下瘀血湯對非酒精性脂肪性肝病小鼠模型腎損傷的干預(yù)作用及其機制

摘要：目的探討高脂飲食（HFD）誘導(dǎo)非酒精性脂肪性肝?。∟AFLD）對小鼠腎臟的影響，以及下瘀血湯對NAFLD小鼠模型的保護作用及其機制。方法選取2020年9月—2021年9月在上海中醫(yī)藥大學附屬普陀醫(yī)院健康對照及NAFLD患者各25例，檢測總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、尿素氮（BUN）、肌酐（Cr）及尿酸（UA）水平；將24只雄性C57BL/6小鼠隨機分為對照組（LFD組）、高脂組（HFD組）及高脂+下瘀血湯組（XYXD組），每組8只，第13周開始給予下瘀血湯每日1次灌胃至18周末，維持6周。檢測各組TC、TG、BUN及Cr水平。HE、油紅O染色觀察肝臟和腎臟病理變化，免疫組化雙染技術(shù)檢測CD68和α-SMA表達。實時熒光定量PCR檢測腎組織固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白1（SREBP1）、脂肪酸合酶（FASN）、IL-6、TNF-α、結(jié)蛋白（Desmin）和α-平滑肌肌動蛋白（α-SMA）的mRNA表達。Western Blot檢測SREBP1和TNF-α蛋白水平。計量資料多組間比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用LSD-t檢驗；兩組間比較采用成組t檢驗。結(jié)果與健康對照組患者相比，NAFLD患者TC、TG、BUN、Cr、UA水平均升高（P值均lt;0.05）。與LFD組小鼠相比，HFD組小鼠體質(zhì)量、TC、TG、BUN、Cr水平均升高（P值均lt;0.001）；與HFD組相比，XYXD顯著抑制NAFLD小鼠TC、TG、BUN、CR表達（P值均lt;0.001）。肝臟病理學顯示：HFD組小鼠肝脂肪變及炎癥浸潤較LFD組顯著增加，而XYXD組病變顯著減輕。腎臟病理學顯示：與LFD組相比，HFD組腎組織炎性浸潤明顯，脂肪變顯著，腎臟膠原形成明顯；與HFD組相比，XYXD顯著減輕炎癥浸潤、抑制脂肪變及腎臟膠原形成。實時熒光定量PCR結(jié)果顯示：與LFD組相比，HFD組腎組織中SREBP1、FASN、IL-6、TNF-α、Desmin和α-SMA的mRNA相對表達水平均顯著升高（P值均lt;0.001），XYXD組較HFD組均顯著降低（P值均lt;0.001）。Western Blot結(jié)果顯示：與LFD組比較，HFD組SREBP1及TNF-α蛋白表達水平均明顯上調(diào)（P值均lt;0.05）；與HFD組比較，XYXD組SREBP1及TNF-α蛋白表達水平均明顯下調(diào)（P值均lt;0.05）。免疫組化染色結(jié)果顯示：HFD組α-SMA和CD68陽性染色及雙陽性染色較LFD組均顯著升高（P值均lt;0.05），XYXD組較HFD組均顯著下降（P值均lt;0.05）。結(jié)論HFD可誘導(dǎo)腎臟脂肪變、炎癥浸潤及膠原形成，下瘀血湯可能通過抑制腎組織巨噬細胞與肌成纖維細胞表達發(fā)揮腎臟保護作用。

關(guān)鍵詞：非酒精性脂肪性肝?。簧攀?，高脂；腎損傷；下瘀血湯；小鼠，近交C57BL

基金項目：國家自然科學基金（82004106）；上海市自然基金（20ZR1450300）；上海市普陀區(qū)自主創(chuàng)新項目（ptkwws202223）；上海市中醫(yī)藥高層次人才引領(lǐng)計劃（ZY〔2021-2023〕-0403）；上海市普陀區(qū)杏林優(yōu)青培養(yǎng)計劃（ptxlyq2301）

Effect of Xiayuxue Decoction against renal injury in mice with non-alcoholic fatty liver disease and its mechanism

