疫霉侵染下煙草對(duì)哈茨木霉接種順序的生理響應(yīng)

摘要：為探究疫霉侵染下煙草對(duì)哈茨木霉施用順序的生理響應(yīng)，采用盆栽試驗(yàn)方法，以接種清水為對(duì)照（CK），設(shè)置5個(gè)哈茨木霉處理，分別為接種疫霉孢子懸浮液（T1）；接種哈茨木霉孢子懸浮液（T2）；先接種疫霉孢子懸浮液，后接種哈茨木霉孢子懸浮液（T3）；先接種哈茨木霉孢子懸浮液，后接種疫霉孢子懸浮液（T4）；同時(shí)接種疫霉孢子懸浮液和哈茨木霉孢子懸浮液（T5），探究哈茨木霉接種順序?qū)σ呙骨秩鞠聼煵萆飳W(xué)性狀、生理特性和誘導(dǎo)抗性的影響。結(jié)果表明，在煙株生長上，T4處理煙株的農(nóng)藝性狀較CK增幅最大，且地下部干、鮮重較CK分別增加103.73%、8.30%；在煙株生理特性上，哈茨木霉可緩解疫霉對(duì)煙株光合色素積累和根系活力的抑制作用，同時(shí)對(duì)二者有顯著增益效果，還可增強(qiáng)煙株內(nèi)碳氮代謝相關(guān)酶的活性。移栽后21 d，T4處理的硝酸還原酶和谷氨酰胺合成酶活性較CK分別提高13.14%和6.40%；在防治效果上，T4處理煙株黑脛病的發(fā)病率和病情指數(shù)最低，分別為39.39%和13.89%，且抗氧化酶活性最高。綜上，煙株對(duì)哈茨木霉接種順序的生理響應(yīng)存在顯著差異。在生產(chǎn)中，可提前接種哈茨木霉菌劑來促進(jìn)煙草生長發(fā)育，抑制黑脛病的發(fā)病率。以上研究結(jié)果為調(diào)控?zé)煵萆L發(fā)育及黑脛病的綜合防治奠定了理論基礎(chǔ)。

關(guān)鍵詞：哈茨木霉；疫霉；生物學(xué)性狀；生理特性；誘導(dǎo)抗性

doi：10.13304/j.nykjdb.2023.0544

中圖分類號(hào)：S572

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號(hào)：1008?0864（2025）01?0155?10

寄生疫霉（Phytophthora parasitica）是引起黑脛病的病原菌，其寄主有煙草、番茄和茄子等多種植物[1-3]。煙草黑脛病是世界范圍內(nèi)最普遍和破壞性最大的煙草土傳病害之一[4-6]，可發(fā)生在煙草生長發(fā)育的各個(gè)時(shí)期，導(dǎo)致煙草根部和莖基部腐爛、葉片變黃、枯萎和壞死等癥狀[7?8]。在高溫、高濕環(huán)境下，病害會(huì)迅速蔓延，給煙草產(chǎn)量造成重大損失[9-11]。目前通常使用化學(xué)農(nóng)藥來防治煙草黑脛病，但長時(shí)間使用化學(xué)農(nóng)藥會(huì)使病原菌的抗藥性增加，并造成環(huán)境污染，不利于煙草行業(yè)的可持續(xù)發(fā)展[12?13]。

木霉菌（Trichoderma）是廣泛存在于植物根部及土壤的一種真菌，極高的繁殖能力和對(duì)環(huán)境的高適應(yīng)性使木霉具有強(qiáng)大的生存能力[14?15]。木霉菌的次生代謝產(chǎn)物包含植物激素和激素類似物，可有效調(diào)節(jié)植物的生長發(fā)育，并改善其生理代謝[16]。付香等[17] 研究發(fā)現(xiàn)，棘孢木霉（Trichodermaasperellum）處理藍(lán)莓幼苗可顯著增加其根體積和生物量；Anhar等[18]研究發(fā)現(xiàn)，不同種木霉均可促進(jìn)水稻幼苗的生長；廉華等[19]對(duì)黃瓜幼苗施用棘孢木霉，可提高黃瓜幼苗的葉綠素含量、根系活力、硝酸還原酶活性等生理特性。此外，木霉能夠誘導(dǎo)植株對(duì)生物和非生物脅迫的局部或系統(tǒng)抗性，還能通過競爭作用、重寄生作用、抗生作用以及誘導(dǎo)植物抗性等機(jī)制來達(dá)到防治植物病害的效果[14，20-22]。Umadevi 等[23] 發(fā)現(xiàn)，哈茨木霉（Trichoderma harzianum）與黑胡椒互作可誘導(dǎo)黑胡椒對(duì)辣椒疫霉的系統(tǒng)抗性；王典等[13]發(fā)現(xiàn)，用哈茨木霉對(duì)煙草進(jìn)行灌根處理，可顯著降低煙株的黑脛病發(fā)病率。目前，雖然木霉已被應(yīng)用于多種作物的病害防控研究，但關(guān)于木霉菌施用順序?qū)煵萆L發(fā)育、生理特性以及抗性誘導(dǎo)的影響缺乏系統(tǒng)研究。為此，本研究欲探究哈茨木霉和疫霉的接種順序?qū)煵萆飳W(xué)性狀、生理特性和抗性誘導(dǎo)的影響，以期為利用哈茨木霉調(diào)控?zé)煵萆L發(fā)育和黑脛病的綜合防治提供理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 供試材料

