本研究結(jié)果顯示，預(yù)后良好組和預(yù)后不良組患者血清Klotho表達(dá)水平顯著低于對(duì)照組，且Klotho表達(dá)水平降低是后腹腔鏡腎部分切除術(shù)患者預(yù)后不良的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，提示患者術(shù)后Klotho水平降低會(huì)在一定程度上導(dǎo)致其預(yù)后不良，Klotho具有抑癌、抗炎等作用；ROC曲線結(jié)果顯示，Klotho可作為臨床預(yù)測(cè)該類患者預(yù)后的輔助指標(biāo)。

此外，本研究中患者血清APOC1與Klotho表達(dá)水平呈負(fù)相關(guān)，且ROC曲線分析發(fā)現(xiàn)二者聯(lián)合預(yù)測(cè)預(yù)后的效能優(yōu)于單獨(dú)檢測(cè)，提示臨床上可將該兩指標(biāo)納入檢測(cè)范圍并用于預(yù)后判斷，以利于患者的及時(shí)治療和預(yù)后改善。

綜上所述，后腹腔鏡腎部分切除術(shù)后發(fā)生預(yù)后不良患者的血清APOC1水平升高，Klotho水平降低，二者呈負(fù)相關(guān)，且二者聯(lián)合對(duì)預(yù)后具有較高的預(yù)測(cè)價(jià)值。后續(xù)將擴(kuò)大樣本量進(jìn)一步驗(yàn)證此結(jié)論，并探討APOC1、Klotho影響后腹腔鏡腎部分切除術(shù)患者預(yù)后的具體作用機(jī)制。

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（2024-08-01收稿2024-10-11修回）

（本文編輯陳麗潔）