酶聯(lián)免疫吸附法在萍鄉(xiāng)市無償獻(xiàn)血人群HTLV篩查結(jié)果中的應(yīng)用價(jià)值

摘要：目的" 研究酶聯(lián)免疫吸附法在萍鄉(xiāng)市無償獻(xiàn)血人群人類嗜T淋巴細(xì)胞病毒（HTLV）篩查結(jié)果中的應(yīng)用價(jià)值。方法" 選取2022年3月-2023年6月在我站無償獻(xiàn)血者12 172例為研究對象，首先采用酶聯(lián)免疫吸附法進(jìn)行HTLV篩查，初檢陽性標(biāo)本進(jìn)行雙孔復(fù)試，復(fù)試陽性標(biāo)本提取樣本血液核酸，使用熒光定量核酸擴(kuò)增（PCR）儀進(jìn)行病毒核酸擴(kuò)增檢驗(yàn)，采用ROC曲線分析酶聯(lián)免疫吸附法篩查HTLV的靈敏度、特異度，Kappa檢驗(yàn)分析酶聯(lián)免疫吸附法篩查HTLV與熒光定量PCR確證結(jié)果的一致性。結(jié)果" 12 172例無償獻(xiàn)血者通過酶聯(lián)免疫吸附法初篩發(fā)現(xiàn)陽性標(biāo)本29份，初篩陽性率為0.24%；采用熒光定量PCR確證陽性3份，確證陽性率為0.0247%；酶聯(lián)免疫吸附法篩查HTLV的靈敏度為66.67%、特異度為99.78%，ROC曲線顯示，AUC=1（Plt;0.05），Youden 指數(shù)最大為0.99；酶聯(lián)免疫吸附法篩查HTLV陽性率與熒光定量PCR確證陽性結(jié)果具有一般的一致性（Kappa=0.257，P=0.025）。結(jié)論" 酶聯(lián)免疫吸附法在無償獻(xiàn)血人群中篩查HTLV具有一定價(jià)值，但是靈敏度相對較低，存在一定的漏診、誤診。因此，臨床應(yīng)結(jié)合核酸檢驗(yàn)方法對血液標(biāo)本進(jìn)一步檢測，以提高檢驗(yàn)準(zhǔn)確率，進(jìn)而保障輸血安全。

關(guān)鍵詞：酶聯(lián)免疫吸附法；萍鄉(xiāng)市；無償獻(xiàn)血人群；HTLV篩查

中圖分類號：R181.3；R446" " " " " " " " " " " " " " " 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A" " " " " " " " " " " " " "DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2024.17.034

文章編號：1006-1959（2024）17-0154-04

Application Value of Enzyme-linked Immunosorbent Assay in HTLV Screening

Results of Voluntary Blood Donors in Pingxiang City

WEI Juan

（Laboratory Department of Pingxiang Central Blood Station，Pingxiang 337000，Jiangxi，China）

Abstract：Objective" To study the application value of enzyme-linked immunosorbent assay in human T-lymphocyte virus （HTLV） screening results of unpaid blood donors in Pingxiang City.Methods" A total of 12 172 voluntary blood donors from March 2022 to June 2023 in our station were selected as the research objects. Firstly， enzyme-linked immunosorbent assay （ELISA） was used to screen HTLV. The initial positive samples were retested by two holes. The blood nucleic acid of the retested positive samples was extracted， and the viral nucleic acid amplification test was carried out by fluorescence quantitative nucleic acid amplification （PCR） instrument. The sensitivity and specificity of enzyme-linked immunosorbent assay for screening HTLV were analyzed by ROC curve. Kappa test was used to analyze the consistency between enzyme-linked immunosorbent assay for screening HTLV and fluorescence quantitative PCR confirmation results.Results" Totally 29 positive samples were found in 12 172 voluntary blood donors by enzyme-linked immunosorbent assay， and the positive rate was 0.24%. Three positive samples were confirmed by fluorescence quantitative PCR， and the positive rate was 0.0247%. The sensitivity and specificity of enzyme-linked immunosorbent assay for screening HTLV were 66.67% and 99.78%， respectively. The ROC curve showed that AUC=1 （Plt;0.05）， and the maximum Youden index was 0.99. The positive rate of HTLV screening by enzyme-linked immunosorbent assay was generally consistent with the positive results confirmed by fluorescence quantitative PCR （Kappa=0.257， P=0.025）.Conclusion" Enzyme-linked immunosorbent assay has certain value in screening HTLV in voluntary blood donors， but the sensitivity is relatively low， and there are some missed diagnosis and misdiagnosis. Therefore， the clinical should be combined with nucleic acid test method for further detection of blood samples， in order to improve the accuracy of the test， so as to ensure the safety of blood transfusion.