供試烤煙品種為‘K326’，由河南農(nóng)業(yè)大學(xué)煙草育種實(shí)驗(yàn)室提供。

供試培養(yǎng)基為馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（potato dextrose agar，PDA）：馬鈴薯200 g，葡萄糖20 g，瓊脂20 g，加水至1 L；燕麥瓊脂（oat agar，OA）培養(yǎng)基：60 g燕麥仁，20 g蔗糖，8 g瓊脂，加水至1 L。

供試菌株：哈茨木霉CGMCC23294由中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)微生物菌種保藏中心提供，煙草疫霉[Phytophthora parasitica var. nicotianae （Breda dehean） Tuker]由河南農(nóng)業(yè)大學(xué)煙草學(xué)院提供。

菌液制備：將哈茨木霉接入PDA平板，在黑暗條件（27±1） ℃倒置培養(yǎng)7 d后，用無菌水將孢子沖洗下來，制成1×107 CFU·mL-1的哈茨木霉孢子懸浮液備用。將煙草疫霉接入OA培養(yǎng)基，在黑暗條件（27±1）℃培養(yǎng)7 d后，用無菌水將孢子沖洗下來，并制成1×107 CFU·mL-1的疫霉孢子懸浮液備用。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

采用盆栽試驗(yàn)，于2023年2—5月在河南農(nóng)業(yè)大學(xué)許昌校區(qū)現(xiàn)代煙草科教園區(qū)（34°18′N、113°48′E）人工氣候室內(nèi)進(jìn)行。盆栽土壤采用大田耕層土壤，土樣風(fēng)干后過1 cm 孔徑篩備用。盆規(guī)格為外徑33 cm、高31.5 cm、底徑22.5 cm，每盆裝土1.5 kg，每盆施氮（N）1 g，氮（N）、磷（P2O5）、鉀 （K2O）肥比例為1.0∶1.5∶3.0。每3 kg土施用硝酸銨2.857 g，硫酸鉀5.56 g，重過磷酸鈣3.26 g。

以接種清水為對(duì)照（CK），分別設(shè)置以下處理：先接種疫霉孢子懸浮液20 mL和清水20 mL，3 d后施用清水40 mL（T1）；先接種哈茨木霉孢子懸浮液20 mL 和清水20 mL，3 d 后施用清水40 mL（T2）；先接種疫霉孢子懸浮液20 mL和清水20 mL，3 d后接種哈茨木霉孢子懸浮液20 mL和清水20 mL（T3）；先接種哈茨木霉孢子懸浮液20 mL和清水20 mL，3 d后接種疫霉孢子懸浮液20 mL和清水20 mL（T4）；同時(shí)接種疫霉孢子懸浮液和哈茨木霉孢子懸浮液各20 mL，3 d后施用清水40 mL（T5）。

選取均勻飽滿的煙草種子，將種子表面消毒（質(zhì)量分?jǐn)?shù)75% 乙醇，1 min；30% 雙氧水，5 min）后，播種于裝有滅菌基質(zhì)的漂浮育苗盤中培育；待煙苗5 片真葉時(shí)，選取長勢(shì)一致的煙株進(jìn)行裝盆移栽。用注射器針頭在煙株莖基部劃傷2個(gè)傷口，利用哈茨木霉孢子懸浮液和疫霉孢子液進(jìn)行灌根處理；對(duì)照組使用等量清水灌根。各處理的栽培措施及后期管理措施均保持一致。

1.3 樣品采集和測(cè)定方法

1.3.1 生物學(xué)性狀

移栽后第28 天按照YC/T142—2010《煙草農(nóng)藝性狀調(diào)查測(cè)量方法》[24]測(cè)量各處理煙株的株高、莖圍、節(jié)距和最大葉面積；取完整煙株鮮樣，沖洗干凈后，用吸水紙擦干表面，分別稱量地上部和地下部鮮重，計(jì)算根冠比；之后將樣本放于烘箱中105 ℃殺青15 min后，70 ℃烘干至恒重，稱干重。

根冠比=地下部鮮重/地上部鮮重（1）

1.3.2 生理特性指標(biāo)

移栽后7、14、21、28 d對(duì)煙株進(jìn)行取樣，采用丙酮-乙醇提取法[25]測(cè)定光合色素含量；采用TTC法[26]測(cè)定根系活力；采用蘇州科銘生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的試劑盒（微量法）[27]測(cè)定根系硝酸還原酶（nitrate reductase，NR）和谷氨酰胺合成酶（glutamine synthetase，GS）活性。

