爪哇蟲(chóng)草菌可濕性粉劑研制及其對(duì)介殼蟲(chóng)的田間防效

摘""要：介殼蟲(chóng)是重要的農(nóng)林害蟲(chóng)，對(duì)農(nóng)作物、果樹(shù)、觀賞植物和林木均有不同程度的危害。爪哇蟲(chóng)草菌（Cordyceps"javanica）IJID003對(duì)介殼蟲(chóng)具有強(qiáng)致病性，在微生物農(nóng)藥開(kāi)發(fā)方面具有較大潛力，對(duì)其可濕性粉劑的研發(fā)以及生產(chǎn)工藝優(yōu)化，是推進(jìn)其產(chǎn)業(yè)化、商業(yè)化的措施之一，且對(duì)推進(jìn)農(nóng)林業(yè)的綠色發(fā)展具有重要意義。本研究通過(guò)單因素試驗(yàn)設(shè)計(jì)，篩選爪哇蟲(chóng)草菌IJID003最優(yōu)固體發(fā)酵基質(zhì)和外源添加物；通過(guò)測(cè)定助劑與爪哇蟲(chóng)草菌IJID003的相容性及其有效性能，篩選適宜菌株的最佳載體、潤(rùn)濕劑、分散劑和紫外保護(hù)劑，初步研制爪哇蟲(chóng)草菌的可濕性粉劑配方；在室外對(duì)白蘭捷氏吹綿蚧（Icerya"jacobsoni）雌成蟲(chóng)進(jìn)行田間防效試驗(yàn)。結(jié)果表明：爪哇蟲(chóng)草菌最優(yōu)發(fā)酵基礎(chǔ)基質(zhì)為大麥，最適基質(zhì)配方組合為大麥與麥麩7∶1（w/w）；最優(yōu)外源添加物組合為1%葡萄糖的碳源、1%酸水解酪蛋白的氮源、2%氯化鉀的無(wú)機(jī)鹽、1%甘氨酸的氨基酸和0.1%蜂蛹?xì)し鄣膸锥≠|(zhì)成分。爪哇蟲(chóng)草菌IJID003可濕性粉劑的最佳配方為20%爪哇蟲(chóng)草菌純孢子粉、1%潤(rùn)濕劑Morwet"EFW、5%分散劑Morwet"D-450、1%紫外保護(hù)劑熒光素鈉CBS-X和73%載體硅藻土。田間防效結(jié)果表明，用孢子濃度為6×108"CFU/mL爪哇蟲(chóng)草菌制劑能有效防治捷氏吹綿蚧雌成蟲(chóng)，第21天防效達(dá)92.50%，與對(duì)照藥劑25%噻蟲(chóng)嗪可濕性粉劑4000倍液防效（95.50%）相比無(wú)顯著差異。綜上所述，研制爪哇蟲(chóng)草菌IJID003可濕性粉劑對(duì)捷氏吹綿蚧具有較好的防效，在替代部分化學(xué)農(nóng)藥進(jìn)行綠色防控中具有重要的應(yīng)用前景。

關(guān)鍵詞：爪哇蟲(chóng)草菌IJID003；固體發(fā)酵條件；可濕性粉劑；捷氏吹綿蚧；田間防效中圖分類(lèi)號(hào)：S476.1""""""文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

Development"of"Wettable"Powder"of"Cordyceps"javanica"and"Its"Toxicity"Against"Scale"Insect"Pest

DENG"Jiaru，"SUN"Longhua*，"XU"Shulan，"Zhang"Jin’ai

Guangzhou"Institute"of"Forestry"and"Landscape"Architecture"/"Guangzhou"Collaborative"Innovation"Center"on"Science-tech"of"Ecology"and"Landscape，"Guangzhou，"Guangdong"510405，"China

Abstract："The"scale"insect"pest"is"the"main"pest"in"agroforestry，"causing"varying"degrees"of"damage"to"crops，"fruit"trees，"ornamental"plants，"and"forest"trees."The"fungus"Cordyceps"javanica"IJID003"exhibits"strong"pathogenicity"against"scale"insects，"making"it"a"promising"candidate"for"the"development"of"microbial"pesticides."Research"and"development"efforts"focusing"on"its"wettable"powder"formulation"and"the"optimization"of"its"production"process"are"essential"steps"toward"its"industrialization"and"commercialization."The"efforts"are"also"crucial"for"promoting"sustainable"agricultural"practices"and"achieving"green"pest"management"strategies."In"this"study，"a"single-factor"test"was"employed"to"identify"the"optimal"solid"fermentation"substrates"and"exogenous"additives"of"strain"IJID003."This"research"screened"the"optional"carrier，"wetting"agent，"dispersing"agent"and"UV"protective"agent"of"the"C."javanica"by"measuring"the"compatibility"and"its"effective"performance，"which"developed"the"wettable"powder"formula"of"the"C."javanica"preliminarily."The"field"efficacy"of"the"C."javanica"wettable"powder"was"evaluated"against"female"adults"of"Icerya"jacobsoni"on"Michelia"alba."The"optimal"spore-producing"base"substrate"for"C."javanica"was"barley."The"best"substrate"formulation"was"a"mixture"of"barley"（7"parts）"and"wheat"bran"（1"part）"by"weight."The"optimal"exogenous"additives"included"1%"glucose"as"a"carbon"source，"1%"acid"hydrolyzed"casein"as"a"nitrogen"source，"2%"potassium"chloride"as"an"inorganic"salt，"1%"glycine"as"an"amino"acid，"and"bee"pupal"body"wall"powder"as"a"chitin"source."The"optimal"formulation"for"the"strain"IJID003"wettable"powder"was"20%"spore"powder"of"IJID003，"1%"wetting"agent"Morwet"EFW，"5%"dispersing"agent"Morwet"D-450，"1%"UV"protectant"CBS-X，"and"73%"carrier"diatomaceous"earth."Field"trials"demonstrated"that"a"spore"concentration"of"6×108"CFU/mL"of"C."javanica"wettable"powder"effectively"controlled"female"I."jacobsoni"adults"on"M."alba，"with"an"efficacy"of"92.50%"at"21"days"post-inoculation."This"efficacy"was"not"significantly"different"from"that"of"the"control"insecticide，"a"4000-fold"dilution"of"25%"thiamethoxam"wettable"powder，"which"achieved"a"control"efficiency"of"95.50%."In"conclusion，"the"strain"IJID003"wettable"powder"shows"excellent"potential"for"the"green"management"of"scale"insects"and"holds"significant"promise"as"a"sustainable"alternative"to"chemical"pesticides.