ZHAO Xina，WANG Zhiyia，TAO Leb，c，YANG Guangyuea，ZHANG Weia，WU Liub，c，MA Wentingb，c，CHEN Qianc，LIU Xulingb，c，LIU Chenga，b.（a.Central Laboratory，b.Laboratory of Liver Diseases，c.Department of Infectious Diseases，Putuo Hospital Affiliated to Shanghai University of Traditional Chinese Medicine，Shanghai 200062，China）

Corresponding authors：LIU Cheng，liucheng0082010@163.com（ORCID：0000-0002-8741-6169）；LIU Xuling，lxlqiqi@163.com（ORCID：0000-0003-3994-8475）

Abstract：Objective To investigate the effect of non-alcoholic fatty liver disease（NAFLD）induced by high-fat diet（HFD）onthe kidneys of mice and the protective effect and mechanism of Xiayuxue Decoction.Methods A total of 25 healthy controls and 25 NAFLD patients who attended Putuo Hospital Affiliated to Shanghai University of Traditional Chinese Medicine from September 2020 to September 2021 were enrolled，and the levels of total cholesterol（TC），triglyceride（TG），blood urea nitrogen（BUN），creatinine（Cr），and uric acid（UA）were measured.A total of 24 male C57BL/6 mice were randomly divided into low-fat diet（LFD）group，HFD group，and HFD+Xiayuxue Decoction group（XYXD group），with 8 mice in each group，and since week 13，XYXD was administered by gavage once a day for 6 weeks till the end of week 18.The level of TC，TG，BUN，and Cr were measured for each group.HE staining and oil red staining were used to observe the pathological changes of the liver and the kidneys；immunohistochemical double staining was used to measure the expression levels of CD68 and alpha-smooth muscle actin（α-SMA）；quantitative real-time PCR was used to measure the expression levels of sterol regulatory element binding protein 1（SREBP1），fatty acid synthase（FASN），interleukin-6（IL-6），tumor necrosis factor-α（TNF-α），Desmin，andα-SMA in renal tissue；Western blot was used to measure the protein expression levels of SREBP1 and TNF-α.A one-way analysis of variance was used for comparison of continuous data between multiple groups，and the least significant difference t-test was used for pairwise comparison；the independent-samples t-test was used for comparison between two groups.Results Compared with the healthy controls，NAFLD patients showed significant increases in the levels of TC，TG，BUN，Cr，and UA（all Plt;0.05）.Compared with the LFD group，the HFD group had significant increases in body weight，TC，TG，BUN，and Cr（all Plt;0.001），and compared with the HFD group，the XYXD group showed significant inhibition of the expression of TC，TG，BUN，and Cr（all Plt;0.001）.Liver pathological examination showed that compared with the LFD group，the HFD group showed significant increases in hepatic steatosis and inflammatory infiltration，while the XYXD group showed significant alleviation of lesions.Renal pathological examination showed that compared with the LFD group，the HFD group had significant inflammatory infiltration，steatosis，and collagen formation in renal tissue，and compared with the HFD group，XYXD significantly alleviated inflammatory infiltration and inhibited steatosis and collagen formation.Quantitative real-time PCR showed that compared with the LFD group，the HFD group had significant increases in the relative mRNA expression levels of SREBP1，F(xiàn)ASN，IL-6，TNF-α，Desmin，andα-SMA in renal tissue（all Plt;0.001），and compared with the HFD group，the XYXD group had significant reductions in the relative expression levels of these indicators（all Plt;0.001）.Western blot showed that compared with the LFD group，the HFD group had significant increases in the protein expression levels of SREBP1 and TNF-α（Plt;0.05），and compared with the HFD group，the XYXD group had significant reductions in the protein expression levels of SREBP1 and TNF-α（Plt;0.05）.Immunohistochemical staining showed that compared with the LFD group，the HFD group had significant increases in the positive staining or the double positive staining ofα-SMA and CD68（Plt;0.05），and compared with the HFD group，the XYXD group showed significant reductions（Plt;0.05）.Conclusion HFD can induce renal steatosis，inflammatory infiltration，and collagen formation，and XYXD might exert a protective effect on the kidneys by inhibiting the expression of macrophages and myofibroblasts in renal tissue.