1.3.3 發(fā)病率及誘導(dǎo)抗性指標(biāo)

煙苗移栽后28 d，取各處理煙株的根部樣本，采用蘇州科銘生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的試劑盒（微量法）測(cè)定丙二醛（malondialdehyde，MDA）含量及超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD） 、過氧化物酶（peroxidase，POD）和過氧化氫酶（catalase，CAT）活性[28]。根據(jù)GB/T23222—2008《煙草病蟲害分級(jí)及調(diào)查方法》[29]，在移栽后28 d調(diào)查各處理煙株黑脛病的發(fā)病情況（表1），并計(jì)算發(fā)病率和病情指數(shù)。

發(fā)病率=病葉（株）數(shù)/調(diào)查總數(shù)×100% （2）

病情指數(shù)=Σ（病級(jí)數(shù)×該級(jí)病株數(shù)）/（最高病級(jí)數(shù)×調(diào)查總株樹）×100% （3）

防治效果=未發(fā)病株數(shù)/調(diào)查總株數(shù)×100%（4）

1.4 數(shù)據(jù)分析

采用Excel 2019整理試驗(yàn)數(shù)據(jù)，采用DPS 對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析和顯著性檢驗(yàn)，采用Origin2022軟件進(jìn)行繪圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 哈茨木霉對(duì)煙草生物學(xué)性狀的影響

2.1.1 對(duì)煙株生長發(fā)育的影響

由表2和圖1可知，T2和T4處理煙株的株高、莖圍、節(jié)距、葉面積較CK均顯著增加；而T1和T3處理煙株的株高、莖圍、節(jié)距、葉面積較CK均顯著降低，其中T1處理的降幅最大；T5處理煙株的株高、葉面積較CK顯著降低，而莖圍、節(jié)距與CK差異不顯著。相較于CK，T4處理的株高、莖圍、節(jié)距和葉面積分別顯著增加7.02%、10.00%、7.26% 和16.84%；T3 處理分別顯著降低24.61%、12.50%、10.41% 和13.49%；T5處理分別降低5.03%、5.00%、5.57%和2.37%。且T4處理煙株的生長發(fā)育較T3存在明顯差異，說明哈茨木霉顯著抑制了疫霉的毒害作用，且哈茨木霉和疫霉的接種順序不同，促生效果也顯著不同，表現(xiàn)為T4gt;T5gt;T3。

2.1.2 對(duì)煙株生物積累量的影響

由表3可知，各處理的地上部干、鮮重和地下部干、鮮重與CK均呈顯著性差異。對(duì)于地上部干、鮮重，T2和T4處理較CK 分別顯著增加36.79%、9.92% 和38.55%、8.55%；T1和T3處理較CK分別顯著降低31.57%、19.63%和31.98%、21.66%；T5處理較CK分別顯著降低9.63%、9.70%；故各處理的地上部干、鮮重表現(xiàn)為T2gt;T4gt;CKgt;T5gt;T3gt;T1。對(duì)于地下部干、鮮重，T2 和T4 處理較CK 顯著增加100.75%、18.05% 和103.73%、8.30%；T1 和T3 處理較CK 顯著降低22.56%、4.51% 和4.56%、1.38%。對(duì)于根冠比，T1、T3和T5處理顯著小于CK，T2和T4處理與CK雖差異不顯著，但均有不同程度的增加。由此說明，哈茨木霉可大幅促進(jìn)煙株生物量的積累，且對(duì)地下部的促進(jìn)作用大于地上部。

2.2 哈茨木霉對(duì)煙草生理特性的影響

2.2.1 對(duì)煙株光合色素含量的影響

由圖2 可知，各處理對(duì)煙株葉片內(nèi)的光合色素含量影響顯著。其中，T2和T4處理的葉綠素a、葉綠素b、類胡蘿卜素含量較CK 分別顯著增加10.31%、10.20%、6.48% 和5.15%、4.55%、3.70%；T1、T3 和T5 處理較CK 分別顯著降低20.62%、13.64%、31.48% 和17.53%、11.36%、27.78% 和15.46%、4.55%、19.44%；不同處理表現(xiàn)為T2gt;T4gt;CKgt;T5gt;T3gt;T1。由此說明，哈茨木霉可緩解疫霉對(duì)煙株光合色素積累的抑制作用，且接種順序不同效果存在顯著差異，其中T4 處理最有利于光合色素的積累。