Keywords："Cordyceps"javanica"IJID003;"solid"fermentation"conditions;"wettable"powder;"Icerya"jacobsoni;"field"efficacy

DOI："10.3969/j.issn.1000-2561.2025.02.012

介殼蟲(chóng)，屬于昆蟲(chóng)綱（Insecta）半翅目（Hemiptera）胸喙亞目（Sternorhyncha）的蚧次目（Coccomorpha）。根據(jù)ScaleNet估計(jì)，全世界記錄的介殼蟲(chóng)有48科1144屬約7812種[1]。中國(guó)已知16科261屬1016種，大陸地區(qū)已知16科249屬830種[2]。介殼蟲(chóng)個(gè)體小，對(duì)環(huán)境的適應(yīng)能力很強(qiáng)，常聚集于寄主植物葉片背面或枝干表面，隱匿性強(qiáng)，不易被發(fā)現(xiàn)。大多數(shù)介殼蟲(chóng)通過(guò)刺吸植物汁液為食，排泄蜜露會(huì)誘發(fā)煤污病，降低植物的光合作用；少部分種類(lèi)為害植物地下部分的根、塊根[3]，嚴(yán)重影響城市園林景觀和農(nóng)林生產(chǎn)效益[4-5]。目前，在城市園林維護(hù)和農(nóng)林生產(chǎn)中，針對(duì)介殼蟲(chóng)的防治仍以化學(xué)防治為主。但由于介殼蟲(chóng)體表分泌蠟質(zhì)，低劑量化學(xué)藥劑的藥效并不突出，而化學(xué)藥劑的頻繁、過(guò)量使用，導(dǎo)致介殼蟲(chóng)抗藥性問(wèn)題日益突出。已有研究報(bào)道有些介殼蟲(chóng)對(duì)有機(jī)磷類(lèi)丙溴磷、氨基甲酸酯類(lèi)硫雙威和新煙堿類(lèi)吡蟲(chóng)啉等化學(xué)藥劑已產(chǎn)生一定的抗藥性[6]，導(dǎo)致介殼蟲(chóng)防治難度進(jìn)一步增大。因此，如何減少化學(xué)農(nóng)藥使用量、高效綠色防控農(nóng)林介殼蟲(chóng)已成為植保領(lǐng)域關(guān)注的熱點(diǎn)。昆蟲(chóng)病原真菌因具有廣譜殺蟲(chóng)活性、環(huán)保及靶標(biāo)害蟲(chóng)不易產(chǎn)生抗藥性等優(yōu)點(diǎn)，被認(rèn)為是化學(xué)藥劑的安全替代品。

一直以來(lái)，介殼蟲(chóng)病原真菌資源被大量挖掘，如球孢白僵菌（Beauveria"bassiana）、黃葉錐孔藻（Conoideocrella"luteorostrata）、淡紫擬青霉（Paecilomyces"lilacinus）、金龜子綠僵菌（Metarhizium"anisopliae）、爪哇蟲(chóng)草菌（Cordyceps"javanica）、木賊鐮刀菌（Fusarium"equiseti）、蠟蚧輪枝菌（Lecanicillium"lecanii）等[7-12]。其中，爪哇蟲(chóng)草菌（原被稱(chēng)為爪哇棒束孢）屬于蟲(chóng)草菌科（Cordycipitaceae）蟲(chóng)草菌屬（Cordyceps），是一類(lèi)重要的生防真菌，具有廣譜殺蟲(chóng)活性[9，"13-16]。

針對(duì)爪哇蟲(chóng)草菌固體發(fā)酵條件優(yōu)化及可濕性粉劑研制的研究，目前國(guó)內(nèi)外均有報(bào)道。KIM等[17]研究發(fā)現(xiàn)爪哇蟲(chóng)草菌在大麥基質(zhì)中培養(yǎng)具有較好的產(chǎn)孢量，且在大麥中添加2%碳酸鈣+2%硫酸鈣、酵母提取物、酪蛋白或谷蛋白也會(huì)顯著增加分生孢子的產(chǎn)量。ORDAZ-HERNáNDEZ等[18]通過(guò)測(cè)定分生孢子產(chǎn)量、活力、疏水性、貨架期和對(duì)柑橘木虱（Diaphorina"citri）的致病性綜合評(píng)價(jià)了棕櫚仁粕對(duì)爪哇蟲(chóng)草菌發(fā)酵水平的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)在稻谷中添加5%棕櫚仁粕，使分生孢子產(chǎn)量提高了40%，并且提高了爪哇蟲(chóng)草菌對(duì)柑橘木虱成蟲(chóng)的致病力。陳名等[19]研制出對(duì)假眼小綠葉蟬（Empoasca"vitis）有高毒力的爪哇蟲(chóng)草菌粉劑，篩選出最佳助劑配方，確定配方為10%分生孢子粉，3%濕潤(rùn)劑A，5%分散劑B，1%紫外保護(hù)劑熒光素鈉，0.5%抗氧化劑C，以海泡石作為載體補(bǔ)足到100%，生物測(cè)定結(jié)果顯示該制劑對(duì)假眼小綠葉蟬的侵染死亡率達(dá)100%。但以上研究中的爪哇蟲(chóng)草菌產(chǎn)孢率低限制了其生產(chǎn)應(yīng)用。因此，提高爪哇蟲(chóng)草菌的發(fā)酵水平和研制適宜的粉劑對(duì)提升爪哇蟲(chóng)草菌的應(yīng)用效果和加快產(chǎn)業(yè)化進(jìn)程具有重要意義。

本研究從介殼蟲(chóng)中分離篩選出一株優(yōu)良爪哇蟲(chóng)草菌菌株IJID003（發(fā)明專(zhuān)利授權(quán)號(hào)：ZL201811348365.8），對(duì)捷氏吹綿蚧（Icerya"jacobsoni）、扶桑綿粉蚧（Phenacoccus"solenopsis）等多種農(nóng)林重要介殼蟲(chóng)具有強(qiáng)侵染活性[8]，具有生防菌劑產(chǎn)業(yè)化發(fā)展的潛力。由于地理環(huán)境及寄主的不同，生防菌為了適應(yīng)環(huán)境會(huì)進(jìn)化出不同的生理生化特性和致病性，因此需要針對(duì)菌株IJID003提升發(fā)酵水平，研制適宜制劑，最大程度地開(kāi)發(fā)防控介殼蟲(chóng)的微生物菌劑。本研究通過(guò)篩選固體發(fā)酵基質(zhì)組合和外源添加物組合，優(yōu)化爪哇蟲(chóng)草菌的固體發(fā)酵條件；進(jìn)一步篩選載體、潤(rùn)濕劑、分散劑和紫外保護(hù)劑，研制可濕性粉劑配方并進(jìn)行捷氏吹綿蚧田間防效試驗(yàn)，以期為爪哇蟲(chóng)草菌IJID003生防菌劑的產(chǎn)業(yè)化發(fā)酵擴(kuò)培及農(nóng)林重要介殼蟲(chóng)的綠色防控奠定基礎(chǔ)。

1""材料與方法

1.1""材料

1.1.1""植物材料及昆蟲(chóng)材料""白蘭（Michelia"alba）為2年生苗，株高80"cm，將15株白蘭盆栽苗進(jìn)行地栽，日常澆水管理。在形成穩(wěn)定的生長(zhǎng)狀態(tài)后，持續(xù)接種捷氏吹綿蚧，使每株白蘭植株的蟲(chóng)口密度達(dá)20頭雌成蟲(chóng)。

