脂肪酸鈣替代魚油、豆油對大口黑鱸（Micropterus salmoides）生長性能、免疫和抗氧化能力的影響

摘"要：為研究脂肪酸鈣（Fatty acid calcium，CSFA）替代魚油、豆油對大口黑鱸（Micropterus salmoides）免疫和抗氧化能力的影響，選擇健康、大小均勻、已馴化完全、體質(zhì)量（10.00±0.1）g的大口黑鱸300尾，隨機分成5組。試驗配制5種等氮等能飼料，分別為魚油、豆油水平相等的對照組（D1）、CSFA替代魚油組（D2）、CSFA替代豆油組（D3）、全CSFA組（D4）和全豆油組（D5）。試驗為期56 d。結(jié)果表明：D1、D2、D3組的體重增長率顯著高于其他各組（P＜0.05）；CSFA替代魚油、豆油對大口黑鱸肝臟的免疫和抗氧化指標(biāo)有顯著影響（P＜0.05）；大口黑鱸肝臟酸性磷酸酶（acid phosphatase，ACP）、堿性磷酸酶（alkaline phosphatase，AKP）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）和過氧化氫酶（catalase，CAT）活性均呈先升高后降低的趨勢。其中，肝臟免疫酶ACP、AKP活性和抗氧化酶CAT、SOD活性均在D3組最高，肝臟丙二醛（malondialdehyde，MDA）含量在D3組最低。綜合考慮生長、免疫和抗氧化指標(biāo)，經(jīng)分析得出，脂肪酸鈣和魚油混合使用能提高大口黑鱸免疫和抗氧化能力。

關(guān)鍵詞：大口黑鱸（Micropterus salmoides）；脂肪酸鈣；免疫；抗氧化

我國是水產(chǎn)養(yǎng)殖大國，水產(chǎn)飼料的市場需求量巨大。脂肪、蛋白質(zhì)、碳水化合物為三大基礎(chǔ)營養(yǎng)物質(zhì)，在水產(chǎn)飼料中不可缺少。魚油、豆油是水產(chǎn)養(yǎng)殖常用的脂肪源，由于市場需求量增加，魚油、豆油進口量、價格逐年上漲。為了降低養(yǎng)殖成本，提高經(jīng)濟效益，保護環(huán)境，尋找合適的脂肪源替代品，已成為水產(chǎn)飼料業(yè)中可持續(xù)發(fā)展的重要目標(biāo)和研究熱點。如今生產(chǎn)中普遍以菜籽油（RO）、玉米油（CO）、花生油（PO）等植物性脂肪源替代魚油、豆油。研究表明：某些植物性脂肪源能替代魚油，并不產(chǎn)生不利影響^[1]。脂肪酸鈣（CSFA）是一款新型的能量飼料添加劑，富含脂肪酸，可部分地代替?zhèn)鹘y(tǒng)飼料中的谷物和脂肪。脂肪酸鈣以粉末狀呈現(xiàn)，不僅更容易添加到飼料中，并且在空氣中也不易變質(zhì)，更便于長期貯存，可以大大簡化飼料的生產(chǎn)加工過程，具有貯藏簡單、物價低等優(yōu)點^[2]。飼料中添加脂肪酸鈣的應(yīng)用主要還是在反芻動物中，現(xiàn)有的很多研究試驗主要集中在牛羊中。這些結(jié)果表明：飼料中添加脂肪酸鈣能降低血清酮體生成，調(diào)節(jié)體內(nèi)能量代謝，降低飼料成本，提高養(yǎng)殖經(jīng)濟價值等^[3]。但是目前尚未有在魚類飼料中添加脂肪酸鈣的應(yīng)用研究。

大口黑鱸（Micropterus salmoides）又稱加州鱸，是鱸形目棘臀魚科黑鱸屬魚類。加州鱸有“淡水黃魚”的美稱。大口黑鱸的優(yōu)點是適應(yīng)能力強、生長速度快、不易生病、耐寒、成長期短、肉刺少、肉質(zhì)品質(zhì)高，蛋白質(zhì)和脂肪含量較高，必需氨基酸種類非常適合人體所需要^[4]。當(dāng)前，針對大口黑鱸的研究主要集中在養(yǎng)殖、育苗、腸道消化能力和分子生物學(xué)等方面^[5-7]，還有少數(shù)研究涉及疾病和肌肉品質(zhì)^[8-10]。免疫酶和抗氧化酶都是研究魚體最主要且靈敏的生物指標(biāo)，與表觀和生物研究結(jié)果相比，在評估魚體健康狀況時，生物指標(biāo)更顯示出高靈敏度的優(yōu)點。許多研究表明營養(yǎng)和免疫力的關(guān)系很大，采用營養(yǎng)管理方式增強魚的抵抗力，以養(yǎng)代防，既解決了養(yǎng)殖方式產(chǎn)生的問題，也有益于魚的健康^[11]。