2.2.2 對(duì)煙株根系活力的影響

由圖3可知，除T1和T3處理外，其他處理煙株的根系活力隨著移栽時(shí)間的增加呈先升高后降低趨勢(shì)，于移栽后21 d達(dá)到峰值，此時(shí)T2、T4和T5處理的根系活力較CK分別提高17.57%、14.02%和8.22%，而T1和T3 處理的根系活力較CK 分別降低33.02% 和18.41%。由此說明，哈茨木霉不僅可顯著提升煙株的根系活力，還可降低疫霉對(duì)煙株根系活力的削弱作用；且接種順序不同，對(duì)煙株根系活力的影響也存在差異，表現(xiàn)為T4gt;T5gt;T3。

2.2.3 對(duì)煙株硝酸還原酶的影響

由圖4可知，各處理煙株的硝酸還原酶活性隨著移栽時(shí)間的增加呈先上升后降低趨勢(shì)，于移栽后14 d達(dá)到峰值，此時(shí)T2和T4處理的硝酸還原酶活性較CK分別提高19.92% 和13.14%；T1、T3 和T5 處理的硝酸還原酶活性較CK降低27.95%、13.56%和5.34%；各處理表現(xiàn)為T2gt;T4gt;CKgt;T5gt;T3gt;T1。這說明哈茨木霉可顯著提升煙株的硝酸還原酶活性，還可降低疫霉對(duì)煙株硝酸還原酶活性的削弱作用，且接種順序不同，對(duì)煙株硝酸還原酶活性的影響也存在差異，表現(xiàn)為T4gt;T5gt;T3。

2.2.4 對(duì)煙株谷氨酰胺合成酶的影響

各處理煙株的谷氨酰胺合成酶活性隨著時(shí)間的增加呈先上升后降低的趨勢(shì)，在移栽后21 d達(dá)到峰值（圖5）。此時(shí)， T2和T4處理的氨酰胺合成酶活性較CK分別提高23.30%和6.40%； T1、T3和T5處理的谷氨酰胺合成酶活性較CK分別降低64.66%、48.69%和18.13%。不同處理的谷氨酰胺合成酶的活性表現(xiàn)為T2gt;T4gt;CKgt;T5gt;T3gt;T1。由此說明，哈茨木霉可提升煙株的谷氨酰胺合成酶活性，還可降低疫霉對(duì)煙株的谷氨酰胺合成酶活性的抑制作用，且接種順序不同，其效果也存在差異，表現(xiàn)為T4gt;T5gt;T3。

2.3 哈茨木霉對(duì)煙草誘導(dǎo)抗性的影響

2.3.1 對(duì)黑脛病防治效果的影響

由表4可知，接種哈茨木霉和疫霉的順序不同對(duì)煙株黑脛病的防治效果也顯著不同。接種哈茨木霉處理的發(fā)病率和病情指數(shù)較T1處理均顯著降低，其中T4處理煙株的發(fā)病率和病情指數(shù)最低，分別為39.39%和13.89%；T3處理的發(fā)病率和病情指數(shù)最高，分別為84.85%和46.33%；接種哈茨木霉和疫霉的3個(gè)處理的發(fā)病率和病情指數(shù)均表現(xiàn)為T4lt;T5lt;T3。由此說明，預(yù)先接種哈茨木霉可有效降低煙株黑脛病的發(fā)病率和病情指數(shù)。

2.3.2 對(duì)煙株MDA 含量和抗氧化酶活性的影響

由表5可知，不同處理煙株的MDA含量存在顯著差異。T3、T4、T5處理的MDA含量較CK分別顯著升高33.65%、8.04%和19.63%，其中T3處理的MDA含量最高。除T1處理外，各處理煙株的抗氧化酶活性相較于CK 均有不同程度的升高，T3、T4、T5處理煙株的SOD、POD、CAT活性較CK顯著提高，其中T4處理最高，較CK分別顯著提高60.64%、51.59%、34.52%；T3 最低，分別為32.09%、32.46%、24.90%。由此說明，接種哈茨木霉可顯著增強(qiáng)煙株的抗氧化酶活性，先接種哈茨木霉的處理效果更佳。

3 討論

農(nóng)藝性狀和生物量是反映植物生長發(fā)育狀況和抗脅迫能力的關(guān)鍵指標(biāo)，黑脛病的發(fā)生造成煙株生物量降低甚至枯萎死亡[30]。本研究表明，單獨(dú)接種疫霉導(dǎo)致煙株的株高、莖圍、節(jié)距、葉面積和生物量顯著降低；而單獨(dú)接種哈茨木霉組有利于增加煙株的株高、莖圍、節(jié)距、葉面積和生物量；接種兩者的順序不同對(duì)煙株的生長發(fā)育的影響也存在顯著差異。其中，先接種哈茨木霉可顯著降低疫霉侵染煙株的效果。這可能是哈茨木霉先于疫霉在煙株根部定殖，從而削弱了疫霉侵染煙株的能力[31]。哈茨木霉可改變煙株體內(nèi)生長素、細(xì)胞分裂素、赤霉素等植物激素途徑，以建立相互作用，從而改善植株的生長發(fā)育[32]。Sofo等[33]發(fā)現(xiàn)，櫻桃砧木接種哈茨木霉T-22菌株后，植株葉片和根系的生長素含量顯著上升。木霉的代謝產(chǎn)物中含有可促進(jìn)煙株生長的類植物生長素6-PP（6-npentyl-6H-pyran-2-one）和降解乙烯前體物質(zhì)的ACC 脫氨酶（1-aminocyclopropane-1-carboxylicaciddeaminase）[34]。同時(shí)，木霉與植物間的相互作用可促進(jìn)植物根系的生長，形成發(fā)達(dá)的根系網(wǎng)絡(luò)，增強(qiáng)對(duì)水和養(yǎng)分的獲取，從而顯著促進(jìn)煙株生長及生物量的積累[35]。