Key words：Non-alcoholic Fatty Liver Disease；Diet，High-Fat；Kidney Injury；Xia Yu Xue Decoction；Mice，Inbred C57BL

Research funding：National Natural Science Foundation of China（82004106）；Shanghai National Natural Science Foundation（20ZR1450300）；Indenpent Innovation of Shanghai Putou District Project（ptkwws202223）；Shanghai Traditional Chinese Medicine High level Talent Leading Plan（ZY［2021-2023］-0403）；Putuo Xinglin Excellent Youth Training Program（ptxlyq2301）

高脂肪、高糖食物攝入將導(dǎo)致血脂代謝紊亂［1-2］、非酒精性脂肪性肝?。∟AFLD）的發(fā)生，增加慢性腎病和心血管等疾病發(fā)生風險，腎損傷加重而致的腎功能衰竭嚴重危害人類健康。目前，針對NAFLD進展過程中腎臟病理病變研究相對較少［3-4］。

下瘀血湯出自東漢張仲景的《金匱要略》，被廣泛用于治療產(chǎn)后腹痛、慢性肝病、肝硬化、非酒精性脂肪肝等疾?。?-8］。20世紀50～60年代，已故上海名醫(yī)姜春華教授首先使用下瘀血湯治療血吸蟲性肝硬化和肝纖維化，此后歷經(jīng)中醫(yī)肝病研究幾代人的傳承，下瘀血湯已成為治療瘀血阻絡(luò)型疾病的經(jīng)典方劑。NAFLD的臨床用藥大數(shù)據(jù)文獻分析顯示：活血化瘀類中藥為使用最廣泛的藥物，因此，下瘀血湯臨床治療NAFLD具有理論基礎(chǔ)。本課題組前期發(fā)現(xiàn)下瘀血湯可改善膽堿蛋氨酸缺乏（methionine and choline deficient，MCD）小鼠模型的脂肪變及高脂飲食（HFD）誘導(dǎo)的NAFLD形成［9-11］，但對腎臟的影響尚未涉及，故本研究將通過NAFLD患者和HFD誘導(dǎo)的NAFLD小鼠模型，探討NAFLD對腎臟的影響，以及下瘀血湯的干預(yù)作用及機制。

1資料與方法

1.1研究對象收集2020年9月—2021年9月在上海中醫(yī)藥大學附屬普陀醫(yī)院體檢患者的病歷資料，年齡18～70歲，分析年齡、性別、血脂及腎功能，其中健康對照受試25例（對照組），NAFLD患者25例（NAFLD組）。診斷均符合《非酒精性脂肪性肝病診療指南（2018年更新版）》中對NAFLD的診斷標準［12］，均經(jīng)腹部B超和/或腹部CT等檢查確診。納入標準：（1）年齡18～70歲，性別不限；（2）既往未接受保肝降脂等治療；（3）每周飲酒量lt;100 g；（4）視聽、溝通能力正常，配合度良好；（5）腎、肝等重大臟器功能無異常。排除標準：（1）合并病毒性肝炎等其他肝病者；（2）明確為肝豆狀核變性、妊娠、藥物NAFLD者；（3）合并免疫缺陷性疾病或存在凝血功能障礙者；（4）同期參與其他研究者；（5）合并其他影響糖脂代謝疾病者；（6）合并全身嚴重感染性疾病者；（7）合并惡性腫瘤者、血液系統(tǒng)疾病、心腦卒中、內(nèi)分泌系統(tǒng)疾?。唬?）存在藥物依賴史、吸毒史、酒精成癮史者；（9）入組時服用影響肝腎功能藥物者。

