一例雞腎型傳染性支氣管炎的診斷與遺傳分析

收稿日期：2024-11-07

基金項目：山東省重點研發(fā)計劃（重大科技創(chuàng)新工程）（2022CXGC010606-03）；山東省家禽產業(yè)技術體系省綜合試驗站（SDAIT-11-13）

第一作者：劉硯涵（1989— ），高級獸醫(yī)師，主要從事家禽營養(yǎng)與疫病防控技術研究，E-mail：vetlyh@163.com

通信作者：蘭鄒然（1970—），研究員，主要從事動物疫病防控技術研究，E-mai： lanzrjn@163.com

摘 要：2023年山東省臨沂市某肉雞場白羽肉雞出現精神沉郁、呼吸濕啰音、腹瀉拉白痢等癥狀，隨著病程延長，出現死亡病例，但死亡率較低。剖檢可見腎臟腫大，輸尿管擴張，管內充滿白色尿酸鹽結晶，熒光定量RT-PCR檢測結果顯示IBV強陽性。通過發(fā)病雞的臨床病變、剖檢變化，并結合實驗室檢測，確診為雞傳染性支氣管炎。通過序列分析發(fā)現該雞場感染的IBV序列與分離株CK/CH/ZJ/HZ12株（GI-19基因型；GenBank登錄號為KJ524621）親緣關系最近，最終確診為雞腎型IBV。建議該養(yǎng)殖場加強飼養(yǎng)管理措施，提高自身生物安全管理水平，同時為IBV的診斷思路提供技術參考。

關鍵詞：雞；傳染性支氣管炎；診斷；遺傳分析；生物安全

中圖分類號：S858.31 文獻標識碼：C 文章編號：1673-1085（2025）02-0119-05

雞傳染性支氣管炎（Infectious bronchitis， IB）是一種急性、高度接觸性的呼吸道傳染病，在世界范圍內流行，由雞傳染性支氣管炎病毒（Infectious Bronchitis virus， IBV）引起，可感染不同日齡、不同種類的雞，主要危害呼吸系統、泌尿系統和生殖系統等。根據病變特點，可將IBV分為“呼吸型”“腎型”“生殖型”等。呼吸型毒株主要引起咳嗽、呼吸困難、氣管啰音等呼吸道癥狀；腎型毒株導致雞只產生腎臟腫脹、蒼白以及尿酸鹽沉積的“花斑腎”；生殖系統病變主要是輸卵管病變[1-4]。近年來，IBV變異株在世界不同地區(qū)不斷出現，嚴重危害養(yǎng)禽業(yè)發(fā)展，并持續(xù)成為全球肉雞生產的一個主要問題。

2023年山東臨沂某小規(guī)模白羽肉雞養(yǎng)殖場，飼養(yǎng)量約2 000只，20日齡出現精神沉郁、羽毛凌亂、相對較輕的呼吸道癥狀等，腹瀉較嚴重，拉白色石灰乳狀稀便，肛門附著大量白色糞便，可見糞便中有大量尿酸鹽結晶，用藥后未見改善，后出現零星死亡。該場在6日齡免疫過雞新城疫、傳染性支氣管炎二聯活疫苗（La Sota株+H120株），13日齡免疫過雞新城疫、禽流感（H9亞型）、傳染性法氏囊病三聯滅活疫苗。本文結合剖檢診斷和實驗室檢測，初步確認為IBV感染，通過遺傳分析確定感染基因型，便于選擇對應血清型的疫苗免疫預防，以期為小型養(yǎng)殖戶提供IBV技術診斷參考。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

DNA/RNA提取試劑盒，購自中元匯吉科技股份有限公司；雞傳染性支氣管炎病毒熒光 PCR檢測試劑盒，購自北京生科尚儀科技有限公司；HiScript II One Step RT-PCR Kit（Dye Plus），購自諾唯贊生物科技股份有限公司；病料采集于山東臨沂某白羽肉雞養(yǎng)殖場死亡雞的肺臟組織，1份；腎臟組織，2份。

1.2 引物設計合成

根據GenBank上已公開發(fā)表的IBV（登錄號：KAY189157、DQ646405等）的基因序列，應用Primer premier 7.0 軟件設計IBV S1基因的分型引物，長度約為1 800 bp，引物序列由生工生物工程（上海）股份有限公司合成。

1.3 病料處理

取病死雞的肺臟、腎臟組織，浸泡在福爾馬林溶液中固定，HE染色并觀察病理變化。取綠豆粒大小的病死雞的肺臟、腎臟組織樣品，加入PBS緩沖液，組織研磨機充分研磨，8 000 r/min離心10 min，吸取200 μL上清液，0.22 μm濾膜過濾后轉移至96孔板中，按照DNA/RNA核酸提取試劑盒說明書中的步驟從樣品中提取總RNA，轉移至1.5 mL離心管中-80 ℃保存、備用。