1.1.2""菌株""爪哇蟲(chóng)草菌IJID003從廣州越秀公園白蘭植株上的捷氏吹綿蚧（I."jacobsoni）分離得到[8]。

1.1.3""主要試劑""甘露糖和D-山梨醇購(gòu)自生工生物工程（上海）股份有限公司，葡萄糖、淀粉和氯化鉀購(gòu)自天津市大茂化學(xué)試劑廠，蛋白胨購(gòu)自碧迪醫(yī)療器械（上海）有限公司，酸水解酪蛋白購(gòu)自上海麥克林生化科技有限公司，酵母提取物購(gòu)自卡邁舒（上海）生物科技有限公司，甘氨酸購(gòu)自北京鼎國(guó)昌盛生物技術(shù)有限責(zé)任公司，硫酸鈣和碳酸鈣購(gòu)自賽默飛世爾科技（中國(guó)）有限公司，蝦殼甲殼素購(gòu)自西格瑪奧德里奇（上海）貿(mào)易有限公司，蟹殼甲殼素、拉開(kāi)粉BX、十二烷基硫酸鈉（SDS）和十二烷基苯硫酸鈉（SDBS）購(gòu)自上海阿拉丁生化科技股份有限公司，Morwet"EFW、Dispwet"WP400、Borresperse"NA、Morwet"D-25和Morwet"D-450均購(gòu)自南京捷潤(rùn)科技有限公司，熒光素鈉CBS-X購(gòu)自武漢卡諾斯科技有限公司，腐殖酸購(gòu)自阿法埃莎（中國(guó)）化學(xué)有限公司，紫外吸收劑BASF"326購(gòu)自巴斯夫（中國(guó)）有限公司，25%噻蟲(chóng)嗪可濕性粉劑購(gòu)自瑞士先正達(dá)作物保護(hù)有限公司。

1.1.4""主要儀器""生化培養(yǎng)箱（LRH-250F），上海一恒；高壓滅菌鍋GI54TW，致微（廈門(mén)）；冷凍干燥機(jī)CoolSafe"55-4，丹麥Labogene。

1.2""方法

1.2.1""固體發(fā)酵基質(zhì)的篩選""（1）基礎(chǔ)發(fā)酵基質(zhì)：以廣口玻璃飯盒（17.50"cm×13.0"cm×6.50"cm）作為容器，分別裝入100"g大麥、100"g黃小米、100"g玉米渣、100"g糙米和100"g黑米，120"℃高壓滅菌60"min后備用。配制成濃度為1×106"CFU/mL的分生孢子懸浮液，按體積質(zhì)量分?jǐn)?shù)為15%的接種量與基質(zhì)混合均勻。用Parafilm封口膜將玻璃飯盒封口，置于28"℃的培養(yǎng)箱中，靜置暗培養(yǎng)10"d，每組3個(gè)重復(fù)。取培養(yǎng)后的發(fā)酵基質(zhì)3"g，置于27"mL含0.02%吐溫80的無(wú)菌水中，并在振蕩器中渦旋1"min，利用無(wú)菌紗布過(guò)濾后，統(tǒng)計(jì)分生孢子數(shù)，并計(jì)算產(chǎn)孢量。

（2）輔助發(fā)酵基質(zhì)：以最優(yōu)基礎(chǔ)發(fā)酵基質(zhì)為載體，進(jìn)一步添加輔助基質(zhì)，設(shè)置基礎(chǔ)基質(zhì)與輔助基質(zhì)比例為1∶1（w/w），總固體發(fā)酵基質(zhì)質(zhì)量為100"g，具體組合為大麥+玉米渣、大麥+糙米、大麥+黑米、大麥+黃小米、大麥+稻殼、大麥+麥麩、大麥+黃豆粉，以大麥單獨(dú)發(fā)酵作為對(duì)照，每組3個(gè)重復(fù)。參照1.2.1-（1）的方法接種培養(yǎng)并統(tǒng)計(jì)產(chǎn)孢量。

以最優(yōu)基礎(chǔ)基質(zhì)為載體，總固體發(fā)酵基質(zhì)質(zhì)量為100"g，設(shè)置基礎(chǔ)基質(zhì)比例（w/w）24∶1、17∶1、11∶1、7∶1、5∶1、1∶1共6種，每組3個(gè)重復(fù)。參照1.2.1-（1）的方法接種培養(yǎng)并統(tǒng)計(jì)產(chǎn)孢量。

1.2.2""固體發(fā)酵條件的優(yōu)化""（1）外源添加物的初篩。參考KIM等[17]的方法，稍作修改。以1.2.1中篩選的固體基質(zhì)組合為基礎(chǔ)，總固體發(fā)酵基質(zhì)質(zhì)量為100"g，加入不同碳源（2%甘露糖、2%D-山梨醇、2%葡萄糖、2%淀粉）、氮源（2%蛋白胨、2%酸水解酪蛋白、1.32%酵母提取物）、無(wú)機(jī)鹽（5.5%氯化鉀、2%碳酸鈣+2%硫酸鈣）和氨基酸（2%甘氨酸）等。以大麥-麥麩基質(zhì)未添加任何外源添加物作為對(duì)照（CK），每組3個(gè)重復(fù)。按體積質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%的分生孢子接種量，料水比為4∶1（w/w）加入無(wú)菌水，與基質(zhì)混合均勻，用Parafilm封口膜將玻璃飯盒封口，置于28"℃的培養(yǎng)箱中，靜置暗培養(yǎng)10"d，每組3個(gè)重復(fù)。參照1.2.1-（1）的方法統(tǒng)計(jì)產(chǎn)孢量。

（2）外源添加物組合的篩選。進(jìn)一步選用最佳碳源和氮源，篩選最優(yōu)外源添加物組合。總固體發(fā)酵基質(zhì)質(zhì)量為100"g，設(shè)置6個(gè)組合：大麥+麥麩+2%葡萄糖（T1）、大麥+麥麩+2%酸水解酪蛋白（T2）、大麥+麥麩+2%葡萄糖+2%酸水解酪蛋白（T3）、大麥+麥麩+2%葡萄糖+2%酸水解酪蛋白+5.5%氯化鉀（T4）、大麥+麥麩+2%葡萄糖+2%酸水解酪蛋白+5.5%氯化鉀+2%甘氨酸（T5）、大麥+麥麩+2%葡萄糖+2%酸水解酪蛋白+5.5%氯化鉀+2%碳酸鈣+2%硫酸鈣（T6），以大麥-麥麩基質(zhì)未添加任何外源添加物作為對(duì)照（CK），每組3個(gè)重復(fù)，參照1.2.1-（1）的方法接種培養(yǎng)并統(tǒng)計(jì)產(chǎn)孢量。