1.2動物及造模6～8周齡雄性C57BL/6小鼠，購自上海斯萊克實驗動物公司，動物生產(chǎn)許可證號：SYXK（滬）2019-0006，飼養(yǎng)于上海中醫(yī)藥大學附屬普陀醫(yī)院實驗動物中心，使用許可證號：SYXK（滬）2019-0019。24只雄性C57BL/6小鼠按照隨機數(shù)法分為對照組（LFD組）、高脂組（HFD組）及高脂加下瘀血湯組（XYXD組，0.4678 g/kg，相當于75 kg成人體質(zhì)量的10倍量），每組8只，高脂飲食第13周開始給予下瘀血湯每日1次灌胃6周至18周末。下瘀血湯所含的大黃（掌葉大黃，青海）、桃仁（山西）、蟲（江蘇）均購自上海華宇藥業(yè)，由上海中醫(yī)藥大學附屬曙光醫(yī)院制備。具體制備方法：大黃2.0 kg、桃仁2.0 kg和蟲1.2 kg，各自制成粗粉，分別加入8倍量20%乙醇浸泡1 h后混合；回流提取2次，先加20%乙醇回流提取30 min，過濾收藥汁；藥渣再加6倍量20%乙醇回流提取1 h，過濾收藥汁。合并兩次所收藥汁，真空干燥稱重為0.585 kg，每克所含生藥量為8.889 g，臨用前配制成濃度為0.63 g/mL的下瘀血湯藥液。

1.3生化檢測血脂代謝及腎功能檢測采用中國南京建成有限公司試劑盒（貨號：A110-2-1、A111-2-1、C013-2-1、C011-2-1）。

1.4腎組織病理染色選取腎組織，10%中性福爾馬林固定，自動脫水機逐級脫水，包埋、4μm切片。Leica全自動染色機進行HE染色，觀察組織學形態(tài)，由本院病理科2位醫(yī)師盲法閱片評估NAS評分。

1.5免疫組織雙染免疫組化雙染采用德國Vector公司雙染試劑盒（貨號：MP-7714），方法按照說明書操作，但稍作調(diào)整［13］：常規(guī)脫蠟至水，Tris-EDTA抗原修復(fù)，阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，血清封閉，一抗α-SMA（英國Abcam，貨號124964），4℃孵育過夜，滴加二抗（德國Vector，貨號BA1000），滴加A+B（德國Vector，貨號PK-6100），DAB顯色（中杉金橋，貨號ZLI-9018），PBS洗；滴加一抗CD68（中杉金橋，貨號ZM-0060），4℃孵育過夜，PBS清洗，滴加德國Vector雙染試劑盒中二抗，37℃孵育1 h，PBS清洗，AP（藍色）顯色液顯色，水洗后蘇木素復(fù)染，充分水洗，無水乙醇脫水，二甲苯透明，封片。日本Olympus顯微鏡和DP72拍照系統(tǒng)，觀察，讀片，拍照。采用Image-pro plus 6.0軟件統(tǒng)計并分析圖片中陽性面積。

1.6油紅O染色采用冰凍切片機對冰凍組織切片，利用油紅對冰凍切片進行染色，油紅-O與dd-H2O按3∶2配比稀釋，60%異丙醇清洗，油紅O染色15 min，晾干，純水清洗，蘇木素染核15 s，甘油明膠封片，鏡檢，觀察肝組織脂肪病變程度。

1.7天狼星紅染色石蠟切片脫蠟至水，蒸餾水5 min×3次，滴加天狼星紅染色液，30°C孵育30 min，無水乙醇沖洗，晾干后封片。

1.8 Western Blot檢測將腎組織加入預(yù)冷的RIPA裂解液提取蛋白，BCA法（美國Thermo scientific公司，型號23227）測定總蛋白濃度。4℃下12 000 r/min離心15 min，取上清。取20μg樣品，10%SDS-PAGE電泳，100 V轉(zhuǎn)移1 h至PVDF膜，封閉1 h；一抗TNF-α（1∶500）（英國Abcam，貨號1793）及SREBP1（1∶2 000）（英國Abcam，貨號28481）4℃過夜，二抗室溫孵育45 min，ECL顯影，采用Image J分析Western Blot的蛋白表達灰度值。