生理指標(biāo)是衡量煙株生長狀況的重要依據(jù)，本研究表明，哈茨木霉和疫霉的接種順序不同，二者對(duì)煙株的葉綠素含量、根系活力、硝酸還原酶和谷氨酰胺合成酶活性等生理指標(biāo)的影響也不同，其中，先接種哈茨木霉對(duì)煙株各生理指標(biāo)有良好的改善作用。由于接種順序不同，疫霉對(duì)煙株侵染的能力也有所不同，隨著疫霉不斷侵染煙株，導(dǎo)致煙株的葉綠體和根系遭到不同程度的破壞，從而引起葉綠素含量和根系活力的降低[36]。研究表明，接種哈茨木霉可增加葉綠素含量，調(diào)節(jié)硝酸還原酶等碳、氮代謝相關(guān)酶的活性，提高煙株對(duì)疫霉脅迫的抗性，這與本研究結(jié)果一致[34，37]。

植物在逆境脅迫下會(huì)產(chǎn)生過量的活性氧，從而引發(fā)膜脂過氧化，而MDA是膜脂過氧化作用形成的最終產(chǎn)物，是衡量植物細(xì)胞膜脂質(zhì)過氧化程度的重要指標(biāo)[38?39]。SOD通過歧化作用使逆境產(chǎn)生的O2-轉(zhuǎn)化為對(duì)植物細(xì)胞傷害更大的H2O2 和OH-自由基，而CAT和POD則具有清除H2O2的作用[41]。膜脂過氧化產(chǎn)物和抗氧化酶活性均與植物的抗病性密切相關(guān)。木霉與植物的互作過程中可誘導(dǎo)植物SOD、POD、CAT等抗氧化酶活性提高，抑制病原菌和誘導(dǎo)植物抗性[41?42]。廉華等[43]研究表明，3 種不同木霉對(duì)黃瓜枯萎病的防效均在66.81%以上，且黃瓜的POD、CAT、SOD等保護(hù)性酶活性均呈上升趨勢(shì)，說明木霉侵染植株后導(dǎo)致防御酶活性增強(qiáng)，加強(qiáng)了對(duì)病原菌侵染的抵御能力。本研究表明，相較于只接種疫霉處理，接種哈茨木霉可降低煙株黑脛病的發(fā)病率和病情指數(shù)，不同接種順序會(huì)使煙株的抗病能力存在差異，其中，先接種哈茨木霉煙株的POD、CAT、SOD活性最高，對(duì)煙株黑脛病的防治效果達(dá)到60.61%，說明先接種哈茨木霉煙株的響應(yīng)程度更高。

哈茨木霉的接種順序不同，煙株對(duì)疫霉脅迫下的生物學(xué)性狀、生理特性和抗性誘導(dǎo)等生理響應(yīng)存在差異，結(jié)合煙株在不同處理中的表現(xiàn)得出：隨著哈茨木霉接種順序的提前，煙株的生理響應(yīng)也呈現(xiàn)增強(qiáng)趨勢(shì)，其中最先接種哈茨木霉處理煙株的生理響應(yīng)最佳。

參考文獻(xiàn)

［1］ 申貴，王源超，鄭小波.不同寄主來源寄生疫霉菌株的遺傳變異分析[J].生物多樣性，2003，11（6）：486-490.

SHEN G， WANG Y C， ZHENG X B. Genetic variation amongPhytophthora parasitica strains isolated from different hostplants [J]. Biodiversity Sci.， 2003，11（6）：486-490.

［2］ REN X L， ZHANG N， CAO M H， et al .. Biological control oftobacco black shank and colonization of tobacco roots by aPaenibacillus polymyxa strain C5 [J]. Biol. Fert. Soils， 2012， 48（6）：613-620.

［3］ BAO Y G， DING N， QIN Q L， et al .. Genetic mapping of the Phgene conferring disease resistance to black shank in tobacco [J/OL].Mol. Breed.， 2019， 39： 1036x [2023-06-15]. https：//doi.org/10.1007/s11032-019-1036-x.

［4］ HAN T， YOU C， ZHANG L， et al .. Biocontrol potential ofantagonist Bacillus subtilis Tpb55 against tobacco black shank [J].Biol. Control， 2016， 61（2）：195-205.