（3）外源添加物組合比例的篩選。采用以上最佳發(fā)酵條件，進(jìn)一步調(diào)整外源添加物組合比例?？偣腆w發(fā)酵基質(zhì)質(zhì)量為100"g，設(shè)置4個(gè)組合：大麥+麥麩+0.1%葡萄糖+0.1%酸水解酪蛋白+0.2%氯化鉀+0.1%甘氨酸（t1）、大麥+麥麩+0.5%葡萄糖+0.5%酸水解酪蛋白+1%氯化鉀+0.5%甘氨酸（t2）、大麥+麥麩+1%葡萄糖+1%酸水解酪蛋白+2%氯化鉀+1%甘氨酸（t3）、大麥+麥麩+2%葡萄糖+2%酸水解酪蛋白+5.5%氯化鉀+2%甘氨酸（t4），以大麥-麥麩基質(zhì)未添加任何外源添加物作為對(duì)照（CK），每組3個(gè)重復(fù)，參照1.2.1-（1）的方法接種培養(yǎng)并統(tǒng)計(jì)產(chǎn)孢量。

（4）外源幾丁質(zhì)成分的篩選。保持以上最佳發(fā)酵條件，分別加入1%蝦殼粉、0.1%蜂蛹?xì)し邸?.1%介殼粉、1%蟹殼粉，以未添加幾丁質(zhì)作為對(duì)照，每組3個(gè)重復(fù)，參照1.2.1-（1）的方法接種培養(yǎng)并統(tǒng)計(jì)產(chǎn)孢量。

1.2.3""粉劑助劑的篩選""（1）菌株IJID003純孢子粉的制備。按1.2.2固體發(fā)酵優(yōu)化后的條件進(jìn)行淺盤(pán)發(fā)酵，稱(chēng)取171.43"g大麥和28.57"g麥麩，平鋪在不銹鋼淺盤(pán)（40.00"cm×30.00"cm×6.00"cm）中，用錫箔紙密封滅菌。在50"mL無(wú)菌水中加入按1.2.2篩選出的最佳添加物組合及其最佳比例，溶解后經(jīng)細(xì)菌過(guò)濾器（0.22"μm孔徑）過(guò)濾，制成營(yíng)養(yǎng)溶液，備用。將20"mL濃度為1×106"CFU/mL的IJID003孢子懸浮液、50"mL營(yíng)養(yǎng)溶液和0.2"g蜂蛹?xì)し奂尤牖|(zhì)中，混勻，用Parafilm封口膜封口，于28"℃培養(yǎng)箱中暗培養(yǎng)10"d。待淺盤(pán)基質(zhì)表面布滿(mǎn)分生孢子，利用0.02%吐溫80的無(wú)菌水洗脫過(guò)濾，用冷凍干燥機(jī)干燥24"h，收集獲得菌株IJID003的純孢粉。

（2）載體的篩選。將325目的硅藻土、凹凸棒土、蒙脫石、膨潤(rùn)土、滑石粉和白炭黑按1、3、5"mg/mL的終濃度分別加入到50"mL孢子萌發(fā)液（蔗糖20"g/L、蛋白胨5"g/L、磷酸二氫鉀5"g/L）中，121"℃高溫滅菌20"min，冷卻后備用。取5"mL濃度為1×107"CFU/mL的爪哇蟲(chóng)草菌的孢子懸浮液加入含有不同載體的孢子萌發(fā)液中，于120"r/min，28"℃恒溫培養(yǎng)12"h，用血球計(jì)數(shù)板對(duì)爪哇蟲(chóng)草菌的孢子萌發(fā)數(shù)進(jìn)行計(jì)數(shù)。進(jìn)一步參照GB/T5451—2001[20]的方法測(cè)定載體的潤(rùn)濕性，作為選擇載體的參考條件。

（3）潤(rùn)濕劑的篩選。將拉開(kāi)粉BX、十二烷基硫酸鈉（SDS）、十二烷基苯硫酸鈉（SDBS）、Morwet"EFW和Dispwet"WP400按質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.100%、0.125%和0.500%分別加入到50"mL孢子萌發(fā)液中，以未添加分散劑作為對(duì)照，于121"℃高溫滅菌20"min，冷卻后備用。取5"mL濃度為1×"107"CFU/mL的爪哇蟲(chóng)草菌的孢子懸浮液加入含有不同載體的孢子萌發(fā)液中，于120"r/min，28"℃恒溫培養(yǎng)12"h，用血球計(jì)數(shù)板對(duì)爪哇蟲(chóng)草菌的孢子萌發(fā)數(shù)進(jìn)行計(jì)數(shù)。進(jìn)一步參照GB/T5451—2001[20]的方法測(cè)定潤(rùn)濕性，作為選擇潤(rùn)濕劑的參考條件。

（4）分散劑的篩選。將木質(zhì)素Borresperse"NA、Morwet"D-425和Morwet"D-450分別按照1.0、2.5、5.0"mg/mL的終濃度，加入到50"mL孢子萌發(fā)液中，以未添加分散劑作為對(duì)照，于121"℃高溫滅菌20"min，冷卻后備用。取5"mL濃度為1×107"CFU/mL的爪哇蟲(chóng)草菌的孢子懸浮液加入含有不同載體的孢子萌發(fā)液中，于120"r/min，28"℃恒溫培養(yǎng)12"h，用血球計(jì)數(shù)板對(duì)爪哇蟲(chóng)草菌的孢子萌發(fā)數(shù)進(jìn)行計(jì)數(shù)。按爪哇蟲(chóng)草菌20%、潤(rùn)濕劑1%、分散劑5%、以載體補(bǔ)足100%的配比制成供試樣品，參照GB/T"14825—2023[21]的方法測(cè)定樣品的懸浮率。

（5）紫外保護(hù)劑的篩選。分別將熒光素鈉CBS-X、腐殖酸、BASF"326按照100、500、1000"μg/mL的終濃度加入50"mL孢子萌發(fā)液中，于121"℃高溫滅菌20"min，冷卻后備用。取5"mL濃度為1×107"CFU/mL的爪哇蟲(chóng)草菌孢子懸浮液加入含有不同紫外保護(hù)劑的孢子萌發(fā)液中，于120"r/min，28"℃恒溫培養(yǎng)12"h，用血球計(jì)數(shù)板對(duì)爪哇蟲(chóng)草菌的孢子萌發(fā)數(shù)進(jìn)行計(jì)數(shù)。分別將熒光素鈉CBS-X、腐殖酸、BASF"326按照2000"μg/mL的終濃度加入裝有10"mL濃度為1×107"CFU/mL分生孢子液的6"cm培養(yǎng)皿中，于20"W紫外燈下30"cm（約270"μW/cm2）處照射，在15、30、60"min時(shí)，分別取出3"mL分生孢子液混合物于15"mL離心管中，加入3"mL孢子萌發(fā)液，于120"r/min，28"℃恒溫培養(yǎng)12"h，用血球計(jì)數(shù)板對(duì)爪哇蟲(chóng)草菌的孢子萌發(fā)數(shù)進(jìn)行計(jì)數(shù)，以未加入紫外保護(hù)劑的分生孢子液作為對(duì)照。