1.9實時熒光定量PCR（RT-PCR）Trizol法提取肝臟RNA，將提取的總RNA溶解于DEPC水，測RNA濃度。逆轉(zhuǎn)錄：按日本Takara逆轉(zhuǎn)錄試劑盒（RR037A）進行，反應(yīng)條件：37℃15 min，85℃5 s，4℃15 min。擴增：取cDNA 3μL加SYBR Green 5μL，上游引物0.4μL，下游引物0.4μL，ddH2O 1.2μL，制成10μL體系，條件為：95℃、30 min預(yù)變性，95℃、5 s變性，60℃、30 s退火，40個循環(huán)，60℃、1 min延伸。18S rRNA為內(nèi)參，2?ΔΔCt法分析計算目的基因表達。檢測：α-平滑肌肌動蛋白（α-SMA）、結(jié)蛋白（Desmin）、TNF-α、IL-6、脂肪酸合酶（FASN）和固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白1（SREBP1）mRNA表達，引物由中國上海生工合成，引物序列見表1。

1.10統(tǒng)計學方法使用SPSS 20.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析。計量資料以±s表示，多組間比較采用單因素方差分析，進一步兩兩比較采用LSD-t檢驗；兩組間比較采用成組t檢驗。Plt;0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2結(jié)果

2.1研究人群基本特征對照組25例，其中男16例，女9例；平均年齡（41.88±12.12）歲。NAFLD組25例，其中男14例，女11例，平均年齡（48.38±13.82）歲。兩組年齡比較差異無統(tǒng)計學意義（Pgt;0.05）（表2）。

2.2兩組患者血脂與腎功能參數(shù)比較NAFLD組尿素氮（BUN）、肌酐（Cr）、尿酸（UA）、甘油三酯（TG）、總膽固醇（TC）水平均高于對照組（P值均lt;0.05）（表2）。

2.3下瘀血湯對HFD組小鼠的體質(zhì)量、血脂及腎功能的影響與LFD組相比，HFD組小鼠體質(zhì)量明顯增加（Plt;0.05），TC、TG、BUN及Cr水平均明顯升高（P值均lt;0.05）；XYXD組與HFD組相比，TC、TG、BUN及CR水平均下降，差異均有統(tǒng)計學意義（P值均lt;0.001）（表3）。

2.4下瘀血湯對HFD組小鼠肝臟炎癥及脂肪變的影響HE染色結(jié)果顯示：LFD組肝小葉結(jié)構(gòu)正常，肝細胞索從中央靜脈呈放射狀排列；HFD組小鼠小葉間炎性細胞浸潤明顯，脂肪變明顯，炎癥細胞浸潤。與HFD組比較，下瘀血湯顯著抑制炎性浸潤，脂肪變顯著減輕（Plt;0.001）。油紅O顯色提示：HFD組小鼠肝細胞內(nèi)可見紅色脂滴填充，形狀不規(guī)則的脂滴排列緊密；XYXD組脂滴較HFD組脂滴減少。各組油紅O染色陽性面積百分比差異有統(tǒng)計學意義，其中HFD組顯著高于LFD組，XYXD組與HFD組相比，油紅O染色陽性面積顯著降低（P值均lt;0.001）（圖1）。

2.5下瘀血湯可對HFD組小鼠腎臟炎癥、膠原形成及脂肪變的影響腎組織HE染色顯示：LFD組小鼠腎組織結(jié)構(gòu)正常；HFD組小鼠腎小球系膜細胞和基質(zhì)增多，可見間質(zhì)細胞增多，炎癥細胞浸潤，腎小管上皮細胞淡染，胞質(zhì)增多；XYXD組腎小球面積略有縮小，系膜增生明顯減輕（圖2）。油紅O染色結(jié)果顯示：與LFD組相比，HFD組可見大量紅色脂滴填充，脂肪沉積明顯；與HFD組相比，XYXD組脂滴明顯減少，脂肪沉積顯著減少（圖2）。與LFD組相比，HFD組油紅O染色陽性面積顯著增加，下瘀血湯干預(yù)后顯著減少（P值均lt;0.05）（表4）。天狼星紅染色結(jié)果顯示：與LFD組相比，HFD組腎小球及皮質(zhì)膠原纖維沉積顯著增多，正常結(jié)構(gòu)遭到破壞，增生的膠原明顯，而XYXD組可顯著抑制膠原沉積明顯減輕（圖2）。