1.4 實驗室檢測

首先以提取的IBV核酸作為模板，使用商品化雞傳染性支氣管炎病毒熒光定量RT-PCR檢測試劑盒對組織樣品進行病原學檢測，按照說明書的步驟操作及結果判讀。對熒光定量RT-PCR檢測為陽性的核酸樣品進行RT-PCR擴增反應，參考張春陽等[5]S1引物序列，由生工生物工程（上海）股份有限公司合成。依據試劑盒說明書的指示步驟配制反應體系。PCR擴增程序為：反轉錄50 ℃ 30 min，94 ℃ 3 min；預變性94 ℃ 30 s，52 ℃ 30 s，72 ℃ 2 min，共35個循環(huán)；延伸72 ℃ 7 min；ddH2O為陰性對照。PCR產物用1%瓊脂糖凝膠電泳進行檢測。

1.5 PCR產物序列分析

PCR產物由生工生物工程（上海）股份有限公司測序，序列與GenBank收錄的IBV毒株進行序列比對和遺傳分析。

2 結果與討論

2.1 剖檢病變

死亡雞腎臟腫大，呈典型“花斑腎”，見圖1；輸尿管擴張明顯，輸尿管和泄殖腔內沉積少量白色尿酸鹽結晶；呼吸道病變不明顯，黏膜輕微水腫，氣管內少量炎性滲出物。

2.2 病理結果

肺臟多見副支氣管內出血，見圖2A；副支氣管腔內可見滲出的紅細胞，少量血管周圍可見炎性細胞灶性浸潤（紅色箭頭），未見其它明顯異常。腎臟可見腎小管上皮細胞點狀壞死，見圖2B；壞死細胞胞核固縮深染（黑色箭頭），少見炎性細胞灶性浸潤（紅色箭頭），腎小球內細胞數量以及基質均勻，間質未見明顯增生。

2.3 熒光定量RT-PCR結果

熒光定量RT-PCR結果顯示，2份腎臟組織樣品呈IBV陽性。

2.4 遺傳分析結果

遺傳進化分析顯示該雞場測得的序列與分離株CK/CH/ZJ/HZ12株序列（GI-19基因型；GenBank登錄號為KJ524621）親緣關系最近，CK/CH/ZJ/HZ12株為GI-19基因型，因此本文分離株也為GI-19基因型，進化樹分析結果見圖3。近年來，GI-19基因型IBV分離株已成為我國部分地區(qū)的主流基因型。部分雞場使用的H120疫苗株不能很好地預防類似GI-19基因型IBV感染，因此不僅要合理選擇疫苗并制定科學免疫程序，還要持續(xù)進行IBV流行毒株的監(jiān)測。

3 防控措施

3.1 加強飼養(yǎng)管理

科學的飼養(yǎng)管理方式是預防本病最有效的方法之一。合理飼喂，定期更換飼料，更換飼料要循序漸進，切忌突然更換，不要飼喂發(fā)霉變質的飼料；保證雞群飲水充足，必要時可添加適量礦物質元素及維生素等，提高雞群整體免疫力和抗應激能力，降低感染IBV的概率；及時根據氣溫變化，調節(jié)雞舍內溫度，并保持恒定，雛雞孵育舍內溫度一般不得低于20 ℃；夏季溫度較高時，應及時采取降溫措施，如使用濕簾降溫法，緩慢降低雞舍內的溫度，避免短時間內溫度驟降而導致發(fā)生應激；冬季溫度較低時，應重點保溫，雞舍內過低的溫度會刺激雞群發(fā)生冷應激，引起免疫力降低，容易導致感染IBV；加強雞舍通風管理，有效降低雞舍內的氨氣含量，否則過高的氨氣濃度刺激雞呼吸道，不僅降低雞群自身免疫力，也易引起IBV感染。

3.2 構建生物安全體系

養(yǎng)殖場應合理選址與布局，遠離居民生活區(qū)，按照《動物防疫條件審查辦法》的有關規(guī)定執(zhí)行。嚴格管理養(yǎng)殖場人員進出，新進入場區(qū)的人員，最后1次接觸養(yǎng)殖場外家禽的時間應是72 h之前。堅持自繁自養(yǎng)、全進全出的飼養(yǎng)制度，能有效杜絕傳染性支氣管炎的傳入。若條件不允許，從外地引進雞苗時，宜對引種所在地進行相關調查，避免從疫區(qū)引進雞苗。引進的雞苗不得直接混群飼養(yǎng)，應先隔離飼養(yǎng)，隔離時間不得低于21 d，隔離飼養(yǎng)期間需做好觀察、檢測、監(jiān)測，及時發(fā)現并淘汰潛在的帶毒雞，并經檢測合格后方可并群飼養(yǎng)。