本試驗研究了脂肪酸鈣分別替代魚油、豆油對大口黑鱸肝臟免疫酶和抗氧化酶等生化指標(biāo)的影響，以期為脂肪酸鈣替代魚油、豆油的選擇提供理論優(yōu)化依據(jù)，補充大口黑鱸飼料營養(yǎng)生化指標(biāo)方面的理論數(shù)據(jù)，進一步避免由于植物性脂肪源替代魚油、豆油不適合而造成的魚健康問題，以保證養(yǎng)殖魚苗的健康狀態(tài)。

1"材料與方法

1.1"試驗飼料

1.1.1"脂肪酸鈣的制備"利用工廠剩余的邊角料皂角作為制備脂肪酸鈣的原料，然后加入無水乙醇、氫氧化鈉在水浴鍋中90 ℃進行皂化反應(yīng)，待反應(yīng)完全后加入飽和食鹽水，形成沉淀后進行抽濾，用鹽酸調(diào)pH呈酸性條件下加氯化鈣，得到本試驗所使用的脂肪酸鈣，放進105 ℃烘箱中進行烘干，將烘干后的產(chǎn)物磨成粉狀裝入塑封袋備用。

1.1.2"飼料制備"以魚粉、豆粕為蛋白質(zhì)源，魚油、豆油、脂肪酸鈣為脂肪源，面粉為糖源，配制5組等蛋白飼料?；A(chǔ)飼料組（D1）中飼料魚油和豆油含量各為4.5%，使用脂肪酸鈣分別等量替代魚油和豆油制備試驗組飼料，各試驗組飼料分別為：脂肪酸鈣＋豆油組（D2）、脂肪酸鈣＋魚油組（D3）、全脂肪酸鈣組（D4）、全豆油組（D5）。飼料原料經(jīng)粉碎后過80目篩，按配比稱重，混合至均勻，用制粒機制成直徑2.5 mm飼料，置于－20 ℃冰箱中保存待用。試驗飼料組成及營養(yǎng)水平見表1。

1.2"試驗設(shè)計及飼養(yǎng)管理

試驗用大口黑鱸為天津某養(yǎng)殖場提供，選規(guī)格整齊，健康無病的幼魚300條，初始體質(zhì)量為（10±0.1）g。試驗在河北農(nóng)業(yè)大學(xué)海洋學(xué)院科研試驗室的飼養(yǎng)系統(tǒng)中開展，試驗采用標(biāo)準(zhǔn)養(yǎng)殖缸（60 cm×50 cm×50 cm）進行飼養(yǎng)。在試驗開始前，將所有的試驗魚類在飼養(yǎng)系統(tǒng)中暫養(yǎng)約2周，暫養(yǎng)期內(nèi)投喂成品飼料，使試驗魚類逐漸適應(yīng)飼養(yǎng)條件。將試驗魚隨機分為五個組別，每個試驗組別內(nèi)有三個重復(fù)，每個重復(fù)有約20尾魚。每個試驗組分別飼喂表1中的五種飼料，每天投喂2次，投喂時間分別為8：00和18：00，試驗為期56 d。試驗水體溶氧5.5～7.5 mg/L，水溫（25.0±1.5）℃，pH值7.6～8.1，氨氮＜0.2 mg/L，亞硝酸鹽＜0.05 mg/L。

1.3"樣品采集及指標(biāo)測定

1.3.1"樣品采集與魚體測量"養(yǎng)殖試驗完成后，所有試驗魚經(jīng)過饑餓24 h后，對每個重復(fù)分別進行測量、稱重。在每個試驗缸中，分別隨機取10尾試驗魚以50 mg/L的MS-222溶液注射于魚體腹腔中進行麻醉，解剖取出肝臟，經(jīng)液氮凍存24 h后轉(zhuǎn)到－80 ℃冰箱保存，用于測定相應(yīng)免疫和抗氧化指標(biāo)。

1.3.2"飼料和魚體營養(yǎng)成分"飼料的營養(yǎng)成分按照以下方法測定：在105 ℃烘干至恒重測定水分含量，采用微量凱氏定氮法測定粗蛋白質(zhì)含量，采用Soxhlet石油醚萃取法測定粗脂肪含量，在馬弗爐550 ℃烘干至恒重測定粗灰分含量。