RT-PCR結(jié)果顯示：與LFD組相比，HFD組TNF-α、IL-6、FASN、SREBP1、Desmin及α-SMA mRNA均顯著上升（P值均lt;0.001）（表4）；與HFD組相比，XYXD組可顯著降低其表達（P值均lt;0.001）。Western Blot結(jié)果顯示：與LFD組比較，HFD組SREBP1及TNF-α蛋白表達水平上調(diào)（P值均lt;0.05）；與HFD組比較，XYXD組SREBP1及TNF-α蛋白表達水平下調(diào)（P值均lt;0.05）（圖3，表4）。

2.6下瘀血湯對HFD組小鼠腎臟膠原沉積的影響LFD組小鼠腎組織α-SMA表達較低，HFD組小鼠α-SMA呈強陽性表達，主要分布在腎小球系膜增生和膠原形成；XYXD組α-SMA陽性表達顯著下調(diào)。CD68在LFD組小鼠腎組織中表達較低，呈弱陽性表達；HFD組小鼠腎組織CD68主要分布在腎小管周圍，呈強陽性表達，與α-SMA陽性表達位置相靠近（圖4）。免疫組化結(jié)果顯示：與LFD組相比，HFD組α-SMA、CD68表達及雙染陽性表達均顯著升高（P值均lt;0.05），XYXD顯著抑制α-SMA、CD68表達及雙染陽性表達（P值均lt;0.05）（表4）。

3討論

近年來，不健康的飲食及生活習慣導(dǎo)致NAFLD已迅速成為全球最常見的慢性肝病，目前估計影響全球高達38%的成年人口［1］。NAFLD患者發(fā)生慢性腎功能不全（chronic kidney disease，CKD）的風險隨著肝脂肪變性的嚴重程度而增加［14-15］。5%～35%的NAFLD患者罹患CKD，NAFLD成為慢性腎病的一個新興危險因素［16］，但兩者之間的機制研究目前報道較少。臨床上無論是NAFLD還是CKD目前都缺乏有效治療藥物。本研究臨床結(jié)果顯示，與健康對照組相比，NAFLD組患者血脂及腎功能指標均升高（P值均lt;0.05），提示NAFLD患者存在一定程度的腎損傷。同樣，在HFD小鼠中發(fā)現(xiàn)，其存在肝臟脂肪變及炎癥的同時，腎功能及腎臟病理學亦發(fā)生變化，包括脂肪變、炎癥及膠原形成。

中醫(yī)強調(diào)“肝腎同源”，肝腎在生理、病理上均密切相關(guān)，依據(jù)肝腎同源理論肝腎精血同源相生，肝病日久，精血衰弱，腎臟運化功能受到影響，故肝功能異常，腎功能也會出現(xiàn)不同程度的變化［17-18］。NAFLD病位在肝，與肝、脾、腎三臟有關(guān)，其性質(zhì)是本虛標實，即肝腎虧虛為本，痰濕血瘀為標。其病機或先天不足，氣血虧耗，腎陰陽皆虧，氣血停滯，痰瘀濕濁內(nèi)生，瘀阻肝脈；或脾胃運化失司，水谷不化，液聚脂凝，阻滯于肝筋膜間；或怒氣暴傷，氣機失調(diào)，津液輸布失常，郁阻于三焦膜原；或勞逸失調(diào)或瘀血內(nèi)滯［19］。

下瘀血湯由大黃、桃仁和土鱉蟲三味中藥組成，是活血化瘀的經(jīng)典方劑，主治瘀阻腹痛及瘀血阻滯、腹中癥塊等，包含大黃素、大黃酸、苦杏仁苷等多種活性成分［8］。中醫(yī)專家共識［12，20-21］意見認為，NAFLD以肝體用失調(diào)、脾腎虧虛為主要特點，痰、濕、瘀、熱等為主要病理因素，既往研究［22-23］證實，活血化瘀藥物可以發(fā)揮改善包括腎纖維化在內(nèi)的腎損傷作用，因此，在理論上下瘀血湯適用于肝腎同治。

