血清miR-193a-3p、ATF5水平與三陰性乳腺癌患者化療療效的相關(guān)性

摘要：目的 探究血清miR-193a-3p、激活轉(zhuǎn)錄因子5（ATF5）表達(dá)水平與三陰性乳腺癌（TNBC）患者臨床病理特征及化療療效的相關(guān)性。方法 選取TNBC患者（研究組）和乳腺良性疾病患者（對(duì)照組）各120例，檢測(cè)研究對(duì)象血清miR-193a-3p、ATF5水平，分析血清miR-193a-3p、ATF5與病理特征的關(guān)系。根據(jù)療效將TNBC患者分為治療無效組50例和治療有效組70例，比較2組miR-193a-3p、ATF5表達(dá)水平，分析影響TNBC患者化療療效的因素。結(jié)果 與化療前相比，化療后研究組血清miR-193a-3p水平升高，ATF5水平降低（P＜0.05）。與對(duì)照組相比，化療前研究組血清miR-193a-3p水平降低，ATF5水平升高（P＜0.05）。腫瘤直徑≥3 cm、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織學(xué)分級(jí)為中低級(jí)、臨床分期Ⅲ期、Ki-67＞30%者miR-193a-3p表達(dá)水平降低，ATF5表達(dá)水平升高（P＜0.05）。TNBC患者中，與治療有效組相比，治療無效組血清miR-193a-3p水平降低，ATF5水平升高（P＜0.05）。較低水平的miR-193a-3p、較高水平的ATF5、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤直徑≥3 cm、組織學(xué)分級(jí)為中低級(jí)、TNM分期Ⅲ期是影響TNBC患者化療療效的危險(xiǎn)因素（P＜0.05）。結(jié)論 TNBC患者血清中低水平miR-193a-3p、高水平ATF5均是化療療效的危險(xiǎn)因素。

關(guān)鍵詞：三陰性乳腺癌；放化療，輔助；預(yù)后；影響因素分析；基因，腫瘤；miR-193a-3p；激活轉(zhuǎn)錄因子5

中圖分類號(hào)：R737.9 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A DOI：10.11958/20240854

Correlation between serum miR-193a-3p， ATF5 levels and chemotherapy efficacy in

patients with triple negative breast cancer

LU Xinyi1， DU Weipo1， LI Jinggang1， GUO Fangfang1， ZHANG Xiaolei1， LIU Jing2

1 Department of Breast， 2 Department of Health Examination， Yellow River Sanmenxia Hospital， Sanmenxia 472000， China

Abstract： Objective To explore the correlation between serum levels of miR-193a-3p， activated transcription factor 5 （ATF5）， clinicopathological characteristics and chemotherapy efficacy in patients with triple negative breast cancer （TNBC）. Methods A total of 120 patients with TNBC admitted to our hospital were collected as the research group. In the same period， 120 cases with benign breast disease in our hospital were selected as the control group. Serum levels of miR-193a-3p and ATF5 were detected， and the relationship between them and clinicopathological characteristics were detected in two groups. According to the therapeutic effect， TNBC patients were divided into the treatment ineffective group （n=50） and the treatment effective group （n=70）. The expression levels of miR-193a-3p and ATF5 were compared between the two groups， and factors affecting the chemotherapy efficacy of TNBC patients were analyzed. Results Compared with before chemotherapy， the serum miR-193a-3p level increased and ATF5 level decreased in TNBC patients after chemotherapy （P＜0.05）. Compared with the control group， the serum miR-193a-3p level of TNBC patients decreased in the research group before chemotherapy， and ATF5 level increased （P＜0.05）. The expression level of miR-193a-3p was lower and the expression level of ATF5 was higher in patients with tumor diameter≥3 cm， lymph node metastasis， low histological grade， clinical stage Ⅲ and Ki-67＞30% （P＜0.05）. In TNBC patients， compared with the treatment effective group， patients in the treatment ineffective group showed a decreased serum miR-193a-3p level and an increased ATF5 level （P＜0.05）. Lower level of miR-193a-3p， higher level of ATF5， lymph node metastasis， tumor diameter ≥ 3 cm， low histological grade， and TNM stage Ⅲ were risk factors affecting the efficacy of chemotherapy in TNBC patients （P＜0.05）. Conclusion Low level of miR-193a-3p and high level of ATF5 in the serum of TNBC patients are risk factors for chemotherapy efficacy.