1.2.4""田間防治試驗(yàn)""于2024年4月進(jìn)行防效試驗(yàn)，廣州平均氣溫24.5"℃，降雨頻繁，相對(duì)濕度80%以上。稱(chēng)取按本研究配方研制的可濕性粉劑和1.2.3-（1）制備的菌株IJID003純孢粉分別加入到清水中，配置成孢子濃度為6×108"CFU/mL的藥液（分別為可濕性粉劑藥液和純孢粉藥液），并加入0.2%吐溫80黏著劑，使吐溫80終濃度為0.02%。分別將50"mL上述藥液置于噴霧器中，對(duì)白蘭植株上的捷氏吹綿蚧均勻噴霧，以噴施0.02%吐溫80+清水為對(duì)照，每個(gè)處理1株白蘭，重復(fù)3次。在菌劑處理后的第7、14、21天觀察捷氏吹綿蚧蟲(chóng)體的侵染情況，統(tǒng)計(jì)致死數(shù)，其中蟲(chóng)體體表有菌絲覆蓋且無(wú)明顯活動(dòng)能力即為有效致死，計(jì)算各處理組的防治效果。

在室外種植的6株健康白蘭上進(jìn)行化學(xué)藥劑防效試驗(yàn)，捷氏吹綿蚧雌成蟲(chóng)的蟲(chóng)口密度同上，配制25%噻蟲(chóng)嗪可濕性粉劑4000倍藥液50"mL，對(duì)白蘭植株上的捷氏吹綿蚧均勻噴霧，以只噴清水為對(duì)照，每個(gè)處理1株白蘭，重復(fù)3次。分別在處理后第7、14、21天觀察并記錄捷氏吹綿蚧死亡蟲(chóng)數(shù)，統(tǒng)計(jì)致死數(shù)，其中捷氏吹綿蚧體表發(fā)黑即為有效致死，并計(jì)算防治效果。

蟲(chóng)口減退率=（施藥前活蟲(chóng)數(shù)–施藥后活蟲(chóng)數(shù)）/施藥前活蟲(chóng)數(shù)×100%；防效=（處理組蟲(chóng)口減退率–對(duì)照蟲(chóng)口減退率）/（1–對(duì)照蟲(chóng)口減退率）×100%。

2""結(jié)果與分析

2.1""固體發(fā)酵基質(zhì)的篩選

2.1.1""基礎(chǔ)發(fā)酵基質(zhì)的篩選""爪哇蟲(chóng)草菌在不同基礎(chǔ)基質(zhì)中進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，培養(yǎng)10"d后，在大麥中的產(chǎn)孢量最大，為131.67×9×106"CFU/g，其次是黃小米，產(chǎn)孢量為60.00×9×106"CFU/g，而在玉米渣、糙米和黑米基質(zhì)中培養(yǎng)產(chǎn)孢量最少（圖1）。因此，篩選大麥為爪哇蟲(chóng)草菌的基礎(chǔ)發(fā)酵基質(zhì)。

2.1.2""輔助發(fā)酵基質(zhì)的篩選""爪哇蟲(chóng)草菌在大麥與不同輔助基質(zhì)組合中進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，培養(yǎng)10"d后，爪哇蟲(chóng)草菌在大麥+麥麩組合發(fā)酵中的產(chǎn)孢量最大，為205.00×9×106"CFU/g，大麥的產(chǎn)孢量次之，為142.50×9×106"CFU/g，而其余6種組合的產(chǎn)孢量均顯著低于大麥+麥麩、大麥（圖2）。因此，篩選大麥和麥麩為爪哇蟲(chóng)草菌的固體發(fā)酵基質(zhì)組合。

2.1.3""基礎(chǔ)與輔助發(fā)酵基質(zhì)比的篩選""爪哇蟲(chóng)草菌在不同比例的大麥與麥麩中進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，培養(yǎng)10"d后，爪哇蟲(chóng)草菌在大麥與麥麩組合比例為7∶1時(shí)的產(chǎn)孢量最大，為243.75×9×106"CFU/g，其次為1∶1和11∶1，產(chǎn)孢量分別為192.50×9×106"CFU/g和161.75×9×106"CFU/g，其余比例的產(chǎn)孢量均顯著低于上述3個(gè)比例（圖3）。因此，爪哇蟲(chóng)草菌固體發(fā)酵基礎(chǔ)基質(zhì)與輔助基質(zhì)的最佳基質(zhì)比例為大麥與麥麩（w/w）7∶1。

2.2""固體發(fā)酵條件的優(yōu)化

2.2.1""外源添加物的初篩""爪哇蟲(chóng)草菌在含不同碳源、氮源、其他營(yíng)養(yǎng)元素添加物的大麥與麥麩組合基質(zhì)中發(fā)酵培養(yǎng)，培養(yǎng)10"d后，爪哇蟲(chóng)草菌在含碳源2%葡萄糖的發(fā)酵基質(zhì)中產(chǎn)孢量最大，為413.80×9×106"CFU/g；在含氮源2%酸水解酪蛋白的發(fā)酵基質(zhì)中產(chǎn)孢量顯著低于前者，為305.25×9×"106"CFU/g。在含5.5%氯化鉀、2%甘氨酸以及2%碳酸鈣+2%硫酸鈣的發(fā)酵基質(zhì)中的產(chǎn)孢量次之，分別為193.50×9×106、190.00×9×106、183.00×9×"106"CFU/g，其余添加物的產(chǎn)孢量均較低（圖4）。因此，篩選2%葡萄糖為碳源，2%酸水解酪蛋白為氮源，而5.5%氯化鉀、2%甘氨酸以及2%碳酸鈣+2%硫酸鈣為其他營(yíng)養(yǎng)元素待選。

2.2.2""外源添加物組合物的篩選""爪哇蟲(chóng)草菌在含不同添加物及組合的大麥與麥麩組合基質(zhì)中發(fā)酵培養(yǎng)，培養(yǎng)10"d后，爪哇蟲(chóng)草菌在T5（大麥+麥麩+2%葡萄糖+2%酸水解酪蛋白+5.5%氯化鉀+2%甘氨酸）的發(fā)酵基質(zhì)中產(chǎn)孢量最大，為477.30×"9×106"CFU/g，顯著大于其他組合的產(chǎn)孢量，而CK（大麥）的發(fā)酵基質(zhì)產(chǎn)孢量最小，為199.68×9×"106"CFU/g（圖5）。因此，篩選酸水解酪蛋白、葡萄糖、氯化鉀和甘氨酸為最佳外源添加物組合。