本課題組既往實驗研究［9］已經(jīng)證實下瘀血湯對MCD誘導(dǎo)的非酒精性脂肪性肝炎小鼠模型治療有效。本研究通過HFD誘導(dǎo)的NAFLD模型發(fā)現(xiàn)，下瘀血湯可以改善腎小球系膜增生和腎臟膠原生成，減少炎癥細胞浸潤腎小球炎癥。同時，HFD組小鼠TC、TG及Cr、BUN較LFD組升高明顯，而XYXD組可改善高血脂及腎功能水平。免疫組化提示，與LFD組相比，HFD組α-SMA和CD68單染及雙染陽性均顯著升高（P值均lt;0.05），下瘀血湯顯著抑制雙陽性染色（P值均lt;0.05），XYXD組中CD68及α-SMA陽性表達較HFD組明顯減少；RT-PCR提示XYXD組同時下調(diào)SREBP1、FASN、IL-6、TNF-α、Desmin和α-SMA的mRNA相對表達量，而免疫印跡也同樣證實在HFD模型中，脂質(zhì)代謝因子SREBP1及炎癥標志物TNF-α蛋白表達較LFD組明顯升高，而下瘀血湯可下調(diào)SREBP1及TNF-α蛋白表達。

TNF-α主要由浸潤于腎間質(zhì)中的巨噬細胞、腎小球系膜細胞和小管上皮細胞產(chǎn)生，在CKD中TNF-α可以通過活化核因子-κB信號通路介導(dǎo)炎性介質(zhì)的轉(zhuǎn)錄與表達，加重腎損傷。IL是在多種細胞內(nèi)廣泛分布的細胞因子，通過激活及調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)，介導(dǎo)機體的炎癥反應(yīng)。IL-6等炎癥因子的升高在CKD患者體內(nèi)通過激活炎癥反應(yīng)的級聯(lián)誘發(fā)炎癥風暴，加劇腎臟的炎性損傷［24］。國內(nèi)外有關(guān)NAFLD與腎損傷間關(guān)系的研究很少，相關(guān)機制尚不清楚。有研究［25］表明，巨噬細胞的匯聚是慢性腎臟疾病進展過程中的一個顯著特征，與腎小球濾過率下降、預(yù)后不良密切相關(guān)。本研究提示HFD誘導(dǎo)的模型小鼠出現(xiàn)了腎臟脂肪變、炎癥浸潤及膠原沉積和膠原形成，下瘀血湯可通過抑制脂質(zhì)代謝水平，抑制巨噬細胞產(chǎn)生促炎因子，從而減少肌成纖維細胞形成而發(fā)揮腎臟保護作用。

倫理學聲明：本研究的臨床試驗方案于2020年8月25日經(jīng)上海中醫(yī)藥大學附屬普陀醫(yī)院倫理委員會審批，批號：PTEC-2020-32（Y）-1，所納入患者均簽署知情同意書；動物實驗方案于2020年9月11日經(jīng)由上海中醫(yī)藥大學附屬普陀醫(yī)院實驗動物倫理委員會審批，批號：PTEC-A-2020-31-1，符合實驗室動物管理與使用準則。

利益沖突聲明：本文不存在任何利益沖突。

作者貢獻聲明：劉成負責設(shè)計論文框架，起草論文；趙鑫、王知意、陶樂、楊廣越、張瑋負責實驗操作，研究過程的實施；馬文婷、吳柳、陳蒨負責數(shù)據(jù)收集，統(tǒng)計學分析，繪制圖表；劉成負責修改論文；劉成、劉旭凌負責擬定寫作思路，指導(dǎo)撰寫文章并最后定稿。

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收稿日期：2024-02-21；錄用日期：2024-05-20

本文編輯：王瑩

引證本文：ZHAO X， WANG ZY， TAO L， et al. Effect of Xiayuxue Decoction against renal injury in mice with non-alcoholic fatty liver disease and its mechanism[J]. J Clin Hepatol， 2024， 40 （11）： 2213-2220.

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