Key words： triple negative breast neoplasms; chemoradiotherapy， adjuvant; prognosis;root cause analysis; genes， neoplasm; miR-193a-3p; activating transcription factor 5

乳腺癌是女性常見的惡性腫瘤，也是女性因癌死亡的第二大病因［1］。三陰性乳腺癌（TNBC）具有侵襲性強(qiáng)、易轉(zhuǎn)移、易復(fù)發(fā)的特點(diǎn)，TNBC患者的預(yù)后通常較差［2］。目前，臨床常采用化療輔助治療TNBC，但存在耐藥性問題［3］。研究發(fā)現(xiàn)，miR-193a-3p在多種腫瘤中呈低表達(dá)，能促進(jìn)癌癥的發(fā)生發(fā)展［4-5］。另有研究顯示，激活轉(zhuǎn)錄因子5（ATF5）可調(diào)控腫瘤細(xì)胞的增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移等惡性生物學(xué)行為［6］。ATF5在多種腫瘤中呈高表達(dá)，且與腫瘤細(xì)胞的放療敏感性、增殖率等密切相關(guān)［7］。馬偉杰等［8］研究發(fā)現(xiàn)，miR-193a-3p可通過激活富含亮氨酸重復(fù)序列的G蛋白偶聯(lián)受體4/ATF4信號(hào)通路，從而促進(jìn)成骨細(xì)胞分化，但miR-193a-3p與ATF5間是否具有調(diào)控作用尚未可知。本研究旨在探究血清miR-193a-3p、ATF5水平與TNBC病理特征和化療療效的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2020年5月—2023年5月于黃河三門峽醫(yī)院就診的TNBC患者120例為研究組，年齡46～60歲，平均（53.20±5.90）歲，體質(zhì)量指數(shù)（BMI）為（23.15±2.66）kg/m2，絕經(jīng)47例，TNBC診斷參照文獻(xiàn)［9］。納入標(biāo)準(zhǔn)：?jiǎn)蝹?cè)乳腺癌；入組前未接受放、化療；腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀態(tài)、組織學(xué)分級(jí)等臨床病理資料完整者；腫瘤TNM分期Ⅱ—Ⅲ期。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并其他惡性腫瘤；有重要器官功能障礙；初診及治療過程中腫瘤處于晚期或進(jìn)展至晚期。收集同期于本院就診的乳腺良性疾病患者120例為對(duì)照組，年齡46～60歲，平均（53.40±6.02）歲，BMI（23.32±2.70）kg/m2，絕經(jīng)42例。2組間年齡（t=0.260）、BMI（t=0.462）及絕經(jīng)比例（χ2=0.446）差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。本研究經(jīng)本院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)（CZX2019-SY-36）。

1.2 主要試劑與儀器 RNA抽提試劑盒（德國Qiagen公司）、逆轉(zhuǎn)錄試劑盒、實(shí)時(shí)熒光定量PCR（RT-qPCR）試劑盒、血清ATF5酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）試劑盒購自Beyotime公司；全自動(dòng)酶標(biāo)儀（Multiskan FC）購自Thermo（美國）公司；RT-qPCR儀購自西安天隆科技有限公司。多西他賽（批號(hào)20180421，廣東星昊藥業(yè)有限公司，規(guī)格2 mL∶80 mg）、表柔比星（批號(hào)20190113，浙江海正藥業(yè)股份有限公司，規(guī)格5 mL∶10 mg）聯(lián)合環(huán)磷酰胺（批號(hào)20181105，瀚暉制藥有限公司，規(guī)格：0.1 g）。