2.2.3""外源添加物不同比例組合的篩選""爪哇蟲(chóng)草菌在含不同外源添加物比例的大麥與麥麩組合基質(zhì)中發(fā)酵培養(yǎng)，培養(yǎng)10"d后，爪哇蟲(chóng)草菌在t3組合的發(fā)酵基質(zhì)中產(chǎn)孢量最大，為795.00×9×"106"CFU/g；而在t4和t2組合的產(chǎn)孢量次之，分別為600.00×9×106"CFU/g和362.50×9×106"CFU/g；而在t1組合的發(fā)酵基質(zhì)中產(chǎn)孢量最小，為142.50×9×106"CFU/g（圖6）。因此，篩選t3組合，即1%酸水解酪蛋白+1%葡萄糖+2%氯化鉀+1%甘氨酸為最佳外源添加物組合。

2.2.4""外源幾丁質(zhì)成分的篩選""基于上述固體發(fā)酵條件的優(yōu)化結(jié)果，將不同外源幾丁質(zhì)成分加入固體基質(zhì)中進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，培養(yǎng)10"d后，爪哇蟲(chóng)草菌在添加介殼粉的發(fā)酵基質(zhì)的產(chǎn)孢量為1320.00×9×106"CFU/g，顯著高于其他外源幾丁質(zhì)成分的基質(zhì)，蜂蛹?xì)し鄞沃?，?59.50.00×9×"106"CFU/g（圖7）。由于介殼粉需從寄主上取得，成本相對(duì)較高，因此，篩選蜂蛹?xì)し圩鳛樘娲闅し鄣耐庠磶锥≠|(zhì)成分。

2.3""粉劑助劑的篩選

2.3.1""載體的篩選""爪哇蟲(chóng)草菌在含不同載體的孢子萌發(fā)液中進(jìn)行培養(yǎng)，結(jié)果表明，1、3、5"mg/mL滑石粉、硅藻土和蒙脫石與爪哇蟲(chóng)草菌的相容性均較好。爪哇蟲(chóng)草菌在含1"mg/mL滑石粉、硅藻土和蒙脫石的孢子萌發(fā)液中培養(yǎng)后，孢子萌發(fā)率分別為97.00%、92.50%和92.50%；在含3"mg/mL滑石粉、硅藻土和蒙脫石的孢子萌發(fā)液中，其孢子萌發(fā)率分別為92.50%、91.00%和93.00%；在含5"mg/mL滑石粉、硅藻土和蒙脫石的孢子萌發(fā)液中，其孢子萌發(fā)率分別為85.00%、87.50%和86.50%；而載體濃度為5"mg/mL時(shí)，爪哇蟲(chóng)草菌在凹凸棒土、膨潤(rùn)土和白炭黑孢子萌發(fā)液中的孢子萌發(fā)率分別為8.00%、5.50%和15.00%，顯著低于滑石粉、硅藻土和蒙脫石（圖8）。由此可見(jiàn)，滑石粉、硅藻土和蒙脫石作為載體與爪哇蟲(chóng)草菌的相容性均較好。

為了篩選最佳載體，進(jìn)一步測(cè)定滑石粉、硅藻土和蒙脫石的潤(rùn)濕性能，結(jié)果表明，硅藻土的潤(rùn)濕時(shí)間為2.75"min，顯著低于蒙脫石和滑石粉；滑石粉次之，為37.50"min；蒙脫石的潤(rùn)濕時(shí)間最長(zhǎng)，為245.00"min。因此，綜合載體相容性以及潤(rùn)濕性能測(cè)定結(jié)果，篩選硅藻土為粉劑的最佳載體。

2.3.2""潤(rùn)濕劑的篩選""爪哇蟲(chóng)草菌在含不同潤(rùn)濕劑的孢子萌發(fā)液中進(jìn)行培養(yǎng)，結(jié)果表明，0.100%和0.125%潤(rùn)濕劑Morwet"EFW均與爪哇蟲(chóng)草菌的相容性較好，在含0.100%和0.125%潤(rùn)濕劑Morwet"EFW的孢子萌發(fā)液中培養(yǎng)后，爪哇蟲(chóng)草菌的孢子萌發(fā)率分別為82.50%和54.50%，顯著大于其他潤(rùn)濕劑。而爪哇蟲(chóng)草菌在含0.500%潤(rùn)濕劑的孢子萌發(fā)液中培養(yǎng)，其孢子均不萌發(fā)（圖9）。由此可見(jiàn)，潤(rùn)濕劑Morwet"EFW與爪哇蟲(chóng)草菌的相容性較好。

進(jìn)一步測(cè)定5種潤(rùn)濕劑的潤(rùn)濕性能，結(jié)果表明，潤(rùn)濕劑Morwet"EFW的潤(rùn)濕時(shí)間為7.29"s，顯著低于其他潤(rùn)濕劑；十二烷基硫酸鈉（SDS）和十二烷基苯硫酸鈉（SDBS）次之，分別為9.98"s和9.51"s；拉開(kāi)粉BX和Dispwet"WP400的潤(rùn)濕性能較差，其潤(rùn)濕時(shí)間分別為13.93、12.35"s。因此，綜合潤(rùn)濕劑的潤(rùn)濕性能與相容性結(jié)果，篩選Morwet"EFW為粉劑的最佳潤(rùn)濕劑。

2.3.3""分散劑的篩選""爪哇蟲(chóng)草菌在含不同分散劑的孢子萌發(fā)液中進(jìn)行培養(yǎng)，結(jié)果表明，1.0、2.5、5.0"mg/mL分散劑Morwet"D-425與爪哇蟲(chóng)草菌的相容性較好，孢子萌發(fā)率分別為93.00%、95.50%和96.50%，分散劑Morwet"D-450次之，5.0"mg/mL時(shí)，Morwet"D-450中爪哇蟲(chóng)草菌的孢子萌發(fā)率顯著低于Morwet"D-425；而木質(zhì)素Borresperse中的孢子萌發(fā)率最低，相容性最差（圖10）。由此可見(jiàn)，分散劑Morwet"D-425、Morwet"D-450與爪哇蟲(chóng)草菌的相容性均較好。

進(jìn)一步測(cè)定3種分散劑的懸浮率，結(jié)果表明，分散劑Morwet"D-450的懸浮率為85.55%，顯著高于其他分散劑；Morwet"D-425的懸浮率次之，為52.73%；而木質(zhì)素Borresperse的懸浮率最差，為25.78%。因此，綜合分散劑懸浮性能與相容性結(jié)果，篩選Morwet"D-450為粉劑的最佳分散劑。

2.3.4""紫外保護(hù)劑的篩選""爪哇蟲(chóng)草菌在含不同紫外保護(hù)劑的孢子萌發(fā)液中進(jìn)行培養(yǎng)，結(jié)果表明，100、500、1000"μg/mL熒光素鈉CBS-X和BASF326均與爪哇蟲(chóng)草菌的相容性較好，孢子萌發(fā)率分別為92.50%和85.50%、82.50%和86.50%、74.00%和79.00%，顯著高于腐殖酸（圖11）。由此可見(jiàn)，熒光素鈉CBS-X和BASF326與爪哇蟲(chóng)草菌的相容性較好。