Key words：Enzyme-linked immunosorbent assay;Pingxiang City;Voluntary blood donors;HTLV screening

輸血（blood transfusion）是以輸同型血為原則、通過靜脈輸注，搶救患者生命的一種急救措施，可幫助患者自身血液稀釋，改善血液循環(huán)和新陳代謝[1]。但由于血液來源較為復(fù)雜，輸血也有可能導(dǎo)致艾滋病、乙肝、人類嗜T淋巴細(xì)胞病毒（HTLV）等疾病傳播[2]。因此，如何保證血液安全是臨床值得重視的問題。HTLV是人類逆轉(zhuǎn)錄病毒，會引起T細(xì)胞白血病和毛細(xì)胞白血病的病原體[3]。相關(guān)研究顯示[4，5]，HTLV可通過輸血、注射或性接觸等途徑傳播，也可經(jīng)胎盤、產(chǎn)道或哺乳等垂直傳播。酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）是臨床進(jìn)行血液篩查的查用檢驗(yàn)方法，但是對HTLV的篩查價(jià)值尚存在爭議[5]。本研究選擇2022年3月-2023年6月我站無償獻(xiàn)血標(biāo)者12 172例血液樣本，了解萍鄉(xiāng)市無償獻(xiàn)血人群HTLV感染情況，考察對無償獻(xiàn)血者抗-HTLV的檢測是否作為該地區(qū)無償獻(xiàn)血者血液篩查的常規(guī)檢測項(xiàng)目，并探究酶聯(lián)免疫吸附法在無償獻(xiàn)血人群HTLV篩查結(jié)果中應(yīng)用價(jià)值，現(xiàn)報(bào)道如下。

1資料與方法

1.1一般資料" 選取2022年3月-2023年6月萍鄉(xiāng)市中心血站無償獻(xiàn)血者12 172例為研究對象，男6172例，女6000例；年齡18～60歲，平均年齡（45.19±3.23）歲。每份血液樣品分別用7 ml和5 ml EDTA 真空抗凝管進(jìn)行留樣保存。12 h內(nèi)進(jìn)行離心，3000 r/min 離心15 min，取離心后上層血漿，加蓋，于2～8 ℃冷藏保存48 h，若保存時間長于48 h，應(yīng)置于-20 ℃進(jìn)行保存，需長期保存應(yīng)在-40 ℃的條件下進(jìn)行。

1.2方法

1.2.1儀器" TECAN EVO 200、TECAN EVO 150全自動樣本處理系統(tǒng)，F(xiàn)AME24/30全自動酶免分析系統(tǒng)，340RT酶標(biāo)儀。試劑：北京萬泰生物藥業(yè)有限公司生產(chǎn)的抗-HTLV試劑盒。

1.2.2酶聯(lián)免疫吸附法" 采用北京萬泰生物藥業(yè)有限公司生產(chǎn)的抗-HTLV試劑盒對無償獻(xiàn)血者標(biāo)本進(jìn)行HTLV篩查，初檢陽性標(biāo)本進(jìn)行雙孔復(fù)試。復(fù)試陽性標(biāo)本提取樣本進(jìn)行確證檢驗(yàn)[6]。