1.3.3"生長性能

增重率（Weight gain rate，WGR，%）、特定生長率（Specific growth rate，SGR，%/d）、飼料效率（Feed conversion ratio，F(xiàn)CR）、成活率（Survival ratio，SR，%）按以下公式計算。

WGR= （Wt-W0）/W0×100%；

SGR=（ln Wt-ln W0）/t×100%；

FCR=c/（Wb-Wa）；

SR=e/f×100%；

式中：W0為初始魚平均體質(zhì)量，g；Wt為終末魚平均體質(zhì)量，g；t為投喂天數(shù)，d；Wa為初始魚總質(zhì)量，kg;Wb為終末魚總質(zhì)量，kg；c為飼料消耗量，kg；e為存活魚的數(shù)量，尾；f為魚的總數(shù)量，尾。

1.3.4"血清和肝臟生化指標(biāo)"肝臟免疫和抗氧化指標(biāo)均采用南京建成生物工程研究所試劑盒測定，嚴(yán)格按照說明書進行檢測。組織勻漿液中蛋白質(zhì)濃度采用考馬斯亮藍法^[12]測定。

1.4"數(shù)據(jù)統(tǒng)計

所有數(shù)據(jù)均使用SPSS 19軟件進行單因素方差分析（ANOVA），顯著水平是P＜0.05，所有結(jié)果均以（平均值±平均值標(biāo)準(zhǔn)誤差）表示。

2"結(jié)果

2.1"脂肪酸鈣替代魚油、豆油對大口黑鱸生長的影響

由表2可知，與D1組相比，D2、D3組終末體質(zhì)量、增重率和特定生長率差異不顯著（P＞0.05），D4、D5組差異顯著（P＜0.05）。與D1組相比，D2、D3組飼料系數(shù)差異不顯著（P＞0.05），D4、D5組差異顯著（P＜0.05）。

2.2"脂肪酸鈣替代魚油、豆油對大口黑鱸肝臟免疫能力的影響

由表3可知，與D1組相比，D4、D5組ACP差異不顯著（P＞0.05），D2、D3組差異顯著（P＜0.05）。與D1組相比，D2、D4、D5組AKP差異不顯著（P＞0.05），D3組差異顯著（P＜0.05）。D3組的肝臟ACP、AKP活性最高。

2.3"脂肪酸鈣替代魚油、豆油對大口黑鱸肝臟抗氧化能力的影響

由表4可知，與D1組相比，D2、D3、D4和D5組SOD、CAT活性差異顯著（P＜0.05）。與D1組相比，D2、D3、D4和D5組MDA差異不顯著（P＞0.05）。D3組的肝臟SOD、CAT活性最高、MDA活性較低。

3"討論

3.1"脂肪酸鈣替代魚油、豆油對大口黑鱸生長性能的影響

生長性能是魚類營養(yǎng)狀況的重要指標(biāo)。在本試驗中，與D1組相比，D2、D3組無顯著性差異。D4、D5組降低了生長性能，從飼料系數(shù)結(jié)果來看，可能是食用量導(dǎo)致了本次試驗結(jié)果。

3.2"脂肪酸鈣替代魚油、豆油對大口黑鱸免疫的影響

為了適應(yīng)不同脂肪來源的飼料，魚類體內(nèi)的免疫酶活性也相應(yīng)不同^[13]。肝臟中的免疫酶活性會影響魚類的免疫系統(tǒng)，從而間接反映出食用這種飼料的魚類的健康狀況。孫靜秋等^[14]研究認(rèn)為AKP、ACP在水產(chǎn)動物的健康生長和免疫性能中扮演著重要的角色。在本試驗中，大口黑鱸肝臟中的免疫酶活性均受飼料組成的顯著影響，其免疫酶活性ACP、AKP在D3組較高，即該結(jié)果提示，脂肪酸鈣和魚油混合使用能一定程度提高大口黑鱸的免疫能力，與吳仁福等^[15]對三疣梭子蟹（Portunus trituberculatus）、Xu等^[16]對大黃魚（Larimichthys crocea）和Montero等^[17]對銀頭鯛（Sparus aurata）的研究結(jié)果一致。而本試驗中其他組結(jié)果與Agh等^[18]對虹鱒（Oncorhynchus mykiss）的研究結(jié)果相似，飼料中高植物性脂肪源并未顯著影響肝臟免疫性能。