進(jìn)一步測(cè)定3種紫外保護(hù)劑的紫外保護(hù)性能，結(jié)果表明，在紫外燈下處理15"min時(shí)，含熒光素鈉CBS-X、腐殖酸、BASF"326的爪哇蟲(chóng)草菌孢子萌發(fā)率分別為90.50%、89.00%和82.50%，均與CK無(wú)顯著性差異。紫外燈下處理30、60"min時(shí)，含熒光素鈉CBS-X的爪哇蟲(chóng)草菌孢子萌發(fā)率最大，紫外保護(hù)性能最好，爪哇蟲(chóng)草菌孢子萌發(fā)率分別為81.00%和64.00%；BASF"326次之，分別為61.00%和47.50%；而腐殖酸的紫外保護(hù)性能最差，爪哇蟲(chóng)草菌孢子萌發(fā)率分別為45.00%和27.50%（圖12）。因此，綜合紫外保護(hù)劑與爪哇蟲(chóng)草菌的相容性結(jié)果以及抗紫外性能，篩選熒光素鈉CBS-X為粉劑的最佳紫外保護(hù)劑。

2.4""爪哇蟲(chóng)草菌可濕性粉劑的初步制備

綜合以上粉劑助劑的篩選結(jié)果，得出爪哇蟲(chóng)草菌可濕性粉劑的配方：有效成分為爪哇蟲(chóng)草菌分生孢子粉，含量為20%；潤(rùn)濕劑為Morwet"EFW，含量為1%；分散劑為Morwet"D-450，含量為5%；紫外保護(hù)劑為熒光素鈉CBS-X，含量為1%；載體為硅藻土，含量為73%。

2.5""爪哇蟲(chóng)草菌可濕性粉劑對(duì)捷氏吹綿蚧的防治效果

爪哇蟲(chóng)草菌可濕性粉劑對(duì)捷氏吹綿蚧的田間防效如表1所示。結(jié)果表明，爪哇蟲(chóng)草菌可濕性粉劑在田間對(duì)捷氏吹綿蚧具有良好的防效。在處理后7"d時(shí)，爪哇蟲(chóng)草菌可濕性粉劑的防效較低（7.50%），顯著低于化學(xué)藥劑25%噻蟲(chóng)嗪可濕性粉劑的防效（62.50%）。隨著處理時(shí)間的延長(zhǎng)，各處理的防效均呈上升趨勢(shì)。在處理后14"d時(shí)，爪哇蟲(chóng)草菌可濕性粉劑對(duì)捷氏吹綿蚧的防效為72.50%，顯著低于25%噻蟲(chóng)嗪可濕性粉劑的防效

（87.50%）；處理后21"d，爪哇蟲(chóng)草菌可濕性粉劑的防效達(dá)92.50%，與25%噻蟲(chóng)嗪可濕性粉劑的防效相當(dāng)，顯著高于爪哇蟲(chóng)草菌純孢粉的防效，而IJID003純孢粉與對(duì)照差異不顯著。由此可見(jiàn)，爪哇蟲(chóng)草菌的劑型有助于分生孢子藥效的充分發(fā)揮，提高了菌株對(duì)捷氏吹綿蚧的防效。就侵染速率及速效性而言，爪哇蟲(chóng)草菌可濕性粉劑低于25%噻蟲(chóng)嗪可濕性粉劑，但其持效性更強(qiáng)，且在后期感染爪哇蟲(chóng)草菌的低齡捷氏吹綿蚧蟲(chóng)體上，會(huì)再產(chǎn)生新的分生孢子，形成新的侵染循環(huán)（圖13）。從以上結(jié)果可知，爪哇蟲(chóng)草菌可濕性粉劑對(duì)捷氏吹綿蚧有較好防效，具有替代介殼蟲(chóng)常用化學(xué)藥劑25%噻蟲(chóng)嗪可濕性粉劑的潛力。

3""討論

近年來(lái)，因爪哇蟲(chóng)草菌具有易培養(yǎng)且產(chǎn)孢量大的優(yōu)勢(shì)，有關(guān)其菌劑的研究備受?chē)?guó)內(nèi)科研人員的關(guān)注，但市場(chǎng)化、產(chǎn)業(yè)化應(yīng)用仍較少[15]。而影響微生物菌劑產(chǎn)業(yè)化的主要因素是符合菌種特性的發(fā)酵水平、適合的劑型配方和更低的用料成本等[15，"22]。本研究主要通過(guò)優(yōu)化符合優(yōu)良菌株爪哇蟲(chóng)草菌特性的固體發(fā)酵條件，并對(duì)其適合劑型配方進(jìn)行探索，進(jìn)而分析研制粉劑對(duì)害蟲(chóng)捷氏吹綿蚧的田間防效。

在固體發(fā)酵條件優(yōu)化方面，基礎(chǔ)基質(zhì)大麥因營(yíng)養(yǎng)豐富、易獲得、價(jià)格便宜等特點(diǎn)，通常認(rèn)為是大規(guī)模生產(chǎn)真菌殺蟲(chóng)劑固體發(fā)酵的首選基質(zhì)[23]。KIM等[17]研究發(fā)現(xiàn)，爪哇蟲(chóng)草菌在大麥中發(fā)酵培養(yǎng)的產(chǎn)孢量高于糙米，這與本研究結(jié)果一致。本研究進(jìn)一步將基礎(chǔ)基質(zhì)大麥與輔助麥麩共培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)產(chǎn)孢量比單獨(dú)大麥培養(yǎng)的顯著提升。已有研究表明，在固體發(fā)酵過(guò)程中基質(zhì)的表面-體積比（surface-to-volume"ratio，"SVR）及其幾何形狀、均勻性對(duì)發(fā)酵效果有重要影響[24]。通過(guò)基礎(chǔ)基質(zhì)與輔助基質(zhì)的共培養(yǎng)，可以有效改善發(fā)酵水平，實(shí)現(xiàn)營(yíng)養(yǎng)互補(bǔ)，提升結(jié)構(gòu)與通氣性，減少純基質(zhì)培養(yǎng)產(chǎn)孢量低的弊端[23]。ORDAZ-HERNáNDEZ等[18]將低成本的輔助基質(zhì)棕櫚仁粕與大米共培養(yǎng)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)在大米中添加5%棕櫚仁粕，爪哇蟲(chóng)草菌的產(chǎn)孢量提高了40%?？梢?jiàn)，共培養(yǎng)可以實(shí)現(xiàn)提升產(chǎn)孢量，這與本研究結(jié)果相似。另外，除了發(fā)酵基質(zhì)，外源添加物如營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、酶、調(diào)節(jié)劑、吸附劑等也可以顯著影響微生物生長(zhǎng)、代謝產(chǎn)物的生成以及發(fā)酵效率。微生物在利用碳源時(shí)，會(huì)分泌糖類(lèi)水解酶來(lái)分解碳源，且同一菌種可以利用多種碳源，但對(duì)不同碳源的代謝吸收有一定差異[25]。已有研究發(fā)現(xiàn)，利于爪哇蟲(chóng)草菌產(chǎn)孢的最優(yōu)碳源是葡萄糖[15，"17，"22]，這與本研究結(jié)果一致。在蟲(chóng)草菌屬優(yōu)質(zhì)氮源的篩選上，添加酪蛋白、酵母提取物和酸水解酪蛋白等氮源可以顯著提高爪哇蟲(chóng)草菌的產(chǎn)孢量[17，"26-27]。本研究也得出類(lèi)似結(jié)果，即研究發(fā)現(xiàn)爪哇蟲(chóng)草菌的最優(yōu)氮源是酸水解酪蛋白，其提供的氨基酸和多肽可以顯著提升爪哇蟲(chóng)草菌的產(chǎn)孢量。HOANG等[28]研究發(fā)現(xiàn)，氯化鉀的高滲透脅迫會(huì)抑制蛹蟲(chóng)草（Cordyceps"militaris）菌株子實(shí)體形成及產(chǎn)孢，本研究發(fā)現(xiàn)單獨(dú)添加氯化鉀和甘氨酸導(dǎo)致爪哇蟲(chóng)草菌的產(chǎn)孢量下降，這與前人的研究結(jié)果[28]一致。另外，BORWORN等[29]發(fā)現(xiàn)甘氨酸會(huì)促進(jìn)蛹蟲(chóng)草蟲(chóng)草素的產(chǎn)生，而蟲(chóng)草素可能具有自我抑制的作用，會(huì)影響分生孢子的產(chǎn)量。然而，本研究在大麥與麥麩組合發(fā)酵基質(zhì)基礎(chǔ)上，添加碳源葡萄糖、氮源酸水解酪蛋白、無(wú)機(jī)鹽氯化鉀和氨基酸甘氨酸等營(yíng)養(yǎng)元素共培養(yǎng)后，發(fā)現(xiàn)爪哇蟲(chóng)草菌產(chǎn)孢量比對(duì)照明顯提升。可見(jiàn)，多營(yíng)養(yǎng)元素的添加對(duì)昆蟲(chóng)病原真菌發(fā)酵水平的提升具有重要的協(xié)同和增效作用[30]。