1.2.3熒光定量核酸擴(kuò)增檢驗(yàn)" 對酶聯(lián)免疫吸附法檢測結(jié)果為陰性的標(biāo)本進(jìn)行核酸檢測。使用8∶1核酸混合模式進(jìn)行檢測，使用全自動混樣機(jī)將8個血液標(biāo)本進(jìn)行混合，再進(jìn)行病毒核酸的提取和純化，使用 PCR擴(kuò)增技術(shù)對酶聯(lián)免疫吸附法檢測結(jié)果為陰性和單試劑陽性標(biāo)本實(shí)行HBV、HCV、HIV核酸檢測。若混檢呈非反應(yīng)性，則為陰性，混檢呈反應(yīng)性將標(biāo)本拆分檢測，拆分后的每個結(jié)果若呈非反應(yīng)性，判定為陰性，反之為陽性[7，8]。

1.3觀察指標(biāo)" 觀察酶聯(lián)免疫吸附法篩查HTLV陽性率、熒光定量PCR確證陽性率、酶聯(lián)免疫吸附法HTLV篩查結(jié)果的靈敏度、特異度，酶聯(lián)免疫吸附法篩查HTLV與熒光定量PCR確證結(jié)果的相關(guān)性。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法" 采用統(tǒng)計(jì)軟件包SPSS 21.0版本對本研究的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，采用（x±s）表示符合正態(tài)分布的計(jì)量資料，組間兩兩比較采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料采用[n（%）]表示，采用χ2檢驗(yàn)，使用Kappa 檢驗(yàn)進(jìn)行一致性分析，Plt;0.05說明差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1酶聯(lián)免疫吸附法篩查結(jié)果" 12 172例無償獻(xiàn)血人群，通過酶聯(lián)免疫吸附法初篩，陽性標(biāo)本29份，初篩陽性率為0.24%（29/12 172）。

2.2熒光定量PCR確證陽性結(jié)果" 采用熒光定量PCR檢測確證，陽性3份，確證陽性率為0.0247%（3/12 143）。

2.3酶聯(lián)免疫吸附法篩查HTLV的靈敏度、特異度" 酶聯(lián)免疫吸附法對無償獻(xiàn)血人群進(jìn)行HTLV篩查，靈敏度為66.67%、特異度為99.78%，見表1；ROC曲線分析顯示，AUC=1（Plt;0.05），Youden 指數(shù)最大為0.99，見圖1。

2.4酶聯(lián)免疫吸附法篩查HTLV與熒光定量PCR確證結(jié)果的一致性" 酶聯(lián)免疫吸附法篩查HTLV陽性率與熒光定量PCR確證陽性結(jié)果具有一般的一致性（Kappa=0.257，P=0.025）。

3討論

HTLV的篩查技術(shù)主要有核酸檢測和血清學(xué)檢測兩種，核酸檢測方法最常用的是PCR法，通過實(shí)時熒光定量PCR技術(shù)不僅能判斷人血液中是否存在病毒基因序列，還可以精確評估病毒的載量[9，10]。 目前，HTLV 監(jiān)測工作的各試點(diǎn)篩查地區(qū)大多采用酶免試劑（單試劑）檢測獻(xiàn)血者血液標(biāo)本中的抗-HTLV，酶免反應(yīng)性標(biāo)本再使用PCR法進(jìn)行確證[11]。因?yàn)?，HTLV 目前還不是國家法定的血液篩查項(xiàng)目，因而缺少有關(guān)檢測方法的研究，并且具體的篩查方法無明確標(biāo)準(zhǔn)，如何進(jìn)行科學(xué)合理選擇是當(dāng)前研究的重點(diǎn)問題。酶聯(lián)免疫檢測具有試劑成本低，自動化程度高，檢測通量大，實(shí)驗(yàn)耗時短等優(yōu)點(diǎn)，是目前HTLV篩查最主要的方法[12，13]。然而目前關(guān)于酶聯(lián)免疫吸附法在無償獻(xiàn)血人群HTLV篩查中價(jià)值的相關(guān)研究存在差異，具體的初篩價(jià)值還需要臨床進(jìn)一步探究證實(shí)[14]。