本次研究通過上述免疫酶活性指標(biāo)的結(jié)果，確定了D3組即脂肪酸鈣替代豆油后AKP、ACP對大口黑鱸的免疫發(fā)揮積極作用。

3.3"脂肪酸鈣替代魚油、豆油對大口黑鱸抗氧化能力的影響

SOD和CAT是主要的抗氧化酶，都可以高效消除魚體的類脂性過氧化物質(zhì)^[19]。MDA也是脂質(zhì)過氧化的主要最終產(chǎn)品，能夠反映脂質(zhì)過氧化的速度以及自身的抗氧化水平^[20]。本試驗結(jié)果顯示，不同脂肪來源對大口黑鱸肝臟的SOD和CAT活性以及 MDA 活性有顯著影響，兩種抗氧化酶的活性呈相似趨勢，而肝臟中的 MDA 含量則是先降低后升高。類似研究發(fā)現(xiàn)，D3組即脂肪酸鈣和魚油混合使用的試驗結(jié)果與亞成體三疣梭子蟹^[21]和黃鰭鯛（Acanthopagrus latus）^[22]的肝臟抗氧化性的試驗結(jié)果相似。不同的是，Sun等^[23]對羅氏沼蝦的研究結(jié)果顯示，肝臟抗氧化活性與飼料植物性脂肪源水平?jīng)]有關(guān)系，并未出現(xiàn)下降趨勢。造成上述研究差異的原因，可能是Sun等^[23]設(shè)置的植物油替代水平只有6%，這一水平剛好處于肝臟SOD、CAT活性下降之前的梯度，未設(shè)置到超過魚體承受限度的水平梯度^[24]。本次研究中造成D2、D4和D5組的抗氧化能力較差的原因可能是由于魚類對富含植物脂肪的飼料的耐受性較低，換言之，當(dāng)增加植物性脂肪含量時，為對抗富含高植物脂肪的飼料造成的氧化損傷，肝臟中SOD和CAT的活性會增加，從而消除脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物MDA，減少MDA造成的傷害。但當(dāng)植物脂肪含量超過魚體耐受閾值時，肝臟SOD和CAT含量下降，消弱脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物MDA的能力下降。這一推測從本研究中D2、D4和D5組肝臟SOD、CAT酶活性較低，而MDA含量較高的結(jié)果中也得到驗證，即抗氧化系統(tǒng)的失衡降低了大口黑鱸肝臟的抗氧化能力。

上述研究結(jié)果提示，飼料中含有大量植物性脂肪源時，大口黑鱸肝臟的抗氧化能力保持在較低水平，對魚類的健康成長產(chǎn)生了不利影響。

4"結(jié)論

與對照組相比，用脂肪酸鈣分別和魚油、豆油混合使用，并未影響大口黑鱸的生長性能，但用脂肪酸鈣和豆油分別作為唯一的脂肪源降低了大口黑鱸的生長性能。

脂肪酸鈣和魚油混合使用作為脂肪來源后對大口黑鱸的免疫及抗氧化能力有一定的促進作用。綜合考慮各項生化指標(biāo)，分析得出，D3組即脂肪酸鈣和魚油組的免疫、抗氧化能力較高。

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Effects of dietary fatty acid calcium replacing fish oil and soybean oil on growth performance，immunity and antioxidant capacity in largemouth bass （Micropterus salmoides）

HUANG Xiaorong，XIA Hui

（Ocean College，Hebei Agriculture University，Qinhuangdao 066000，China）

Abstract：To investigate the effect of fatty acid calcium （CSFA） replacing fish oil and soybean oil on the immunity and antioxidant capacity of largemouth bass （Micropterus salmoides）， 300 healthy largemouth bass of uniform size，with body weight of （10.00±0.1）g/ind. had been domesticated completely，and were randomly divided into five groups. Five kinds of isonitrogenous and isoenergetic diets were prepared，which were control （D1） group with equal levels of fish oil and soybean oil，CSFA replacing fish oil （D2） group ，CSFA replacing soybean oil （D3） group，all-CSFA （D4） group and all-soybean oil （D5） group. The experimental period was 56 d. The results showed that，the body weight growth rate of D1，D2 and D3 groups was significantly higher than that of the other groups （P＜0.05）. CSFA replacement of fish oil and soybean oil in diet had significant effects on the immunological and antioxidant indices of serum and liver of the fish （P＜0.05）. The hepatic acid phosphatase （ACP），alkaline phosphatase （AKP），superoxide dismutase （SOD），and catalase （CAT） activities in the liver of the fish followed a trend of increasing firstly and then decreasing. Among them，the activities of hepatic immunoenzymes ACP， AKP and antioxidant enzymes CAT， SOD were the highest in group D3，and hepatic malondialdehyde （MDA） content was the lowest in group D3. Considering the growth，immunity and antioxidant indexes，it was concluded that the suitable group for largemouth bass artificial compound feed was group D3.

Key words：Micropterus salmoides; fatty acid calcium； immunity; antioxidant

（收稿日期：2024-07-27）