完善清潔與消毒制度[6]。在養(yǎng)殖場入口處設置消毒池，大小與門同寬，用于進出車輛的消毒；設置紫外線消毒室，用于進出人員消毒。定期對雞舍內的器具、食槽、工具等消毒，可選擇對雞群刺激性較低的消毒劑，如新苯扎氯銨溶液噴霧消毒。及時清理雞舍食槽內的剩余飼料，加強食槽的清潔工作。保證雞只飲水的潔凈度，每天清洗飲水器，必要時可對飲水殺菌消毒。建立無害化處理制度，糞便、病雞、死雞應及時清除并無害化處理。定期開展檢測，評估消毒效果。

疫苗免疫是目前預防IBV最有效可行的方法。結合季節(jié)變化、本養(yǎng)殖場疫病監(jiān)測情況、飼養(yǎng)量、雞群狀態(tài)等制定和調整適合本場的免疫程序，疫苗接種前，停用抗生素等藥物，以免干擾疫苗的效果或增加疫苗接種不良反應的發(fā)生風險。雞腎型傳染性支氣管炎具有多種血清型，不同血清型之間交叉免疫保護很弱，因此定期監(jiān)測雞群的抗體水平，根據疫病流行病學變化及相應的抗體水平分析，確定雞群的補免時間，并及時調整免疫程序，最大程度提高疫苗免疫接種的保護效果。

4 小結

目前IB尚無特效治療藥物。加強飼養(yǎng)管理和完善養(yǎng)殖場生物安全水平管理可有效預防該病。同時在該病的流行區(qū)域，應積極開展必要的流行病學調查和預警監(jiān)測，給當地養(yǎng)殖戶提供早期干預和防控技術指導，推動白羽肉雞產業(yè)穩(wěn)定健康發(fā)展。

參考文獻：

[1] 袁穎琳. 雞傳染性支氣管炎流行特點與防控難點分析[J].中國動物保健， 2023， 25（9）：50-51.

[2] 李淑蕓，李通，方和俊，等. 雞傳染性支氣管炎病毒組織和細胞嗜性分子機制研究進展[J].動物醫(yī)學進展， 2024，45（11）：88-93.

[3] 林仲寅，李世恒，黃兵，等.一例肉雞傳染性支氣管炎與H9亞型禽流感混合感染的病例分析[J].家禽科學， 2024，46（1）：16-22.

[4] 于逢強，王春華.雞腎型傳染性支氣管炎病毒分離與鑒定[J].中國動物保健， 2024， 26（4）：119-120.

[5] 張春陽，蘭鄒然，李宏梅，等.山東部分地區(qū)禽傳染性支氣管炎流行病學調查[J].中國家禽， 2024，46（6）：86-92.

[6] 郭麗，范鋒.一例雞腎型傳染性支氣管炎的綜合防治[J].家禽科學，2024，46（8）：74-76.

注：A：肺臟；B：腎臟。

注：S1-1 Sep、S1-2 Sep為熒光定量RT-PCR陽性樣品測得序列。

Diagnosis and Genetic Analysis of a case of Chicken Nephritogenic Infectious Bronchitis

LIU Yanhan， WANG Guisheng， CHEN Jing， WANG Miaoli， CHEN Feng，

ZHENG Mengjia， LAN Zouran

[Shandong Center for Animal Disease Control and Prevention （Shandong Provincial Center for

Epidemiological Surveillance of Zoonotic Diseases）， Jinan 250100， China]

Abstract： In 2023， at a certain broiler farm in Linyi City， Shandong Province， white-feathered broilers presented symptoms such as depression， moist rales in breathing， diarrhea， and white dysentery. As the disease course prolonged， death cases emerged， with a relatively low mortality rate. Post-mortem examination revealed enlarged kidneys， dilated ureters， and tubes filled with white urate crystals. The results of fluorescence quantitative RT-PCR detection indicated a strong positive result for IBV. Through the clinical lesions and post-mortem changes of the diseased chickens， combined with laboratory tests， it was confirmed as chicken infectious bronchitis. Through sequence analysis， it was discovered that the IBV sequence infecting this chicken farm had the closest genetic relationship with the CK/CH/ZJ/HZ12 strain （GI-19 genotype;GenBankNo.KJ524621）， and it was ultimately diagnosed as chicken GI-19 genotype IBV. It is recommended that this farm enhance the feeding and management measures， improve its own biosafety management level， and simultaneously provide technical references for the diagnostic thinking of IBV.

Keywords： Chicken; Infectious bronchitis; Diagnosis; Genetic analysis; Biosafety