本研究結(jié)果顯示，12 172例血液標(biāo)本通過酶聯(lián)免疫吸附法初篩，陽性標(biāo)本29份，初篩陽性率為0.24%，表明該地區(qū)無償獻(xiàn)血人群存在HTLV感染，且初篩陽性率高于已有相關(guān)研究[15]。因此，在該地區(qū)增加HTLV篩查作為無償獻(xiàn)血檢測項(xiàng)目，以預(yù)防HTLV的感染，提高輸血安全性[16]。但是相關(guān)研究顯示[17]，造成HTLV假陽性的影響因素較多，因此把對無償獻(xiàn)血者抗-HTLV的檢測作為無償獻(xiàn)血者血液篩查的常規(guī)檢測項(xiàng)目需要待研究。故，為確保血液安全和受血者的健康，建議在非常規(guī)檢測HTLV的區(qū)域，使用去白細(xì)胞的血液成分或存放14 d以上的血液成分，有效阻斷HTLV的經(jīng)輸血傳播[18]。同時研究顯示，采用熒光定量PCR確證，陽性3份，確證陽性率為0.0247%，提示酶聯(lián)免疫吸附法初篩29份陽性，核酸確診陽性3份，可見核酸檢測結(jié)果更加準(zhǔn)確，這也與孫曉通等[19]的研究相符。同時也進(jìn)一步表明酶聯(lián)免疫吸附法初篩存在較高的假陽性。因此，如果只對無償獻(xiàn)血人群血液標(biāo)本，采用酶聯(lián)免疫吸附法對HTLV進(jìn)行篩查，存在假反應(yīng)性結(jié)果，不僅會導(dǎo)致血液資源的浪費(fèi)，而且還會給獻(xiàn)血者增加不必要的心理負(fù)擔(dān)，所以對酶聯(lián)免疫吸附法反應(yīng)性的標(biāo)本進(jìn)行確證具有重要的意義。本研究發(fā)現(xiàn)，酶聯(lián)免疫吸附法對無償獻(xiàn)血人群進(jìn)行HTLV篩查，靈敏度為66.67%、特異度為99.78%，ROC曲線分析顯示，AUC=1（Plt;0.05），Youden 指數(shù)最大為0.99，提示對無償獻(xiàn)血人群應(yīng)用進(jìn)行酶聯(lián)免疫吸附法HTLV篩查敏感度較低，存在較高的假陽性。對此，無償獻(xiàn)血人群HTLV篩查應(yīng)采用酶聯(lián)免疫吸附法聯(lián)合核酸檢測，以降低假陽性。因?yàn)?，核酸檢測靈敏度和特異度均較高，可彌補(bǔ)酶聯(lián)免疫吸附法檢測的不足，減少漏檢情況的發(fā)生，使假陽性標(biāo)本檢出率進(jìn)一步降低[20]。需要注意的是，雖然核酸檢測技術(shù)可以減少血液傳染病發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)，但該技術(shù)在我國仍處于起步階段，在標(biāo)本處理、操作流程等方面仍存在不足之處，臨床還需進(jìn)一步收集相關(guān)數(shù)據(jù)信息，提升血液篩查質(zhì)量，保證輸血安全性。此外，酶聯(lián)免疫吸附法篩查HTLV陽性率與熒光定量PCR確證陽性結(jié)果具有一般的一致性（Kappa=0.257，P=0.025），提示酶聯(lián)免疫吸附法篩查無償獻(xiàn)血人群HTLV陽性率與熒光定量PCR確證陽性率結(jié)果具有一般的一致性，容易造成誤診和漏診。

綜上所述，酶聯(lián)免疫吸附法檢測HTLV的靈敏度低，應(yīng)注意假陽性問題，臨床可通過聯(lián)合檢測降低假陽性，以提高HTLV篩查質(zhì)量、輸血安全，進(jìn)一步避免血液浪費(fèi)和無償獻(xiàn)血人群流失。

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收稿日期：2023-09-14；修回日期：2023-09-24

編輯/成森