1.3 研究方法

1.3.1 治療方案 研究組均接受≥4個(gè)療程新輔助化療（TEC）方案。通過MRI檢測(cè)該組患者初診時(shí)的腫瘤大小，以穿刺病理結(jié)果確定淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀態(tài)。采用TNBC根治性切除手術(shù)?；熕幬餅椋憾辔魉悾?5 mg/m2）、表柔比星（60 mg/m2）聯(lián)合環(huán)磷酰胺（500 mg/m2），21 d為1個(gè)療程?；颊呋熃Y(jié)束后，進(jìn)行療效分級(jí)的評(píng)價(jià)，包括完全緩解（CR）、部分緩解（PR）、病情穩(wěn)定（SD）和病情進(jìn)展（PD）［10］；并據(jù)此分為治療無效組（PD）和治療有效組（CR、PR和SD），比較2組間miR-193a-3p、ATF5表達(dá)水平的差異。

1.3.2 一般資料收集 收集2組患者的年齡、腫瘤最大直徑、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、月經(jīng)、TNM分期、組織學(xué)分級(jí)、Ki-67表達(dá)＞30%情況等。對(duì)照組患者于入院當(dāng)日采集空腹靜脈血5 mL；研究組TNBC患者分別于入院次日早晨、化療后次日早晨采集空腹靜脈血5 mL，離心管中靜置15 min，在4 ℃條件下以" " 3 000 r/min離心10 min，然后收集血清于-80 ℃保存。

1.3.3 RT-qPCR法檢測(cè)血清miR-193a-3p水平 取凍存的血清，使用TRIzol總RNA抽提試劑盒提取總RNA，紫外分光光度計(jì)測(cè)定RNA純度，使光密度（OD）260/OD280為1.8～2.0，逆轉(zhuǎn)錄試劑盒轉(zhuǎn)錄合成cDNA。miR-193a-3p引物：上游5'?CGAACTGGCCTACAAAGTC-3'，下游5'-GTGCAG GGTCCGAGGT-3'；U6引物：上游5'-CTCGCTTCGGCA GCACA-3'，下游5'-AACGCTTCACGAATTTGCGT-3'。反應(yīng)體系25 μL，包括SYBR Green I RT-qPCR Master Mix 12.5 μL，上、下游引物各0.5 μL，cDNA模板2.5 μL，ddH2O 9 μL。擴(kuò)增反應(yīng)：95 ℃預(yù)變性2 min；95 ℃變性15 s，60 ℃退火20 s，72 ℃延伸20 s，共40個(gè)循環(huán)。以U6為內(nèi)參，2-??Ct方法計(jì)算血清miR-193a-3p水平。

1.3.4 ELISA法檢測(cè)血清ATF5水平 取凍存的血清，按照人血清ATF5 ELISA測(cè)定試劑盒說明書進(jìn)行操作。繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線后檢測(cè)樣品OD值，計(jì)算樣品濃度，確定樣本血清中ATF5水平。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 25.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。符合正態(tài)分布的計(jì)量資料用[[x] ±s]表示，2組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，組內(nèi)比較采用配對(duì)樣本t檢驗(yàn)。計(jì)數(shù)資料以例或例（%）表示，組間比較用χ2檢驗(yàn)。多因素分析用Logistic回歸。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 2組化療前及研究組化療前后血清miR-193a-3p、ATF5水平的比較 與對(duì)照組比較，研究組化療前血清miR-193a-3p水平降低，ATF5水平升高（P＜0.01）；化療后研究組血清miR-193a-3p水平升高，ATF5水平降低（P＜0.01），見表1。

2.2 血清miR-193a-3p、ATF5與臨床病理特征的關(guān)系 在研究組中，腫瘤直徑≥3 cm、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織學(xué)分級(jí)中低、臨床分期為Ⅲ期、Ki-67＞30%者miR-193a-3p表達(dá)水平降低，ATF5表達(dá)水平升高（P＜0.01），見表2。

2.3 不同化療療效患者血清miR-193a-3p、ATF5表達(dá)水平比較 研究組經(jīng)化療后，CR12例、PR18例、SD40例、PD50例，與治療有效組相比，治療無效組患者血清miR-193a-3p水平降低，ATF5水平升高（P＜0.05），見表3。