［5］ 賈孟媛，王越洋，唐培培，等.煙草黑脛病生防菌的篩選鑒定及其防效[J]. 湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2023，49（3）：329-334.

JIA M Y， WANG Y Y， TANG P P，et al ... Screening andidentification of biocontrol bacteria for tobacco black shankdisease and evaluation of the control effect [J]. J. Hunan Agric.Univ.， 2023， 49（3）：329-334.

［6］ 向立剛，汪漢成，羅飛，等.感染青枯病與黑脛病煙株的根際土壤、根及莖稈微生物代謝特征分析[J].煙草科技，2023，56（3）：17-24.

XIANG L G， WANG H C， LUO F， et al .. Metaboliccharacteristics of microorganisms in rhizosphere soil， roots，andstalks of tobacco plants infected with bacterial wilt andblack shank [J]. Tob. Sci. Tech.， 2023， 56 （3）：17-24.

［7］ GAI X T， LU C H， XIA Z Y， et al .. Crop rotation suppressestobacco black shank disease incited by Phytophthoranicotianae and influenced the structure of rhizosphere bacterialcommunities [J]. J. Plant Pathol.， 2023， 16（2）：1-10.

［8］ 任錫躍，劉濤，朱發(fā)亮，等.β-氨基丁酸對(duì)煙草黑脛病的抗性誘導(dǎo)[J].煙草科技，2023，56（1）：47-51，65.

REN X Y， LIU T， ZHU F L， et al .. Resistance induction byβ-aminobutyric acid against tobacco black shank disease [J].Tob. Sci. Tech.， 2023， 56（1）：47-51，65.

［9］ SONG R F， TAN Y J， AHMED W， et al .. Unraveling theexpression of differentially expressed proteins and enzymaticactivity in response to Phytophthora nicotianae across differentflue-cured tobacco cultivars [J]. BMC Microbiol.， 2022， 22（1）：1-13.

［10］ TIAN S F， CHEN Y P， ZI S H， et al .. Thiamine inducesresistance in tobacco against black shank [J]. Aust. Plant Path.，2022， 51（2）：231-243.

［11］ 匡志豪，王典，云菲，等.哈茨木霉施用方式對(duì)煙草生長、黑脛病防治及誘導(dǎo)抗性的影響[J].山東農(nóng)業(yè)科學(xué)，2023， 55（2）：119-126.

KUANG Z H， WANG D， YUN F， et al .. Effects of Trichodermaharzianum application methods on tobacco growth， blackshank control and induced resistance [J]. Shandong Agric. Sci.，2023， 55（2）：119-126.

［12］ 王全貞，夏賢仁，鄧濤，等.3種生物制劑在宣威南部煙區(qū)的防病提質(zhì)效果研究[J].湖南農(nóng)業(yè)科學(xué)，2023，449（2）：57-62.

WANG Q Z， XIA X R， DENG T， et al .. Effect of threebiological agents on disease control and quality improvementin the southern Xuanwei area [J]. Hunan Agric. Sci.， 2023，449（2）：57-62.

［13］ 王典，匡志豪，孫曉偉，等.哈茨木霉對(duì)煙草生長/產(chǎn)質(zhì)量及黑脛病防效的影響[J].貴州農(nóng)業(yè)科學(xué)，2023，51（3）：27-35.

WANG D， KUANG Z H， SUN X W， et al .. Effect ofTrichoderma harzianum on growth， yield and quality of tobaccoand control effect of black shank disease [J]. Guizhou Agric.Sci.， 2023， 51（3）：27-35.

［14］ 李玥，羅麗芬，王烜東，等.三七根際耐皂苷木霉菌的分離鑒定及其拮抗促生活性評(píng)價(jià)[J]. 中國農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2023，28（8）：133-143.

LI Y， LUO L F， WANG X D， et al .. Isolation and identificationof ginsenosides-tolerant Trichoderma strains from rhizosphereof Panax notoginseng and evaluation of their effect onantagonistic and growth promotion activity [J]. J. China Agric.Univ.， 2023， 28（8）：133-143.

［15］ GHISALBERTI E L. Anti-infective agents produced by thehyphomycetes genera Trichoderma and Gliocladium [J]. Curr.Med. Chem. Ant. Infective Agents， 2002， 1（4）：343-374.

［16］ ILLESCAS M， PEDRERO-MéNDEZ A， PITORINIBOVOLINIM， et al .. Phytohormone production profiles inTrichoderma species and their relationship to wheat plantresponses to water stress [J/OL]. Pathogens， 2021， 10（8）：991[2023-06-15]. https：//doi.org/10.3390/pathogens10080991.

［17］ 付香，王賀新，王碟，等.棘孢木霉的分離鑒定及其對(duì)藍(lán)莓生長發(fā)育的影響[J].中國果樹，2023（6）：46-53.