生防真菌因其特殊的生長(zhǎng)條件以及不穩(wěn)定性，開(kāi)發(fā)難度遠(yuǎn)大于化學(xué)藥劑。因此，合適的載體及助劑是決定菌株的室外定殖能力和穩(wěn)定性的主要影響因素[31]。而可濕性粉劑作為目前我國(guó)真菌制劑的主要?jiǎng)┬?，因其具有成本低、濕?rùn)性高、易于運(yùn)輸貯存等優(yōu)點(diǎn)，在生物防治方面發(fā)揮著越來(lái)越重要的作用[32]。本研究通過(guò)測(cè)定配方成分與爪哇蟲(chóng)草菌的相容性及其發(fā)揮性能，篩選出最優(yōu)配方成分，制得菌劑易溶于水，形成懸浮液，便于噴霧使用。其中，在載體的選擇上，發(fā)現(xiàn)硅藻土與爪哇蟲(chóng)草菌的相容性最好，且具有較好的潤(rùn)濕性。硅藻土與較多昆蟲(chóng)病原真菌，如球孢白僵菌[33]、淡紫擬青霉[34]等均有較好的相容性。而陳名等[19]發(fā)現(xiàn)爪哇蟲(chóng)草菌可濕性粉劑的最佳載體是海泡石，這可能與篩選的載體、助劑范圍及菌種特性的差異等有關(guān)，今后可以通過(guò)擴(kuò)大助劑篩選范圍及規(guī)?；糯笤囼?yàn)，進(jìn)一步優(yōu)化可濕性粉劑質(zhì)量。在紫外保護(hù)劑的選擇上，本研究發(fā)現(xiàn)熒光素鈉的抗紫外輻射能力最強(qiáng)，與陳名等[19]的研究結(jié)果一致。杜丹超等[15]研究腐殖酸作為淡紫擬青霉的可濕性粉劑紫外保護(hù)劑時(shí)，發(fā)現(xiàn)腐殖酸的保護(hù)效能顯著高于熒光素鈉，能有效降低紫外線(xiàn)對(duì)菌株的影響。KAISER等[35]研究發(fā)現(xiàn)腐殖酸能有效提高球孢白僵菌分生孢子的抗紫外輻射能力。但本研究發(fā)現(xiàn)腐殖酸的保護(hù)性能較差，與上述二者的研究結(jié)果不一致，這可能與不同菌種的特異性有關(guān)。

在室外防效方面，李艷瓊等[36]用8000倍25%噻蟲(chóng)嗪可濕性粉劑防治為害柿樹(shù)（Diospyros"kaki）的日本蠟蚧（Ceroplastes"japonicus）雌蟲(chóng)，施藥20"d后的防效為83.30%，與本研究用4000倍25%噻蟲(chóng)嗪可濕性粉劑對(duì)捷氏吹綿蚧雌成蟲(chóng)的防效相近；而與爪哇蟲(chóng)草菌可濕性粉劑相比，對(duì)捷氏吹綿蚧雌成蟲(chóng)的防效無(wú)顯著差異。另外，在后期爪哇蟲(chóng)草菌逐漸感染低齡捷氏吹綿蚧蟲(chóng)體上，實(shí)現(xiàn)了昆蟲(chóng)病原真菌的可持續(xù)性，這一結(jié)果表明爪哇蟲(chóng)草菌可濕性粉劑在一定程度上可以作為安全的生物農(nóng)藥替代部分化學(xué)農(nóng)藥，減少化學(xué)農(nóng)藥的使用量，在綠色防控中具有很大的優(yōu)勢(shì)和潛力。

本研究以分離自介殼蟲(chóng)的爪哇蟲(chóng)草菌菌株IJID003為材料，首先優(yōu)化篩選出爪哇蟲(chóng)草菌IJID003較優(yōu)的固體發(fā)酵方法，即以大麥與麥麩為發(fā)酵基質(zhì)，添加以碳源葡萄糖、氮源酸水解酪蛋白、無(wú)機(jī)鹽氯化鉀、氨基酸甘氨酸和幾丁質(zhì)源蜂蛹?xì)し鄣葼I(yíng)養(yǎng)元素共培養(yǎng)；以?xún)?yōu)化的發(fā)酵條件初步研制了爪哇蟲(chóng)草菌的可濕性粉劑，其最佳組成為20%爪哇蟲(chóng)草菌孢子粉、1%潤(rùn)濕劑Morwet"EFW、5%分散劑Morwet"D-450、1%紫外保護(hù)劑CBS-X和73%硅藻土。田間試驗(yàn)結(jié)果表明，爪哇蟲(chóng)草菌可濕性粉劑對(duì)捷氏吹綿蚧具有較好防效，施藥后第21天的防效達(dá)92.50%。研究結(jié)果為介殼蟲(chóng)的綠色防控提供新的生防菌劑資源。

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