2.4 TNBC患者化療療效的影響因素分析 以TNBC患者化療疾病是否進(jìn)展（否=0，是=1）為因變量，以miR-193a-3p、ATF5、腫瘤直徑（＜3 cm=0，≥3 cm=1）、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移（否=0，是=1）、組織學(xué)分級(jí)（高=0，中低=1）、TNM分期（Ⅱ期=0，Ⅲ期=1）為自變量進(jìn)行多因素Logistic回歸分析。結(jié)果顯示，較低水平的miR-193a-3p，較高水平的ATF5、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤直徑≥3 cm、組織學(xué)分級(jí)為中低級(jí)、TNM分期Ⅲ期是影響TNBC患者化療療效的危險(xiǎn)因素（P＜0.05），見表4。

3 討論

miRNA可以通過在轉(zhuǎn)錄后調(diào)節(jié)靶基因的表達(dá)來參與細(xì)胞多種生物學(xué)反應(yīng)，影響惡性腫瘤細(xì)胞的增殖和遷移［11-12］。張亞潔等［13］研究發(fā)現(xiàn)，在子宮內(nèi)膜癌中，miR-193a-3p的低表達(dá)可促進(jìn)癌癥進(jìn)展。本研究結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，研究組血清miR-193a-3p水平降低，且與化療前相比，化療后TNBC患者血清miR-193a-3p水平升高；與治療有效組相比，治療無效組患者血清miR-193a-3p水平降低，證實(shí)了miR-193a-3p低表達(dá)與TNBC疾病進(jìn)展有關(guān)。劉明勝等［14］研究發(fā)現(xiàn)，直腸癌組織中miR-193a-3p表達(dá)低于癌旁組織，上調(diào)miR-193a-3p的表達(dá)可以抑制直腸癌細(xì)胞SW-480的增殖。此外，臨床病理特征結(jié)果表明，腫瘤直徑≥3 cm、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織學(xué)分級(jí)為中低級(jí)、臨床分期Ⅲ期、Ki-67＞30%者miR-193a-3p表達(dá)水平較低，再次證實(shí)了miR-193a-3p與TNBC的臨床特征有關(guān)，其表達(dá)下調(diào)會(huì)促進(jìn)TNBC轉(zhuǎn)移和疾病惡化。

ATF5參與腫瘤細(xì)胞的增殖、凋亡、分化以及形成，高水平ATF5能夠促進(jìn)腫瘤的發(fā)生發(fā)展，提高腫瘤的生存和侵襲能力［15］。Zhou等［16］研究發(fā)現(xiàn)，ATF5在膀胱癌組織中表達(dá)顯著升高，可導(dǎo)致預(yù)后不良，沉默ATF5表達(dá)能抑制膀胱癌細(xì)胞的增殖和腫瘤球的形成能力。本研究結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，研究組TNBC患者血清ATF5水平升高，化療后患者血清ATF5水平較化療前降低；治療無效組血清ATF5水平較治療有效組升高，提示高水平ATF5可促進(jìn)TNBC疾病進(jìn)展。楊凌辰等［17］研究也表明，ATF5在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)顯著升高，且與FIGO分期有關(guān)，ATF5高表達(dá)者5年生存率低于低表達(dá)者。本研究發(fā)現(xiàn)，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤直徑≥3 cm、組織學(xué)分級(jí)為中低級(jí)、臨床分期Ⅲ期、Ki-67＞30%者血清ATF5水平較高，證實(shí)了血清ATF5與上述病理特征有關(guān)。本研究多因素分析發(fā)現(xiàn)，血清miR-193a-3p水平、ATF5水平、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤直徑、組織學(xué)分級(jí)、TNM分期是化療療效的影響因素，血清miR-193a-3p、ATF5表達(dá)水平可能對(duì)TNBC患者化療療效具有一定的評(píng)估價(jià)值。

綜上所述，TNBC患者血清miR-193a-3p水平較低、ATF5水平較高皆為化療療效的影響因素，但兩者在TNBC中的具體調(diào)控機(jī)制有待進(jìn)一步探究。

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（2024-07-01收稿 2024-10-10修回）

（本文編輯 陸榮展）