FU X， WANG H X， WANG D， et al .. Isolation andidentification of Trichoderma spinosum and its effect on thegrowth and development of blueberries [J]. Chin. Fruit. Tree，2023（6）：46-53.

［18］ ANHAR A， PUTRI D H， ADVINDA L， et al .. Molecularcharacterization of Trichoderma strains from west sumatera，indonesia and their beneficial effects on rice seedling growth [J].J. Crop Sci. Biol.， 2021， 24：441-448.

［19］ 廉華，馬光恕，李梅，等.棘孢木霉菌劑對(duì)黃瓜生理特性及產(chǎn)質(zhì)量的影響[J].中國農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2021，26（6）：42-52.

LIAN H， MA G S， LI M， et al .. Effects of Trichoderma asperellumagents on physiological characteristics， yield and quality ofcucumber [J]. J. China Agric. Univ.， 2021，26（6）：42-52.

［20］ 沈海斌，王前程，陳捷，等.三株木霉對(duì)番茄枯萎病的防治效果和機(jī)理研究[J].植物生理學(xué)報(bào)，2023，59（5）：965-976.

SHEN H B， WANG Q C， CHEN J， et al .. Efficacy andmechanism of three Trichoderma strains for control of tomatoFusarium wilt [J]. Plant Physiol. J.， 2023， 59（5）：965-976.

［21］ CELAR F A， KOS K. Compatibility of the commercialbiological control agents Trichoderma asperellum （ICC 012）and Trichoderma gamsii （ICC 080） with selected herbicides [J].J. Plant Dis. Prot.， 2022， 129（1）：85-92.

［22］ GADERER R， LAMDAN N L， FRISCHMANN A， et al .. Sm2，a paralog of the Trichoderma cerato-platanin elicitor Sm1， isalso highly important for plant protection conferred by thefungal-root interaction of Trichoderma with maize [J/OL]. BMCMicrobiol.， 2015， 15（1）：2 [2023-06-15]. https：//doi.org/10.1186/s12866-014-0333-0.

［23］ UMADEVI P， ANANDARAJ M. Proteomic analysis of thetripartite interaction between black pepper， Trichodermaharzianum and Phytophthora capsici provides insights intoinduced systemic resistance mediated by Trichoderma spp [J].Eur. J. Plant Pathol.， 2019， 154： 607-620.

［24］ 申國明，陳愛國，王程棟，等. 煙草農(nóng)藝性狀調(diào)查測(cè)量方法：YC/T 142-2010[S].北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2010.

［25］ 許大全.葉綠素含量的測(cè)定及其應(yīng)用中的幾個(gè)問題[J].植物生理學(xué)通訊，2009，45（9）：896-898.

XU D Q. Several problems in measurement and application ofchlorophyll content [J]. Plant Physiol. Commun.， 2009， 45（9）：896-898.

［26］ 高俊鳳.植物生理學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)[M].西安：世界圖書出版公司，2000：1-287.

［27］ LI S H， YANG D Q， TIAN J， et al .. Physiological andtranscriptional response of carbohydrate and nitrogenmetabolism in tomato plant leaves to nickel ion and nitrogenlevels [J/OL]. Sci. Hortic.， 2022， 292： 110620 [2023-06-15].https：//doi.org/10.1016/j.scienta.2021.110620.

［28］ ARFAN M， ZHANG D W， ZOU L J， et al .. Hydrogen peroxideand nitric oxide crosstalk mediates brassinosteroids inducedcold stress tolerance in Medicago truncatula [J/OL]. Int. J. Mol.Sci.， 2019， 20（1）： 144 [2023-06-15]. https：//doi.org/10.3390/ijms20010144.

［29］ 任廣偉，孔凡玉，王鳳龍，等.煙草病蟲害分級(jí)及調(diào)查方法：GB/T 23222—2008[S].北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2008.

［30］ SHI R， HUBERT H， DEXTER-BOONE A， et al .. Identificationand validation of SNP markers associated with Wz-mediatedPhytophthora nicotianae resistance in Nicotiana tabacum L [J/OL].Mol. Breeding.， 2019， 39（7）： 2 [2023-06-15]. https：//doi.org/10.1007/s11032-019-1015-2.

［31］ 尤佳琪，吳明德，李國慶，等.木霉在植物病害生物防治中的應(yīng)用及作用機(jī)制[J].中國生物防治學(xué)報(bào)，2019，35（6）：966-976.

YOU J Q， WU M D， LI G Q， et al .. Application and mechanismof Trichoderma in biological control of plant disease [J]. Chin.J. Biol. Control， 2019， 35（6）：966-976.

［32］ MARTíNEZ-MEDINA A， DEL MAR ALGUACIL M，PASCUAL J A， et al .. Phytohormone profiles induced byTrichoderma isolates correspond with their biocontrol and plantgrowth-promoting activity on melon plants [J]. J. Chem. Ecol.，2014， 40：804-815.

［33］ SOFO A， TATARANNI G， XILOYANNIS C， et al .. Direct effectsof Trichoderma harzianum strain T-22 on micropropagatedshoots of GiSeLa6? （Prunus cerasus×Prunus canescens） rootstock[J]. Environ. Exp. Bot.， 2012， 76：33-38.

［34］ 殷全玉，匡志豪，王景，等.黑脛病不同抗性烤煙品種對(duì)哈茨木霉的生理響應(yīng)[J].河南農(nóng)業(yè)科學(xué)，2022，51（9）：88-98.

YIN Q Y， KUANG Z H， WANG J， et al . Physiologicalresponses of different black shank-resistance flue-curedtobacco varieties to Trichoderma harzianum [J]. Henan Agric.Sci.， 2022， 51（9）：88-98.

［35］ GUZMáN-GUZMáN P， PORRAS-TRONCOSO M D，OLMEDO-MONFIL V， et al .. Trichoderma species： versatileplant symbionts [J]. Phytopathology， 2019， 109（1）：6-16.

［36］ 董環(huán)宇，楊超群，郭笑維，等.不同抗性煙草品種（系）苗期接種PVY 后生理生化指標(biāo)變化[J]. 延邊大學(xué)農(nóng)學(xué)學(xué)報(bào)，2022，44（3）：29-37.

DONG H Y， YANG C Q， GUO X W， et al .. Changes ofphysiological and biochemical indexes of different resistanttobacco varieties （lines） after PVY inoculation at seedling stage[J]. J. Agron. Yanbian Univ.， 2022， 44（3）：29-37.

［37］ JIANG Y， SUN Y F， ZHENG D F， et al .. Physiological andtranscriptome analyses for assessing the effects of exogenousuniconazole on drought tolerance in hemp （Cannabis sativa L.）[J/OL]. Sci. Rep.， 2021， 11：14476 [2023-06-15]. https：//doi.org/10.1038/S41598-021-93820-6.

［38］ 王詩雅，鄭殿峰，項(xiàng)洪濤，等. 初花期淹水脅迫對(duì)大豆葉片AsA-GSH循環(huán)的損傷及烯效唑的緩解效應(yīng)[J].中國農(nóng)業(yè)科學(xué)，2021，54（2）：271-285.

WANG S Y， ZHENG D F， XIANG H T， et al .. Damage of AsAGSHcycle of soybean leaves under waterlogging stress atinitial flowing stage and the mitigation effect of uniconazole [J].Sci. Agric. Sin.， 2021， 54（2）：71-285.

［39］ ZARGAR S M， GUPTA N， NAZIR M， et al .. Impact of droughton photosynthesis： molecular perspective [J]. Plant Gene，2017， 11：154-159.

［40］ 丁凱鑫，王立春，田國奎，等.干旱脅迫下不同品種馬鈴薯塊莖膨大期葉片對(duì)烯效唑的生理響應(yīng)[J].中國生態(tài)農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2023，31（7）：1067-1080.

DING K X， WANG L C， TIAN G K， et al .. Physiologicalresponses of leaves of different potato varieties to uniconazoleduring tuber expansion stage under drought stress [J]. Chin. J.Eco-Agric.， 2023， 31（7）：1067-1080.

［41］ 馬光恕，張渟，李潤哲，等.擬康氏木霉菌劑對(duì)黃瓜幼苗生長、抗氧化系統(tǒng)及枯萎病防效的影響[J]. 干旱地區(qū)農(nóng)業(yè)研究，2022，40（6）：72-81，107.

MA G S， ZHANG Z， LI R Z， et al .. Effects of Trichodermapseudokoningiü agents on growth， antioxidant system andcontrol effect against Fusarium wilt of cucumber seedlings [J].Agric. Res. Arid Areas， 2022， 40（6）：72-81，107.

［42］ ELKELISH A A， ALHAITHLOUL H A S， QARI S H， et al ..Pretreatment with Trichoderma harzianum alleviateswaterlogging-induced growth alterations in tomato seedlings bymodulating physiological， biochemical， and molecularmechanisms [J/OL]. Environ. Exp. Bot.， 2020， 171： 103946[2023-06-15]. https：//doi.org/10.1016/j.envexpbot.2019.103946.

［43］ 廉華，馬光恕，靳亞忠，等.木霉分生孢子和厚垣孢子對(duì)黃瓜葉片抗氧化系統(tǒng)及枯萎病防效的影響[J].干旱地區(qū)農(nóng)業(yè)研究，2021，39（4）：71-79.

LIAN H， MA G S， JIN Y Z， et al .. Effects of Trichodermaconidia and chlamydospore on cucumber leaf antioxidantsystem and control efficacy of Fusarium wilt in cucumber [J].Agric. Res. Arid Areas， 2021， 39（4）：71-79.

基金項(xiàng)目：中國煙草總公司陜西省公司科技項(xiàng)目（2021611000270042）。